張乾　王海歐　林鳳

[摘要] 目的 研究CD133在卵巢黏液性腫瘤中的表達，并探討其臨床意義。 方法 采用免疫組織化學(xué)PV9000兩步法分別檢測CD133在25例卵巢黏液性囊腺癌、19例卵巢交界性黏液性腫瘤和22例卵巢黏液性囊腺瘤的表達水平，并分析其與卵巢黏液性腫瘤的臨床病理特征的關(guān)系。 結(jié)果 CD133在卵巢黏液性腺癌、卵巢交界性黏液性腫瘤和卵巢黏液性囊腺瘤的陽性表達率分別為72.0%、42.1%、9.1%，三組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在卵巢黏液腺癌中，CD133在中低分化組的陽性表達率高于高分化組（P<0.05），在臨床分期Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期（P<0.05）。 結(jié)論 CD133可能參與卵巢黏液性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，其蛋白檢測可能用于腫瘤惡性程度的判斷，可能對判斷卵巢黏液性癌的惡性增殖和患者預(yù)后有一定的臨床意義。

[關(guān)鍵詞] 腫瘤干細胞;CD133;卵巢黏液性腫瘤;免疫組織化學(xué)

[中圖分類號] R737.31? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2019）11-0020-04

The role of CD133 in ovarian mucinous tumors

ZHANG Qian? ?WANG Haiou? ?LIN Feng

Department of Gynecology， the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University， Wenzhou? ?325000， China

[Abstract] Objective To study the expression of CD133 in ovarian mucinous tumors and to explore its clinical significance. Methods The expression levels of CD133 in 25 cases of ovarian mucinous cystadenocarcinoma， 19 cases of ovarian borderline mucinous tumor and 22 cases of ovarian mucinous cystadenoma were detected by immunohistochemical PV9000 two-step method， and its relationship with the clinicopathological features of ovarian mucinous tumors was analyzed. Results The positive expression rate of CD133 in ovarian mucinous adenocarcinoma， ovarian borderline mucinous tumor and ovarian mucinous cystadenoma was 72.0%， 42.1%， and 9.1%， respectively. There were significant differences among the three groups（P<0.05）. In ovarian mucinous adenocarcinoma， the positive expression rate of CD133 in the moderately and poorly differentiated group was higher than that in the highly differentiated group（P<0.05）， and the positive expression rate of CD133 in clinical stage with stage Ⅲ-Ⅳ was higher than that with stageⅠ-Ⅱ（P<0.05）. Conclusion CD133 may be involved in the occurrence and development of ovarian mucinous tumors. Its protein detection may be used to judge the malignant degree of tumor， which may have certain clinical significance for judging the malignant proliferation and prognosis of ovarian mucinous carcinoma.

[Key words] Cancer stem cells; CD133; Ovarian mucinous neoplasms; Immunohistochemistry

卵巢黏液性腫瘤是常見的卵巢腫瘤之一，其中卵巢黏液性腺癌惡性程度高，多數(shù)患者就診時已屬于晚期，復(fù)發(fā)、死亡率高[1]。有研究表明腫瘤干細胞（cancer stem cells，CSCs）可能是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及發(fā)生耐藥的根源[2]。CD133是常見的腫瘤干細胞表面標(biāo)志物之一[3]，目前CD133在多種腫瘤中的表達及其功能研究已成為熱點，但在卵巢黏液性腫瘤中尚缺乏系統(tǒng)性的研究。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測CD133在卵巢黏液性腫瘤中表達情況，并探討其在卵巢黏液性腫瘤中的潛在臨床作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

病理標(biāo)本為2010年1月～2016年12月在溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科手術(shù)的患者，收集卵巢黏液性腫瘤石蠟病理標(biāo)本共66例，入選標(biāo)準(zhǔn)：排除既往有惡性腫瘤病史的患者，年齡18～69歲。所有病理標(biāo)本均經(jīng)2位病理醫(yī)師生閱片確定;根據(jù)病理分為三組，其中卵巢黏液性囊腺癌（mucinous ovarian adenocarcinoma，MOA）組25例，年齡22～69歲，其中年齡≥50歲16例，<50歲9例;病理類型高分化11例，中低分化14例;Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ～Ⅳ期9例。卵巢交界性黏液性腫瘤（mucinous borderline ovarian tumor，M-BOT）組19例，年齡20～50歲。卵巢良性黏液性囊腺瘤（mucinous ovarian cystadenoma MOC）組22例，年齡18～50歲。

1.2 實驗試劑

PV-9000兩步法免疫組織化學(xué)檢測試劑盒，鼠抗人CD133單克隆抗體、10 mmol/L枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0）、DAB顯色試劑盒等購自北京市中杉金橋生物技術(shù)公司。

1.3 實驗方法

將石蠟病理標(biāo)本切片，厚4 μm，脫蠟水化，置于10 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液中，微波修復(fù)抗原20 min，3.0%雙氧水阻斷內(nèi)源性過氧化酶，血清封閉后滴加抗CD133抗體（1：100）4 ℃過夜，加二抗后37℃溫箱孵育30 min，其余步驟常規(guī)按PV-9000方法操作，以PBS代替一抗做陰性對照，已知陽性結(jié)果作為陽性對照。

1.4 結(jié)果判斷

由2位病理醫(yī)師用雙盲法評估病理切片。CD133定位于細胞漿和細胞膜上。判斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：腫瘤細胞漿、細胞膜呈棕黃色顆粒。400倍鏡下隨機觀察5個視野，每個視野計數(shù)100個細胞中的陽性細胞數(shù)，陽性細胞數(shù)>75%為+++，51%～75%為++，26%～50%為+，≤25%為陰性。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，各組間計數(shù)資料比較，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD133在各組卵巢黏液性腫瘤的陽性表達

