周 明,吳 東,王孟春,蘇 迪,王小菲

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué),安徽 合肥 230036;2.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所,安徽 合肥 230001)

0 引言

抗生素的應(yīng)用已有70多年的歷史,將抗生素作為飼料添加劑也有數(shù)十年的歷史。飼用抗生素對畜禽起著保健和促生長等多方面的作用,然而隨著其頻繁使用,抗生素的許多毒副作用開始突顯。鑒于此,我國擬在2020年全面禁用抗生素類飼料添加劑。于是,目前迫在眉睫的任務(wù)是開發(fā)無公害的保健類飼料添加劑,以替代抗生素類飼料添加劑。

牛至又稱蘑菇草、止痢草等,其中含有揮發(fā)性油狀混合物,被稱為牛至油(Oregano oil),顏色為淡黃色或棕紅色,其主要成分為香芹酚,另外還含有歐百里香酚、對霰花烴、α-丁香烯、1-龍腦、里哪醇、麝香草酚、辣薄荷醇等[1]。牛至油有抗菌作用,可打破菌體的滲透壓平衡,使得其內(nèi)容物外流,阻礙線粒體的代謝過程,從而使細(xì)菌死亡[2]。牛至油可顯著抑制金黃色葡萄球菌,也能抑制大腸桿菌類、沙門菌類以及普通變形菌類等[3]。

韓慶功等[4]在仔豬日糧中添加牛至油制劑,結(jié)果是仔豬的日增重增加,血液中豬瘟抗體水平提高,糞中大腸桿菌數(shù)量減少。于向春等[5]在育肥豬飼糧中添加500 mg/kg的牛至油預(yù)混劑,其腹瀉率下降,飼料成本減少。王棟得等[6]在生長肉兔的日糧中使用牛至油,飼料轉(zhuǎn)化率提高,血液抗氧化酶活性增強(qiáng),丙二醛含量減少。徐善金等[7]給櫻桃谷鴨飼喂牛至油,能提高其日采食量、胸肌和腿肌率,降低料重比和腹脂率。據(jù)王芬等[8]報道,牛至油可降低東北白鵝的料重比和腹脂率。王秋梅[9]在肉用仔雞飼糧中添加牛至油,可提高其胸腺、法氏囊和脾臟指數(shù),增強(qiáng)免疫力。據(jù)王芬等[10]報道,牛至油能增強(qiáng)東北白鵝的抗氧化酶系活性,保護(hù)脂質(zhì)穩(wěn)定,清除氧自由基。黃國清等[11]將牛至油制劑應(yīng)用于肉雞,其日增重和飼料利用率都顯著增加,消化道內(nèi)有益菌乳酸桿菌增多,而有害菌大腸桿菌減少。盡管關(guān)于牛至油在動物中應(yīng)用效果的試驗較多,但是考察的指標(biāo)較單一。鑒于此,筆者在前人研究的基礎(chǔ)上較系統(tǒng)地研究了牛至油對肉用仔雞健康、生長機(jī)能、飼料轉(zhuǎn)化利用、血液生理生化及免疫指標(biāo)、消化道微生物、雞肉品質(zhì)等參數(shù)的作用,以期較全面地證實牛至油替代肉用仔雞日糧中抗生素的可能性,為安全雞肉的生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗動物為青腳麻肉用雛雞。牛至油制劑(其中含有10%牛至油),由安徽省池州市某生物科技有限公司提供。鹽霉素制劑(其中含有15%鹽霉素)和吉他霉素制劑(其中含有50%吉他霉素)都從安徽省合肥市某貿(mào)易公司購買。

1.2 基礎(chǔ)日糧

肉用仔雞的基礎(chǔ)日糧原料組成與主要營養(yǎng)成分含量如表1所示。

1.3 試驗設(shè)計方案

從出殼已1 d的青腳麻肉用雛雞群中,選取270只,并將它們劃分為3組:試驗1組(作為對照)、試驗2組和試驗3組,每組又分成3個重復(fù),每個重復(fù)有30只雛雞。給3組雞所喂的飼糧分別如下:(1)對照組雞:基礎(chǔ)日糧中加抗生素(1～3周齡階段:吉他霉素制劑50 mg/kg+鹽霉素制劑75 mg/kg;4～8周齡階段:吉他霉素制劑10 mg/kg)。(2)試驗2組雞:基礎(chǔ)日糧中加牛至油制劑50 mg/kg。(3)試驗3組雞:基礎(chǔ)日糧中加牛至油制劑100 mg/kg。飼養(yǎng)試驗周期為8周(2017年9月1日～10月26日)。飼養(yǎng)試驗的場所是安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽養(yǎng)殖試驗基地。

