蒙俏俊

[摘要]瘧疾是一種嚴(yán)重危害人類生命健康的蚊媒傳染病，由于免疫學(xué)、分子生物學(xué)和生物化學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，陸續(xù)產(chǎn)生一些瘧疾診斷的新技術(shù)，本文就瘧疾各種診斷技術(shù)的原理和應(yīng)用作簡(jiǎn)要綜述。筆者認(rèn)為，當(dāng)前我國(guó)處于消除瘧疾監(jiān)測(cè)階段，阻斷病例境外輸入，快速診斷外出回歸人群中的瘧原蟲(chóng)感染者，及時(shí)處置瘧疾疫情是關(guān)鍵。在瘧原蟲(chóng)鏡檢技術(shù)的基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)室研究著重于DNA探針技術(shù)和PCR技術(shù)的應(yīng)用，基層醫(yī)療單位和現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)要推廣應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)的快速診斷試劑，尤其是杭州艾康和廣州萬(wàn)孚等國(guó)產(chǎn)產(chǎn)品，價(jià)格低廉，簡(jiǎn)便快速，靈敏度和特異度高，需要盡快普及。

[關(guān)鍵詞]瘧疾;診斷技術(shù);富組氨酸蛋白一Ⅱ;瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶

[中圖分類號(hào)] R531.3

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]2095-0616（ 2019） 01-34-05

瘧疾是瘧原蟲(chóng)經(jīng)按蚊傳播感染人體而引起的一種蟲(chóng)媒傳染病，嚴(yán)重危害著人類的生命健康，被列為全球關(guān)注的三大公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。最近世界衛(wèi)生組織發(fā)布的《2016年世界瘧疾報(bào)告》顯示，2016年全球瘧疾控制出現(xiàn)停滯不前現(xiàn)象，有91個(gè)國(guó)家和地區(qū)有瘧疾流行，估計(jì)新發(fā)病數(shù)達(dá)到2.16億，較2015年增加約500萬(wàn)例，其中死亡44.5萬(wàn)人，與2015年基本持平[1]。因?yàn)檠芯刊懠卜乐萎a(chǎn)生了兩位諾貝爾生理學(xué)及醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)獲得者，美國(guó)科學(xué)家羅斯因揭示“瘧原蟲(chóng)通過(guò)按蚊叮咬途徑感染人體”于1902年獲獎(jiǎng)，中國(guó)藥學(xué)家屠呦呦因“創(chuàng)制抗瘧藥青蒿素和雙氫青蒿素，有效降低瘧疾死亡率”而于2015年獲獎(jiǎng)。人類對(duì)瘧疾防治的研究從不停步，及時(shí)、準(zhǔn)確的診斷對(duì)有效治療瘧疾及控制流行具有重要意義，由于免疫學(xué)、分子生物學(xué)及生物化學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，針對(duì)瘧疾傳統(tǒng)診斷方法的改進(jìn)及新的診斷方法陸續(xù)產(chǎn)生[2-3]，現(xiàn)就瘧疾診斷技術(shù)方面的進(jìn)展和應(yīng)用進(jìn)行簡(jiǎn)要綜述。

1 非免疫學(xué)診斷

1.1 臨床診斷

以瘧疾發(fā)病的臨床特點(diǎn)作為診斷依據(jù)：間歇性發(fā)作的寒戰(zhàn)、高熱，伴不同程度的頭痛、腰痛、關(guān)節(jié)痛和肌肉酸痛，口渴狂飲，惡心嘔吐，繼以大汗淋漓、疲乏無(wú)力、昏沉入睡而緩解。臨床癥狀可以簡(jiǎn)單歸納為冷、熱、痛、渴、汗和睡六個(gè)字。我國(guó)五十、六十年代初大規(guī)模普查普治階段，因顯微鏡和鏡檢人員缺乏而廣泛應(yīng)用，至今國(guó)內(nèi)外一些條件落后的偏遠(yuǎn)農(nóng)村和跟隨工程遷移而搭建的臨時(shí)工棚區(qū)仍沿用。一些老疫區(qū)居民常常根據(jù)這些表現(xiàn)自我診斷、自行服藥治療，由于不正規(guī)的治療加上自身免疫力因素，患者轉(zhuǎn)成無(wú)癥狀帶蟲(chóng)者成為瘧疾的傳染源，同時(shí)瘧疾的癥狀無(wú)絕對(duì)的特異性，與許多發(fā)熱性疾病混淆不清而誤診，惡性瘧誤診造成延誤治療病死率高。從流行病學(xué)觀點(diǎn)和醫(yī)療安全角度來(lái)看，在醫(yī)學(xué)技術(shù)、醫(yī)療服務(wù)快速發(fā)展的今天，臨床診斷只能作參考，不宜提倡。

