文/錢娟娟

采用色譜法測(cè)定可溶性磷酸鹽含量 // 由聚苯乙烯二乙烯苯樹脂填裝而成的Aminex HPLC柱，通過(guò)離子調(diào)節(jié)分配層析技術(shù)，在特定的色譜條件下，將可溶性磷酸鹽以PO43-形式被檢測(cè)出來(lái)，并用外標(biāo)法定量。

磷酸鹽常被作為重要的食品配料和功能添加劑，然而膳食中磷酸鹽食量過(guò)多，會(huì)降低人體對(duì)鈣的吸收，造成缺鈣。同時(shí)，磷酸鹽又是引起水體富營(yíng)養(yǎng)化的關(guān)鍵因素之一，是評(píng)價(jià)水體水質(zhì)的重要指標(biāo)。所以對(duì)于可溶性磷酸鹽的測(cè)定顯得尤為重要。目前實(shí)驗(yàn)室廣泛采用的測(cè)定磷酸鹽的方法——鉬銻抗分光光度法，雖然操作簡(jiǎn)單，但其絡(luò)合物穩(wěn)定時(shí)間短，檢測(cè)限高，靈敏度低，不利于樣品中微量磷的測(cè)定。

為了提高檢測(cè)靈敏度，降低檢測(cè)限，本方法采用由聚苯乙烯二乙烯苯樹脂填裝而成的Aminex HPLC 柱，通過(guò)離子調(diào)節(jié)分配層析技術(shù)（包括離子排阻、離子交換、正相和反相分配、分子量排阻和配體交換），在特定的色譜條件下，將可溶性磷酸鹽（包括H2PO4-、HPO42-、PO43-）以 PO43-形式被檢測(cè)出來(lái)，并用外標(biāo)法定量。

表1 儀器分析條件。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的七個(gè)梯度濃度配制方法。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器與試劑

1.儀器

高效液相色譜儀,分析條件，如表1所示。

2.試劑

磷酸二氫鉀：GB/T 1274-2011

高純水： MILLI-Q超純水器制備

實(shí)驗(yàn)步驟

1.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

稱取0.0266g分析純磷酸二氫鉀（99%），用適量水溶解后轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，定容后混勻，稱為磷酸二氫鉀標(biāo)準(zhǔn)母液。取7個(gè)1.5ml的離心管分別編號(hào)為 1、2、3、4、5、6、7，按表2所示，將磷酸二氫鉀標(biāo)準(zhǔn)母液稀釋成7個(gè)濃度梯度。

2.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

將上述標(biāo)準(zhǔn)系列置于離心機(jī)中離心，從低至高濃度依次進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20ul，得到不同濃度磷酸鹽的色譜圖，如圖1所示。記錄7個(gè)梯度的磷酸鹽濃度（以PO43-計(jì)，g/L）對(duì)應(yīng)的峰面積數(shù)值，如表3所示，以磷酸鹽的濃度（以PO43-計(jì)，g/L）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2所示。

圖1 磷酸根的色譜出峰圖。

圖2 利用七個(gè)濃度梯度繪制成磷酸根含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表3 七個(gè)濃度梯度對(duì)應(yīng)的色譜峰面積。

表4 10組加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的加標(biāo)回收率。

表5 6組相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差數(shù)據(jù)本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R2達(dá)到0.9994，符合線性要求，從而得到磷酸鹽濃度（以PO43-計(jì)，g/L）的計(jì)算公式如下：

Y = aX + b

式中：

Y —— 峰面積

X ——磷酸鹽的濃度（以PO43-計(jì)，g/L）

a —— 119426

b —— 0

3.樣品測(cè)定

稱量一定量的樣品，加高純水溶解，在100ml容量瓶中定容，混勻。（控制稀釋后樣品中的PO43-濃度不超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的最大測(cè)量范圍）將稀釋后的樣品離心，取上清液，進(jìn)色譜分析得到結(jié)果。

結(jié)果與討論

1.準(zhǔn)確度驗(yàn)證

向10個(gè)不同的樣品中添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)樣品，色譜分析得到結(jié)果，計(jì)算加標(biāo)回收率，回收率為96.67%～100.67%，平均值為98.67%，都在可接受的范圍內(nèi)，證明該實(shí)驗(yàn)方法符合要求的準(zhǔn)確度，如表4所示。

2.精密度驗(yàn)證

6個(gè)樣品分別重復(fù)進(jìn)樣6次，色譜分析得到結(jié)果，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，六組相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差數(shù)據(jù)本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.1%～0.34%，平均值為0.19%，證明該實(shí)驗(yàn)方法符合要求的精密度，如表5所示。

結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)利用色譜儀靈敏度高、檢測(cè)限低、精密度高的特點(diǎn)，建立了一種色譜法測(cè)定食品中可溶性磷酸鹽，操作簡(jiǎn)單方便、用時(shí)短，并且通過(guò)準(zhǔn)確度和精確度實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了該方法的可行性。 ■