表1 基礎(chǔ)日糧原料組成與主要營養(yǎng)成分含量 %

注:肉小雞和肉中雞預(yù)混料主要由維生素、氨基酸和礦物鹽等構(gòu)成,不含抗微生物類藥劑。粗蛋白質(zhì)、鈣和總磷的含量為實測值,代謝能、賴氨酸和蛋氨酸的含量為計算值。

1.4 飼養(yǎng)管理方法

根據(jù)青腳麻肉用仔雞飼養(yǎng)管理的推薦方案,飼養(yǎng)3組試驗雞。在雛雞1～3日齡階段,雞舍溫度調(diào)控為35 ℃,其后每日減少1 ℃,直到室溫;在雛雞1～7日齡階段,每天光照時間為24 h;在雛雞7日齡后,白天自然光照加上夜晚1 h的人工光照。按照青腳麻肉用仔雞的免疫規(guī)程,對雞進(jìn)行免疫。3組試驗雞可自由采食和隨意飲水。

1.5 觀測的指標(biāo)

1.5.1 觀測雞群的健康狀況 在整個飼養(yǎng)試驗周期,每日定時觀察雞群的健康狀況;如果發(fā)現(xiàn)異常情況,就及時適當(dāng)處置,并作詳細(xì)的記錄。

1.5.2 測定雞的生長性能和采食量 在飼養(yǎng)試驗的起始日、雞21日齡和56日齡時,分3次對禁食12 h的空腹雞稱重;每天測定每個重復(fù)(30只)雞的耗料量。從而計算每組雞的平均日增重(average daily gain, ADG)、平均日采食量(average daily feed intake, ADFI)和飼料耗量與增重之比例(簡稱料重比,feed/gain, F/G)。

1.5.3 測定雞的血液生理生化參數(shù) 在飼養(yǎng)試驗的結(jié)束日,在每個重復(fù)中隨機(jī)選取1公和1母共2只空腹雞,每組共6只雞,通過翅靜脈采血10 mL左右,移入滅菌的離心管中,在轉(zhuǎn)速為3000 r/min條件下離心10 min,爾后分離血清,將血清置于-20 ℃的冰箱中凍存,待測以下指標(biāo):血糖(glucose, Glu)、血清中總蛋白(total protein, TP)、Ig A、Ig G、Ig M、尿素氮(urea nitrogen, UN)含量,谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamate-Pyruvate Transaminase, GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamate-Oxaloacetate Transaminase,GOT)的活性,總抗氧化力(Total Anti-Oxidant Capacity, T-AOC)等。所用的試劑購于南京建成生化試劑公司,并按照該公司推薦的方法測定以上血液生理生化參數(shù)。

1.5.4 測定雞盲腸內(nèi)微生物 將已采血的試驗雞在無菌臺上剖腹,取出盲腸,采集盲腸內(nèi)容物樣本0.5 g,置于滅過菌的離心管(10 mL規(guī)格)中,再加4.5 mL無菌的生理鹽水,充分搖勻,離心,取離心液,分別稀釋105和106倍,每個稀釋度液有2個平行樣;將稀釋的菌液樣涂布,用MRS作為乳酸桿菌的培養(yǎng)基,用MAC作為大腸桿菌的培養(yǎng)基;將含有菌液及其培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中,分別培育36 h和24 h,然后取出培養(yǎng)皿統(tǒng)計菌落形成單位(CFU)。計量單位用lg CFU/g表示。

1.5.5 測定雞胸肌的品質(zhì) 屠宰采過血的試驗雞,取出其胸肌,測定胸肌樣的pH值、失水率和色度。用數(shù)字顯示酸度計(精確度為0.01)測定胸肌樣的pH值,作為pH1;然后將胸肌樣置于4 ℃恒溫冰箱中冷存24 h,第2次測定胸肌樣的pH值,作為pH24。將胸肌樣置于4 ℃恒溫冰箱中冷存24 h,用TC-PⅡG全自動色差計測定胸肌的亮度(L*)、紅度(a*)和黃度(b*)。將胸肌樣切成長1.0 cm、寬1.0 cm、厚0.5 cm的塊狀物,稱重,作為W1;然后將該塊狀物肉樣置于兩層紗布之間,在塊狀物肉樣上、下放18層濾紙,將按此法做的紗布、濾紙、肉樣疊合體置于鐵板中,壓力升至35 kg,時間保持5 min,壓力解除后,再稱肉樣的重量,作為W2,從而計算胸肌的失水率。