1.2 鏡檢法

采集患者外周血，涂制厚血膜和薄血膜血片，然后進(jìn)行溶血染色處理，最后在顯微鏡油鏡頭下查找血膜中是否存在瘧原蟲(chóng)從而作出診斷，只要鏡檢者經(jīng)驗(yàn)豐富，涂片和染色符合要求，鏡檢時(shí)仔細(xì)認(rèn)真，血中只要存在瘧原蟲(chóng)，漏檢幾無(wú)可能，具有百年歷史的瘧原蟲(chóng)鏡檢迄今仍有瘧疾診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”的美稱。采集外周血4 - 5μL在載玻片中央偏右涂成直徑0.8 - l.Ocm的圓形厚血膜，取1.0 - 1.5μL外周血于載玻片左1/2 - 1/3位置用推玻片推成寬約2cm的舌狀薄血膜，用記號(hào)筆在載玻上寫上受檢者號(hào)碼，自然干燥。盡量在48h內(nèi)，用甲醇固定薄血膜（1- 3min），用蒸餾水對(duì)厚血膜進(jìn)行溶血處理，晾干后用2%吉氏染液浸泡20 - 30min，然后用清水反復(fù)漂洗，取出晾干。鏡檢時(shí)在厚血膜滴香柏油一滴，用油鏡從自上而下，從左到右，再由右向左，這樣往返不遺漏地查遍整個(gè)血膜，薄血膜僅作為原蟲(chóng)分類時(shí)參考檢查[4]。該方法具有檢出率高，可以定蟲(chóng)種，可以確定原蟲(chóng)密度，價(jià)格低廉，血片可以長(zhǎng)期保存等優(yōu)點(diǎn)，是檢驗(yàn)其他診斷方法特異度、靈敏度和穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn);但也存在費(fèi)工費(fèi)時(shí)，對(duì)客觀依賴性太強(qiáng)的缺點(diǎn)。

1.3 血液棕黃層定量分析法

血液棕黃層定量分析（ quantitative buffy coat，簡(jiǎn)稱QBC法），創(chuàng)建于1983年，首先由Wardlaw等人將其應(yīng)用于定量分析血液有形成分，被美國(guó)Becton Dickinson公司用于檢查紅內(nèi)期瘧原蟲(chóng)并商品化。原理是依據(jù)感染瘧原蟲(chóng)的紅細(xì)胞比正常紅細(xì)胞輕，比粒性白細(xì)胞略重的特性，定量采集末梢血置于裝有抗凝劑（草酸鉀、肝素）、熒光染料吖啶橙和一個(gè)與白細(xì)胞比重相同的柱形塑料浮子的特制的QBC管中，用封帽蓋住毛細(xì)管底端，經(jīng)10000轉(zhuǎn)離心5min，將QBC管水平放在專用板上，在熒光顯微鏡高倍鏡下鏡檢，感染瘧原蟲(chóng)紅細(xì)胞濃集于未感染紅細(xì)胞和血液棕黃層之間，經(jīng)熒光染料吖啶橙染色呈桔黃或黃綠色，從QBC管底端起依次為正常紅細(xì)胞層、受染紅細(xì)胞層（約1mm）、白細(xì)胞層（約5mm）、塑料浮子和血漿層，惡性瘧原蟲(chóng)配子體顯示為彌漫性綠光，間日瘧裂殖體為分葉狀光點(diǎn)，根據(jù)光點(diǎn)大小、形狀及染色特點(diǎn)來(lái)判斷瘧原蟲(chóng)的存在[5]。臨床應(yīng)用結(jié)果表明，該法操作容易、快速，檢測(cè)一份樣品只需lOmin，且可同時(shí)操作多份樣品。QBC法存在的主要問(wèn)題是成本較高，需要熒光顯微鏡，所使用的QBC管價(jià)格昂貴（1.0美元/支），且不能重復(fù)使用，雖在實(shí)驗(yàn)室中檢測(cè)效果較好，但在現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用尚不盡如意，因此目前只是作為瘧疾診斷的一種輔助方法。

