◆作者：高志敏劉小艷袁照紅梁祺琦黃顯會(huì)郭世寧

◆單位：1.廣東省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心 2.廣東溫氏大華農(nóng)生物科技有限公司3.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院

禽流感是由正黏病毒科流感病毒屬的A型流感病毒引起，發(fā)生于各種家禽和野鳥(niǎo)的一種急性傳染病。禽流感病毒具有人畜共患的流行病學(xué)特性，因此，防疫顯得尤為重要。疫苗的免疫是有效控制禽流感的有效手段，目前主要使用基因重組滅活疫苗對(duì)家禽進(jìn)行禽流感防疫。由于禽流感基因重組苗的抗原漂移，使禽流感疫苗僅能提供70%的保護(hù)力。然而，許多中藥具有抗病毒和增強(qiáng)免疫的作用，且應(yīng)用安全，與疫苗聯(lián)合使用可增加疫苗免疫效果。扶正解毒顆粒是由黃芪、淫羊藿、板藍(lán)根等中藥組成，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于扶正解毒顆粒的研究不多，本研究是以廣東溫氏大華農(nóng)動(dòng)物生物技術(shù)有限公司動(dòng)物保健品廠生產(chǎn)的扶正解毒顆粒為研究材料，比較了不同劑量的扶正解毒顆粒對(duì)雞禽流感疫苗免疫效果的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

扶正解毒顆粒，規(guī)格：100g(相當(dāng)于原生藥 100g)，包裝：100g/瓶，批號(hào)：20130801，廣東溫氏大華農(nóng)動(dòng)生物科技有限公司動(dòng)物保健品廠提供。

對(duì)照藥物：臨床試驗(yàn)選用黃芪多糖粉，規(guī)格：每1g黃芪多糖應(yīng)不得少于 450mg，批號(hào)：1501231，愛(ài)迪森（北京）生物科技有限公司生產(chǎn)。

重組禽流感病毒滅活疫苗（H5N1亞型，Re-6株），規(guī)格：500 羽份 /瓶，批號(hào)：0501047，廣東溫氏大華農(nóng)生物科技有限公司提供。

1日齡AA白羽肉仔雞

血凝抗原，批號(hào)：2014007，哈爾濱獸醫(yī)研究所

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)在華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院藥理研究室進(jìn)行，選用1日齡AA白羽肉仔雞300只，平均體重50g。按照體重隨機(jī)分為5組，每組60只。第一組為空白對(duì)照組（不免疫不給藥）；第二組為空白免疫對(duì)照組（免疫不給藥）；第三組黃芪多糖粉對(duì)照藥物（按推薦劑量添加飲水中給藥）處理組；第四組為扶正解毒顆粒低劑量（每升飲水添加0.5g）處理組；第五組為扶正解毒顆粒推薦劑量（每升飲水添加1.5g）處理組。

雞只6日齡開(kāi)始給藥，連續(xù)給藥5d。試驗(yàn)組和對(duì)照組均進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)管理，統(tǒng)一使用肉雞全價(jià)飼料。全部雞群在8日齡首免，23日齡進(jìn)行第二次免疫，30日齡進(jìn)行第三次免疫，見(jiàn)表2。于免疫前一天和首次免疫后14、21、28和40d，對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別翅下靜脈采血1mL，每組每次隨機(jī)抽取采10只，4℃保存，供AI抗體檢測(cè)使用。

試驗(yàn)期為7周。第1周雞舍溫度為 32～35℃，第 2周為30～32℃，以后每周下降2℃；4周后自然條件下飼養(yǎng)。

在 15、22、29 和 36 日齡每組隨機(jī)抽取8只雞處死，稱量免疫器官的重量。計(jì)算免疫指數(shù)。

1.3 檢測(cè)項(xiàng)目及方法

1.3.1 免疫器官指數(shù)的測(cè)定

在飼養(yǎng)試驗(yàn)的各階段稱重后，每組挑選8只接近平均體重的試驗(yàn)雞宰殺，分別摘取胸腺、脾臟和法氏囊并稱鮮重。

1.3.2 禽流感抗體效價(jià)

檢查各種對(duì)照。陰性血清血凝抑制滴度應(yīng)≤1∶4(22)，陽(yáng)性血清血凝抑制滴度與已知滴度不應(yīng)相差一個(gè)滴度以上。紅細(xì)胞對(duì)照無(wú)血凝現(xiàn)象。

禽流感病毒的血清血凝抑制效價(jià)≥1∶16(24)判為陽(yáng)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 扶正解毒顆粒對(duì)健康肉雞免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育的影響

2.1.1 扶正解毒顆粒對(duì)健康肉雞胸腺指數(shù)的影響

由表1統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，15、22日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組和扶正解毒顆粒低劑量組具有差異顯著（P＜0.05），推薦劑量組差異極顯著（P＜0.01）；黃芪多糖組和扶正解毒顆粒低劑量組與扶正解毒顆粒推薦劑量組具有差異顯著（P＜0.05）。29日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組和扶正解毒顆粒推薦劑量組具有差異顯著（P＜0.05），扶正解毒顆粒低劑量組無(wú)差異顯著（P＞0.05）；黃芪多糖組與扶正解毒顆粒推薦劑量組亦無(wú)差異顯著（P＞0.05）。36日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組、扶正解毒顆粒低劑量組和推薦劑量組具有差異顯著（P＜0.05)，給藥組之間無(wú)差異顯著（P＞0.05）。