1.6 統(tǒng)計分析

用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示試驗測得的數(shù)據(jù)。采用SPSS 19.0的軟件,對試驗結(jié)果作單因子方差分析,用Duncan氏法,對各組的平均數(shù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗雞群的健康情況

在飼養(yǎng)試驗的過程中,沒有觀察到試驗雞群出現(xiàn)異常情況,表明試驗雞群的健康狀況良好。

2.2 試驗雞的平均日增重與平均日采食量

其測定結(jié)果參見表2。在1～3周齡階段,試驗2組和3組雞的平均日增重與對照組比較,分別提高了8.17%(P<0.05)和7.97%(P<0.05),然而3組雞的平均日采食量無顯著的差異;試驗3組雞的飼料耗量與增重之比例最低,顯著低于對照組(P<0.05);試驗2組雞的飼料耗量與增重之比例較低,也顯著低于對照組(P<0.05)。在4～8周齡階段,3組雞的平均日增重、平均日采食量和飼料耗量與增重之比例差異都不顯著。在整個飼養(yǎng)試驗過程(1～8周齡階段),試驗2組、試驗3組雞的平均日增重都顯著高于對照組(P<0.05),分別較對照組提高了6.13%和5.77%;試驗2組、3組雞的飼料耗量與增重之比例也較低,但與對照組比較,差異不顯著。

表2 各組雞的日增重與采食量測定結(jié)果

注:同行數(shù)據(jù)后標(biāo)注相同小寫字母表示差異不顯著;標(biāo)注不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；標(biāo)注不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下同。

2.3 各組雞的血清生化指標(biāo)

表3顯示:試驗2組、3組雞的GPT活性都顯著低于對照組(P<0.05),與對照組比較,分別降低了46.48%、46.95%;試驗3組雞的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性較對照組降低了11.30%(P<0.05),但試驗2組雞的血清GOT活性和對照組無顯著的差異;試驗2組、試驗3組雞的血清總蛋白質(zhì)含量都顯著高于對照組(P<0.05),分別高于對照組14.11%和14.66%;試驗2組雞的血清尿素氮含量顯著低于對照組(P<0.05),試驗3組雞的血清尿素氮含量也低于對照組,但差異未達(dá)到顯著水平;試驗3組雞的血清Ig A含量極顯著高于對照組(P<0.01),較對照組提高了68.97%;試驗2組、3組雞的血清Ig G含量顯著高于對照組(P<0.05),分別較對照組提高了64.22%和45.87%;試驗2組、3組雞的血清Ig M含量極顯著高于對照組(P<0.01),分別較對照組提高了214.55%和301.82%;各組雞的血糖含量、總抗氧化能力無顯著差異。

表3 各組雞的血清生化指標(biāo)測定結(jié)果

2.4 各組雞的腸道菌群數(shù)量

由表4可以看出:各組雞腸道內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量雖無顯著性的差異,但在日糧中添加了牛至油制劑后,雞盲腸內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量呈現(xiàn)減少的趨勢;3組雞盲腸內(nèi)乳酸桿菌的數(shù)量無顯著的差異,這表明3種試驗處理對雞盲腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量的影響不明顯。

表4 各組雞的腸道菌群數(shù)量測定結(jié)果

2.5 各組雞的肉品質(zhì)

表5顯示:試驗3組雞的胸肌失水率顯著低于對照組的,較對照組降低了5.61個百分點;試驗2組雞的胸肌失水率與對照組無明顯的差異,可能是因為牛至油的添加量不夠;3組雞胸肌的pH1、pH24、L*(亮度)、a*(紅度)、b*(黃度)均無顯著性的差異,表明各試驗處理對這些指標(biāo)無明顯的影響。

表5 各組雞的肉品質(zhì)測定結(jié)果

3 討論

3.1 牛至油制劑對肉用仔雞生長性能與飼料轉(zhuǎn)化效率的影響

本試驗中,試驗2組和3組雞在1～3周齡階段的平均日增重分別較對照組提高了8.17%和7.97%,試驗3組和2組雞的飼料耗量與增重之比例均顯著低于對照組。這表明,牛至油制劑對肉用仔雞生長前期(1～3周齡)的保健性能、促生長作用以及提高飼料轉(zhuǎn)化率的功效大于抗生素吉他霉素和鹽霉素制劑。試驗2組和3組雞在生長后期(4～8周齡)的平均日增重也快于對照組,但差異不顯著,且3組雞間平均日增重、平均日采食量和飼料耗量與增重之比例的差異都不顯著。這證明,4～8周齡階段的雞抗病機(jī)能增強(qiáng),對保健類物質(zhì)如牛至油和抗生素等的依賴性減小。從1～8周齡的整個飼養(yǎng)周期看,試驗2組、3組雞的平均日增重都顯著高于對照組,且它們的料重比也較低。由此可以推斷,牛至油制劑對肉用仔雞的保健性能、促生長作用優(yōu)于抗生素制劑;牛至油制劑在肉用仔雞日糧中的適宜用量是50 mg/kg。黃國清等[11]和陶春衛(wèi)等[12]在試驗研究中也發(fā)現(xiàn),牛至油制劑可提高肉用仔雞的存活率和日增重,且飼料耗量與增重之比例顯著降低。