1.4 DNA探針技術(shù)

人體感染瘧原蟲(chóng)血液中一定有瘧原蟲(chóng)核酸（ DNA）的存在。DNA探針技術(shù)檢測(cè)瘧原蟲(chóng)就是使用一定的示蹤物對(duì)特定基因序列的核酸片段（探針）進(jìn)行標(biāo)記，然后通過(guò)探針與待測(cè)樣本中互補(bǔ)片段的特異性結(jié)合，檢測(cè)判斷血樣中瘧原蟲(chóng)DNA的存在[6]。Franzen等[7]1984年首次報(bào)告應(yīng)用DNA探針用基因雜交方法診斷惡性瘧疾。之后該方法不斷改進(jìn)，其檢測(cè)靈敏度、特異度和穩(wěn)定性大幅度提高。DNA探針直接檢測(cè)寄生蟲(chóng)基因，不僅可以發(fā)現(xiàn)原蟲(chóng)感染，且可以用來(lái)鑒別蟲(chóng)種，不足的是，操作繁瑣，成本較高，還需要使用放射標(biāo)記，限制了其現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用。

1.5 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ PCR）技術(shù)由美國(guó)Cetus公司1985年創(chuàng)建，是體外模擬自然DNA復(fù)制過(guò)程的核酸擴(kuò)增技術(shù)。通過(guò)反復(fù)拷貝擴(kuò)增瘧原蟲(chóng)的特異性基因片段，增強(qiáng)分析信號(hào)，使引物限定的目標(biāo)DNA片段擴(kuò)增數(shù)百萬(wàn)倍，樣品中含量極低的目標(biāo)DNA片段得以檢出，具有很高的特異度及靈敏度。為減少樣品污染，降低操作過(guò)程中瘧原蟲(chóng)DNA的喪失和降解，提高瘧疾檢測(cè)的靈敏度，簡(jiǎn)化操作過(guò)程，PCR診斷技術(shù)不斷改進(jìn)，產(chǎn)生了套式PCR（ NestedPCR） [8-9];之后又不斷出現(xiàn)RCR-雜交法，PCR-RFLP.RAPD等以PCR為基礎(chǔ)的瘧疾檢測(cè)方法[10]，應(yīng)用于瘧疾現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)、流行病學(xué)調(diào)查、實(shí)驗(yàn)室研究等。該檢測(cè)技術(shù)特異度和靈敏度高，應(yīng)用前景廣闊，但受限于對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和技術(shù)水平要求較高，投入成本較大。

2 免疫學(xué)類診斷

利用分子免疫學(xué)原理生產(chǎn)的，應(yīng)用于數(shù)百種疾病初篩或診斷的試劑盒，以其靈敏度和特異度高，無(wú)需大型設(shè)備而受醫(yī)學(xué)界的廣泛歡迎。按其標(biāo)記方法分為酶標(biāo)法、熒光標(biāo)記法、同位素標(biāo)記法、金屬溶膠標(biāo)記法、磁顆粒標(biāo)記法、染料標(biāo)記法、有色乳膠標(biāo)記法等，點(diǎn)印漬法和層析試條法還設(shè)計(jì)出一種試劑可同時(shí)測(cè)多種分析物的方法。該技術(shù)對(duì)各分析物可進(jìn)行定性、半定量甚至定量測(cè)定，其發(fā)展之快，成果之多，令人目不暇接，由此產(chǎn)生了龐大的產(chǎn)業(yè)，成為疾病診斷學(xué)界的主流產(chǎn)品。

2.1 凝聚法

就瘧疾診斷而言，凝聚法中又分為直接血凝法（ DAT）和間接血凝法（IAT）兩類。DAT系把具有瘧原蟲(chóng)抗原的溶胞液包被在聚苯乙烯乳膠珠上，再按10：1的體積加入被檢人血清，再在各種NaCI濃度（0 - 300mM）下計(jì)算凝集時(shí)間，并按特定公式計(jì)算出感染程度，由于誤差較大，準(zhǔn)確率較低，應(yīng)用價(jià)值有限。IAT則把抗原結(jié)合于乙醛固定的0型紅細(xì)胞，加入被檢人血清，其中若存在針對(duì)此抗原的抗體，就會(huì)發(fā)生凝聚而被檢出，此法操作簡(jiǎn)易，但靈敏度和特異度較差，只能作為輔助診斷工具。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附法（ EIISA）

此法系利用包被單抗（或多抗）/全血中所含抗原/標(biāo)記單抗（或多抗）這三者能特異性結(jié)合，形成三元復(fù)合物而被檢出的方法。該方法靈敏度可與鏡檢法相當(dāng)，特異度高、可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品;存在的問(wèn)題是必須由專業(yè)人員操作，而操作又極繁瑣，需逐一有序地加入全血、標(biāo)記單抗、底物、終止液等試劑，中間還有多次清洗操作，耗時(shí)較久，一次試驗(yàn)要2h以上。