2.1.2 扶正解毒顆粒對(duì)健康肉雞脾臟指數(shù)的影響

由表1統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，15日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組和扶正解毒顆粒低劑量組無(wú)差異顯著（P＞0.05），扶正解毒顆粒高劑量組具有差異顯著（P＜0.05）。22日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組、扶正解毒顆粒低劑量及推薦劑量組均有差異顯著（P＜0.05），給藥組之間無(wú)差異顯著（P＞0.05）。29日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組和扶正解毒顆粒低劑量組無(wú)差異顯著（P＞0.05），扶正解毒顆粒推薦劑量組有差異顯著（P＜0.05）；黃芪多糖組和扶正解毒顆粒低劑量組與扶正解毒顆粒推薦劑量組具有差異顯著（P＜0.05），黃芪多糖組和扶正解毒低劑量組無(wú)差異顯著（P＞0.05）。36日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組無(wú)差異顯著（P＞0.05），扶正解毒顆粒低劑量組和扶正解毒顆粒推薦劑量組具有差異顯著（P＜0.05）；黃芪多糖組與扶正解毒顆粒低劑量組和推薦劑量組具有差異顯著（P＜0.05），扶正解毒顆粒低劑量組和推薦劑量組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表1 扶正解毒顆粒對(duì)健康肉雞免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育的影響

2.1.3 扶正解毒顆粒對(duì)健康肉雞法氏囊指數(shù)的影響

由表1統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，15日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組和扶正解毒顆粒低劑量組無(wú)差異顯著（P＞0.05），扶正解毒顆粒推薦劑量組具有差異顯著（P＜0.05）；黃芪多糖組與扶正解毒顆粒低劑量組之間無(wú)差異顯著（P＞0.05）。22日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組無(wú)差異顯著（P＞0.05），扶正解毒顆粒低劑量及推薦劑量組具有差異顯著（P＜0.05）；扶正解毒顆粒低劑量組與推薦劑量組之間無(wú)差異顯著（P＞0.05）。29日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組和扶正解毒顆粒低劑量組無(wú)差異顯著（P＞0.05），扶正解毒顆粒推薦劑量組具有差異顯著（P＜0.05）；黃芪多糖組和扶正解毒顆粒低劑量組之間無(wú)差異顯著（P＞0.05）。36日齡時(shí)，與空白對(duì)照組及免疫不給藥組相比，黃芪多糖組和扶正解毒顆粒低劑量組無(wú)差異顯著（P＞0.05），扶正解毒顆粒推薦劑量組具有差異顯著（P＜0.05）；黃芪多糖組與扶正解毒顆粒低劑量組之間無(wú)差異顯著（P＞0.05）。

表2 禽流感抗體水平（log2）

2.2 扶正解毒顆粒對(duì)雞禽流感抗體效價(jià)的影響

表2統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，免疫前，各試驗(yàn)組之間的抗體水平無(wú)差異顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)開(kāi)始后，空白對(duì)照組抗體水平持續(xù)下降，其他組免疫后持續(xù)升高。三免之后抗體效價(jià)達(dá)到最高值。在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，免疫不給藥組與空白對(duì)照組相比，抗體水平無(wú)差異顯著（P＞0.05）。扶正解毒顆粒與空白對(duì)照組相比不同時(shí)間抗體水平均存在差異顯著（P＜0.05）。黃芪多糖對(duì)照組自免疫后21d起，于空白對(duì)照組存在差異顯著（P＜0.05），表明，扶正解毒顆粒較黃芪多糖粉起效更快。

免疫后14天，與免疫不給藥組相比較，扶正解毒顆粒低劑量組的抗體水平存在差異顯著（P＜0.05），扶正解毒顆粒推薦劑量組差異極顯著（P＜0.01）。免疫后21天，與免疫不給藥組相比，黃芪多糖組與扶正解毒顆粒低劑量組抗體水平存在差異顯著（P＜0.05），扶正解毒顆粒推薦劑量組差異極顯著（P＜0.01）。免疫后28天，與免疫不給藥組相比，黃芪多糖組與扶正解毒顆粒低劑量組差異顯著（P＜0.05），扶正解毒顆粒推薦劑量組差異極顯著（P＜0.01）。免疫后 40天，與免疫不給藥組相比，黃芪多糖組抗體水平差異顯著（P＜0.05），扶正解毒顆粒低劑量組和推薦劑量組差異極顯著（P＜0.01）。

3 結(jié)果與討論

試驗(yàn)表明，扶正解毒顆?？纱龠M(jìn)免疫器官的良好生長(zhǎng)發(fā)育，直接增強(qiáng)了機(jī)體的細(xì)胞免疫功能和體液免疫功能。扶正解毒顆粒是一種良好的免疫調(diào)節(jié)劑，在免疫的同時(shí)，服用扶正解毒顆粒，能夠提高機(jī)體的免疫應(yīng)答，增加抗體效價(jià)，從而提高雞群的整體抵抗力。但由于中草藥具有雙向調(diào)節(jié)作用，用量太小達(dá)不到效果、而用量過(guò)大可能起到抑制作用。通過(guò)本次試驗(yàn)，按臨床推薦劑量使用扶正解毒顆粒：混飲，每1L水，0.5～1.5g，每日2次，連用3-5天，可用于禽流感疫苗免疫增強(qiáng)劑，提高機(jī)體的抗體水平。因此，扶正解毒顆粒在禽流感免疫預(yù)防中可以作為免疫增強(qiáng)劑，通過(guò)改善雞體狀況、增強(qiáng)免疫器官的機(jī)能來(lái)實(shí)現(xiàn)。在養(yǎng)雞生產(chǎn)中合理應(yīng)用，既可以提高免疫效果，提高疫苗的保護(hù)率，延長(zhǎng)免疫期，又具有毒副作用小、無(wú)殘留等優(yōu)點(diǎn)，符合綠色環(huán)保的要求，對(duì)人類健康不會(huì)產(chǎn)生不良影響，符合市場(chǎng)的需求，有著廣闊的應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn)：（略）