胸腹水細(xì)胞塊石蠟包埋聯(lián)合免疫組織化學(xué)技術(shù)在病理學(xué)診斷中的應(yīng)用價值

杜桂清 王秋紅 鄧桂霞 喬婷婷 聶艷絨 馬丹琪 賈芮

【摘 要】目的：探討細(xì)胞塊石蠟包埋及免疫組織化學(xué)染色技術(shù)在胸腹水細(xì)胞病理診斷中的意義。方法：收集有異型細(xì)胞的漿膜腔積液71 例， 進(jìn)行離心涂片、細(xì)胞塊切片HE 染色， 并進(jìn)行CK7、CK20、CDX-2、MOC-31、Calretinin、WT-1、B72.3、ER、PR、Ber-EP4、TTF-1、CA125 等免疫組織化學(xué)染色，進(jìn)行選擇性標(biāo)記。結(jié)果：常規(guī)細(xì)胞涂片厚，背景不清晰;離心沉渣包埋切片細(xì)胞多而集中，背景清晰，染色鮮艷，并有一定的組織結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)染色效果較好，陽性定位準(zhǔn)確，可靠性高。結(jié)論：細(xì)胞塊石蠟包埋及免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，能提高胸腹水腫瘤細(xì)胞的檢出率，對腫瘤的診斷、鑒別診斷及細(xì)胞來源有重要的價值。

【關(guān)鍵詞】胸腹水;細(xì)胞塊;石蠟包埋;免疫化學(xué)染色

【中圖分類號】R730.4【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1005-0019（2019）11-0-02

胸腹水是腫瘤性疾病的常見體征，胸腹水細(xì)胞學(xué)檢查是臨床最常用的方法，具有簡便、快捷、痛苦小、創(chuàng)傷小等優(yōu)點(diǎn)。通過觀察細(xì)胞的大小、形態(tài)及結(jié)構(gòu)變化，可進(jìn)行定性診斷[1]。對臨床送檢的胸腹水， 國內(nèi)大部分醫(yī)院采用直接離心涂片法來做出診斷。但在實(shí)際應(yīng)用中，我們發(fā)現(xiàn)直接涂片法存在涂片厚，細(xì)胞重疊，結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞量少而陽性檢出率低等缺點(diǎn)[2，3]，很難鑒別腫瘤細(xì)胞及增生的間皮細(xì)胞，并且不能判斷瘤細(xì)胞的起源。胸腹水細(xì)胞塊可以作為一種相對無創(chuàng)的標(biāo)本收集方式，切片可以做到背景清晰、細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整、厚薄均勻，細(xì)胞塊可以長久保存、反復(fù)切片，并且可以進(jìn)行免疫組化染色，進(jìn)一步確定腫瘤細(xì)胞的類型和來源，為臨床診療提供客觀依據(jù)[4、5]。

1 材料與方法

1.1 樣本 收集我院臨床科室送檢的胸腹水共71例。其中胸水47 例，腹水24 例。男性33例，女性38例。年齡在45-81歲。臨床明確有器官占位20例，胸腹水原因待查51例。

1.2 試劑 所有的免疫組化試劑、即用型試劑盒及DAB 顯色劑均為美國DaKO試劑，使用DaKO全制動免疫組化儀進(jìn)行實(shí)驗步驟操作。

1.3 方法 （1）收集患者胸腹水，依據(jù)胸腹水的濃度取30-90ml 進(jìn)行離心（2000r/min，5min）; （2）離心后棄去上清液，取少量沉淀做細(xì)胞涂片;（3） 在其余的沉淀中加入95%的乙醇至30ml，震蕩2min 后離心（2000r/min，5min）;（4）離心后棄去上清液，加入10%福爾馬林液體10ml固定;（5）靜置2-3h，棄去福爾馬林液體，將沉淀用紙包裹同其他組織塊一起使用全制動脫水機(jī)進(jìn)行常規(guī)處理。

2 結(jié)果

對71例疑為惡性胸腹水標(biāo)本進(jìn)行離心沉渣包埋及借助免疫組織化學(xué)染色，診斷結(jié)果：71例疑為惡性胸腹水中病變來源于肺癌為10例，來源于卵巢及輸卵管的腺癌為6例，來源于消化道的腺癌為7例，來源于乳腺癌為1例，未明確原發(fā)灶的惡性腫瘤為4例，反應(yīng)性間皮細(xì)胞增生為40例。細(xì)胞塊切片常規(guī)HE 染色，切片中細(xì)胞豐富密集，染色分明，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，具有一定的組織結(jié)構(gòu)。免疫組織化學(xué)染色陽性信號定位準(zhǔn)確，對比度好，背景干凈。

討論

胸腹水是臨床上常見的一種體征，臨床常需要在胸腹水中找脫落的癌細(xì)胞以確定有無腫瘤性病變及明確腫瘤性質(zhì)[6]。常規(guī)細(xì)胞涂片所收集的細(xì)胞數(shù)量少，常有大量紅細(xì)胞，炎性滲出物及黏液混在一起，造成背景不清晰、細(xì)胞多層重疊，給診斷造成非常大的困難。而胸腹水沉渣經(jīng)福爾馬林固定后，能像組織塊一樣進(jìn)行脫水，包埋切片[7、8]。具備以下優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，不需要過多的儀器。②可以收集所有的細(xì)胞，包埋在同一平面上，從而使碎小組織能完整切出，利于讀片。③胸腹水制成的蠟塊可以反復(fù)切片，便于會診，長期保存[2]。④可以進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，對腫瘤的類型及來源進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷與鑒別診斷。⑤通過分子標(biāo)記物的標(biāo)記，可以指導(dǎo)臨床治療方案的調(diào)整，對腫瘤的預(yù)后進(jìn)行評估。⑥隨著腫瘤個體化時代的到來，細(xì)胞塊還可以進(jìn)行分子檢測，從而實(shí)施分子靶向治療以及耐藥基因的檢測。

同時，用細(xì)胞塊做免疫細(xì)胞化學(xué)染色，能做連續(xù)切片，可以多種抗體組合運(yùn)用或?qū)δ骋惶囟?xì)胞的比較觀察， 以滿足診斷的需要及對其組織來源進(jìn)行判別; 如Calretinin、WT-1陽性多提示為增生的間皮細(xì)胞， MOC-31、B72.3、Ber-EP4陽性多提示胸腹水中見轉(zhuǎn)移癌，在此基礎(chǔ)上，結(jié)合臨床病史選擇性做免疫組化，如CK7、TTF-1陽性多提示腫瘤細(xì)胞來源于肺，CK7、CA125 陽性多提示腫瘤細(xì)胞來源于卵巢，CDX2、CK20 陽性提示腫瘤細(xì)胞來源于胃腸道;但要說明的是，抗體的組織特異性并非絕對， 多種抗體聯(lián)合進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色并設(shè)立對照有助于克服某些抗體表達(dá)意義不明確造成的困惑。

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