3.2 牛至油制劑對肉用仔雞血液生理生化及免疫參數(shù)的影響

參與氨基酸代謝的重要酶類谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶主要存在于肝臟和心臟等器官的細(xì)胞內(nèi),正常情況下,兩酶在血液中含量少。假如這兩種酶在血液中含量較多,或者活性較強(qiáng),那么就說明肝臟、心臟等器官的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性不夠好。本試驗中,與對照組比較,試驗2組、3組雞的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性分別降低了46.48%、46.95%,試驗3組雞的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性降低了11.30%。這是因為牛至油中含有酚羥基結(jié)構(gòu)的化合物,能增強(qiáng)抗氧化酶系的活性,具有抗氧化作用[10]。本試驗發(fā)現(xiàn):試驗2組、3組雞的血清總蛋白含量較對照組分別提高了14.11%、14.66%;試驗2組雞的血清尿素氮含量顯著低于對照組。其原因可能是被牛至油處理的試驗2組、3組雞的健康狀況更好,蛋白質(zhì)的同化過程(合成代謝)增強(qiáng),異化過程(分解代謝)相應(yīng)減弱。在本試驗中,與對照組比較,試驗3組雞的血清Ig A含量提高了68.97%,試驗2組、3組雞的血清Ig G含量分別提高了64.22%、45.87%,血清Ig M含量分別提高了214.55%、301.82%。這些結(jié)果進(jìn)一步證明牛至油可促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成,包括抗體免疫蛋白質(zhì)的合成。韓慶功等[4]在對仔豬的試驗研究中發(fā)現(xiàn),牛至油制劑可提高其平均日增重和血液中的豬瘟抗體水平;張莉等[13]的試驗研究也證明,牛至油能提高肉用仔雞血液中補(bǔ)體C3、C4和Ig G含量。

3.3 牛至油制劑對肉用仔雞腸道菌群數(shù)量的影響

當(dāng)畜禽在健康狀態(tài)下,腸道內(nèi)的有益菌為優(yōu)勢菌群,可作為消化管健康的天然保護(hù)因子,能抑制致病菌在腸道的定殖和增殖,從而防止或減輕外來的有害菌對消化管健康的威脅。在本試驗中,接受牛至油制劑處理的試驗2、3組肉用仔雞盲腸內(nèi)大腸桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量與對照組無顯著性的差異。對這個試驗結(jié)果的原因,尚不清楚,有待于進(jìn)一步研究。

3.4 牛至油制劑對胸肌品質(zhì)的影響

肖世平等[14]曾報道,植物的精油對雞肉的品質(zhì)無顯著的作用。但在本試驗中,試驗3組雞的胸肌失水率顯著低于對照組。牛至油制劑對肉類品質(zhì)起著有益作用的原因可能是:肌肉中的水分大多數(shù)以吸附態(tài)存在,肌肉中的蛋白質(zhì)攜帶負(fù)電荷,可吸附較多量的水分[15-16];接受牛至油制劑處理的雞的胸肌組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性增強(qiáng),系水力增大,因而失水率顯著降低。陳立華等[17]在肉用仔雞日糧中添加牛至油制劑100 mg/kg,結(jié)果是胸肌率和腿肌率顯著提高,腹脂率卻降低,在一定程度上改善了屠體的營養(yǎng)組成,提高了雞肉的品質(zhì)。基于本試驗對雞血清生化指標(biāo)和肉質(zhì)的測定結(jié)果推斷,牛至油制劑在肉用仔雞日糧中的適宜添加量為100 mg/kg。

總之,牛至油制劑可使肉用仔雞增重加快、雞體的營養(yǎng)生化代謝改善、免疫機(jī)能增強(qiáng)和雞肉品質(zhì)提高;牛至油制劑不僅能替代吉他霉素制劑和鹽霉素制劑,而且前者效果還好于抗生素;牛至油制劑在肉用仔雞日糧中的適宜用量是50 mg/kg(基于生產(chǎn)性能指標(biāo))～100 mg/kg(基于血液生化和肉質(zhì)指標(biāo))。