CD133在MOA、M-BOT、MOC的陽性表達率分別為72.0%、42.1%、9.1%，三組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1、封三圖4。

2.2 CD133表達與臨床病理特征的關(guān)系

在卵巢黏液性囊腺癌組（MOA）中，CD133的表達水平在不同年齡段之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但在不同的臨床分期和病理分級之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

卵巢黏液性腺癌是常見的卵巢惡性腫瘤之一，惡性程度高，易復(fù)發(fā)，預(yù)后差，且大部分卵巢黏液性癌術(shù)后需要化學(xué)藥物治療，但研究表明卵巢黏液性腺癌對鉑類等一線化療藥物容易產(chǎn)生耐藥性[5]。Shimada M等[6]研究發(fā)現(xiàn)，卵巢漿液性腺癌的預(yù)后顯著高于黏液性腺癌，對鉑類化療藥物敏感性分別為67.7%及12.5%，說明卵巢黏液性腺癌對鉑類的反應(yīng)明顯差于卵巢漿液性腺癌。因此，研究對耐藥的癌細胞起作用的新的化療藥物是未來卵巢黏液性腺癌研究的重要方向之一。最新提出的腫瘤干細胞理論為臨床研究提供新途徑，腫瘤干細胞具有多向分化潛能和自我更新能力，還具有藥物免疫性和高致瘤性，是形成不同分化程度腫瘤細胞和促使腫瘤不斷生長的根源，大量臨床研究表明化學(xué)藥物能殺死大部分卵巢癌細胞，卻不能完全殺死卵巢癌中存在腫瘤干細胞，故認為卵巢癌中殘存的腫瘤干細胞是卵巢癌復(fù)發(fā)、產(chǎn)生耐藥性的重要原因之一[7-9]。Bapat SA等[10]在卵巢癌患者腹水中分離獲得了干細胞樣細胞克隆，能表達多種干細胞標(biāo)志物，具有極強自我更新能力，并能夠在裸鼠體內(nèi)形成與原發(fā)腫瘤組織和細胞結(jié)構(gòu)相似的移植瘤，由此肯定了卵巢癌干細胞的存在，及其在卵巢癌發(fā)生和發(fā)展中的重要作用。

CD133是目前腫瘤干細胞標(biāo)志物的熱點研究的標(biāo)志物之一，是一種5次跨膜糖蛋白，含有865個氨基酸的單鏈多肽，分子質(zhì)量為120kD，最早發(fā)現(xiàn)于造血干細胞和神經(jīng)干細胞表面，在各類原始細胞如間質(zhì)干細胞、內(nèi)皮祖細胞等中均有特異性表達。研究發(fā)現(xiàn)CD133在腫瘤及其他組織中均有發(fā)現(xiàn)，如食管癌[11]、結(jié)腸癌[12]、胰腺癌[13]、子宮內(nèi)膜腺癌[14]等，且CD133表達陽性的腫瘤干細胞表現(xiàn)更強的成瘤性及不良預(yù)后。近年來研究發(fā)現(xiàn)CD133在多種腫瘤組織中存在，包括肝癌[15]、肺癌[16]、卵巢癌[17-18]等，具有極強致瘤能力及增殖能力。大量研究表明在卵巢癌中CD133陽性表達可能與上皮性卵巢癌的侵襲性生物學(xué)性有關(guān)[19]。O'Brien CA等[20]用流式細胞儀分離出CD133+和CD133-結(jié)腸癌細胞，并將它們移植到小鼠腎被膜下觀察成瘤性，發(fā)現(xiàn)占腫瘤細胞極少部分的CD133陽性細胞均具有成瘤性，而占大多數(shù)的CD133陰性細胞卻沒有致瘤性，由此可見，雖然CD133+細胞數(shù)目極少，卻對腫瘤的增殖、分化及復(fù)發(fā)有著極為重要的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，MOC組中CD133表達陽性率顯著低于M-BOT組，而M-BOT組中CD133表達陽性率又顯著低于MOA組，提示在MOA、M-BOT和MOC三組中CD133表達陽性率逐步增高，可能提示檢測CD133陽性表達率有助于判斷卵巢黏液性腫瘤的惡性潛能。據(jù)一項CD133高表達與卵巢癌的預(yù)后及臨床病理特征關(guān)系的Meta分析顯示，CD133高表達與減少2年生存率（OR=1.67，95%CI：1.06～2.63，P=0.03）及腫瘤分期（OR=0.26，95%CI： 0.12～0.58，P=0.001）密切相關(guān)，結(jié)果表明CD133過表達與卵巢癌的預(yù)后差及臨床分期密切相關(guān)[21]。李笠[4]研究發(fā)現(xiàn)CD133在卵巢癌組織表達陽性率高，與正常卵巢組織相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），隨著腫瘤分化程度的不同，從高分化到低分化，CD133表達陽性率逐漸增高。

本研究結(jié)果也顯示，隨著卵巢黏液性腺癌組（MOA）織分化程度降低、臨床分期增高，CD133陽性表達率也增高，與卵巢黏液性腺癌惡化程度呈正相關(guān)，提示CD133的表達可能與MOA的分化程度相關(guān)，在不同年齡段之間CD133的陽性表達卻無明顯差異，因此，我們猜想檢測CD133的表達可能對判斷卵巢黏液腺癌的惡性增殖程度和患者預(yù)后具有一定的臨床價值。

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（收稿日期：2018-12-21）