2.3 免疫點(diǎn)印漬法

免疫點(diǎn)印漬法的原理和ELISA法相同，只是作了一些改良，即用硝酸纖維素等濾膜替代96孔塑料板，這種改動(dòng)不僅靈敏度和特異度與ELISA法相當(dāng)，減少了操作步驟，防止了ELISA法中因甩打式洗板方式造成的環(huán)境污染，而且全程僅需lOmin，深受用戶歡迎。但由于該法應(yīng)用與免疫層析技術(shù)相比遜色不少，故雖有論文報(bào)道，但無(wú)實(shí)際產(chǎn)品上市。

2.4 免疫層析法檢測(cè)

膠體金免疫層析技術(shù)的原理是在硝酸纖維素膜上包被瘧原蟲(chóng)特異性單克隆抗體作為捕獲帶，然后用膠體金標(biāo)記同一抗體，層析過(guò)程中標(biāo)記抗體與捕獲到瘧原蟲(chóng)抗原通過(guò)捕獲帶時(shí)發(fā)生顏色反應(yīng)，即可判斷存在瘧原蟲(chóng)感染。瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（ PIDH）和惡性瘧原蟲(chóng)特有的富組氨酸蛋白一Ⅱ（HRP-Ⅱ）是目前常用的檢測(cè)靶抗原，傳統(tǒng)瘧疾膠體金診斷試盒主要以HRP-Ⅱ?yàn)闄z測(cè)靶點(diǎn)，只能檢出惡性瘧;目前應(yīng)用最廣泛的是以PLDH為檢測(cè)靶點(diǎn)的瘧疾膠體金診斷試劑盒，既能檢測(cè)惡性瘧和間日瘧又能檢測(cè)出卵形瘧。目前國(guó)際上應(yīng)用較多的有Para sight-F試劑盒、ICT Malaria P.f&P.f/P.v診斷試劑盒、Opti MALR試劑盒、Binax NOW⑩試劑盒、Care Start瘧疾HRP-Ⅱ/PLDH復(fù)合試劑盒;國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多的有杭州艾康P.f/P.v試劑盒和廣州萬(wàn)孚瘧原蟲(chóng)檢測(cè)試劑盒等。

2.4.1 Para sight-F試劑盒 美國(guó)BectonDickinason公司生產(chǎn)，為世界衛(wèi)生組織推薦使用的惡性瘧原蟲(chóng)快速診斷試劑之一。利用特異的單克隆抗體來(lái)檢測(cè)惡性瘧原蟲(chóng)HRP-Ⅱ，從而判斷檢測(cè)血樣中惡性瘧原蟲(chóng)的存在。其說(shuō)明書聲明原蟲(chóng)密度大于60個(gè)/μL血時(shí)，與鏡檢法比較檢出惡性瘧的靈敏度和特異度分別為96.5%- 100.0%和81.1% - 98.7%，原蟲(chóng)密度下降靈敏度下降，與楊亞明等[11]使用Para sight-F試劑盒在云南西南部檢測(cè)187例疑似惡性瘧患者結(jié)果一致。

2.4.2 ICT Malaria P.f/P.v診斷試劑盒 為澳大利亞Austcard公司產(chǎn)品，以HRP-Ⅱ?yàn)闄z測(cè)靶物，原理為在硝酸纖維素膜分別包被特異性的惡性瘧HRP-Ⅱ單克隆抗體和pan-malaria antigen（ PMA）單克隆抗體，可同時(shí)檢測(cè)惡性瘧和間日瘧。張?jiān)倥d等[12]在云南用該試劑檢測(cè)結(jié)果顯示惡性瘧和間日瘧靈敏度為85.71%和69.57%，惡性瘧和間日瘧的特異度分別為99.12%和99.12%，與國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道結(jié)果接近。

2.4.3 0pti MALR診斷試劑盒 由美國(guó)俄勒岡Flow Inc公司生產(chǎn)，以PLDH為檢測(cè)靶抗原。王真瑜等[13]檢測(cè)云南流行區(qū)瘧疾患者血樣200份及上海健康者血樣60份進(jìn)行比較分析，Opti MAL檢測(cè)總體靈敏度和特異度為95.5%和100.0%，惡性瘧、間日瘧的靈敏度和特異度分別為90.0%、96.0%和99.4%、97.5%，均高于CICA試劑，與國(guó)內(nèi)周升等[14]用Opti MAL檢測(cè)結(jié)果相近。Iqbal A等[l5]1997年在科威特用Opti MALR診斷試劑盒檢測(cè)550例發(fā)熱患者，結(jié)果顯示當(dāng)蟲(chóng)體密度達(dá)100個(gè)/μL以上時(shí)，靈敏度與PCR、鏡檢方法檢測(cè)性能相近為97%;原蟲(chóng)密度降低時(shí)，靈敏度下降到59%。國(guó)內(nèi)外研究靈敏度存在差異，是否與地域蟲(chóng)種及感染密度有關(guān)有待進(jìn)一步研究。

2.4.4 Binax NOWR診斷試劑盒 系美國(guó)InvemessMedical Innovation公司研制，診斷靶抗原為HRP-Ⅱ和醛縮酶（AID），ALD是所有瘧原蟲(chóng)含有的特異性蛋白，該試劑可區(qū)分惡性瘧和其他3種瘧原蟲(chóng)。楊永昌等[16]應(yīng)用該試劑盒對(duì)利比亞維和二級(jí)醫(yī)院疑似患者131例進(jìn)行檢測(cè)并與鏡檢法比較，鏡檢法檢出陽(yáng)性34例，其中惡性瘧33例，間日瘧l例，Binax NOWR試劑盒檢出惡性瘧32例，間日瘧1例，陰性符合率100%，陽(yáng)性符合率97.06%，總符合率99.2%。與劉慧等I”]使用Binax NOWR試劑盒在中緬邊境地區(qū)檢測(cè)結(jié)果一致。

2.4.5 Care Start瘧疾HRP-Ⅱ/PLDH復(fù)合試劑盒 由美國(guó)Access Bio公司研制，同時(shí)在硝酸纖維素膜上包被兩種單克隆抗體于測(cè)試條兩側(cè)，分別特異性捕獲瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（ PIDH）和惡性瘧原蟲(chóng)的富組氨酸蛋白一Ⅱ（HRP-Ⅱ），該診斷試劑盒專用于惡性瘧和其他型瘧疾的鑒別診斷。張勇等[18]使用該試劑盒與鏡檢法對(duì)103例瘧疾、疑似瘧疾進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比分析，兩方法檢出陽(yáng)性率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，該試劑的靈敏度和特異度分別為95.65%和97.50%。與孫曉東等[19]使用Care Start瘧疾HRP-Ⅱ/PLDH復(fù)合試劑盒在中緬邊境地區(qū)對(duì)疑似瘧疾患者進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果基本一致。

2.4.6 艾康P.f/P.v試劑盒 由我國(guó)杭州艾康生物技術(shù)有限公司研制，是最早投入使用的國(guó)內(nèi)產(chǎn)品，通過(guò)在硝酸纖維素膜上包被兩種特異性單克隆抗體來(lái)檢測(cè)靶抗原HRP-Ⅱ和PLDH，判定瘧原蟲(chóng)感染種類。孫曉東等[20]與王光澤等[21]應(yīng)用艾康瘧疾診斷試劑盒分別在云南和海南檢測(cè)結(jié)果非常接近，總體靈敏度分別為92.56%和99.4%，特異度分別為98.57%和98.9%;惡性瘧檢測(cè)靈敏度分別為100%和100%，特異度分別為98.57%和99.3%;間日瘧檢測(cè)靈敏度分別為86.96%和98.8%，特異度分別為100%和100%。表明艾康瘧疾診斷試劑盒能鑒別診斷惡性瘧和間日虐，靈敏度和特異度比國(guó)外同類產(chǎn)品還好，并且價(jià)格低廉，非常適合鏡檢技術(shù)和條件不足的國(guó)內(nèi)基層醫(yī)療單位、預(yù)防機(jī)構(gòu)開(kāi)展瘧疾檢測(cè)。

2.4.7 萬(wàn)孚瘧疾診斷試劑盒 由我國(guó)廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，在硝酸纖維素膜上檢測(cè)區(qū)預(yù)先包被固定pfLDH和panLDH單克隆抗體，在質(zhì)控區(qū)固定抗鼠IgC多克隆抗體，結(jié)合墊固定有panLDH單克隆抗體膠體金標(biāo)記物。通過(guò)捕獲全血樣品中特異性惡性瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（pfLDH）和瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（ panLDH），結(jié)合檢測(cè)過(guò)程中硝酸纖維素膜上質(zhì)控區(qū)是否出現(xiàn)膠體金標(biāo)記物panLDH抗體與抗鼠IgG多克隆抗體反應(yīng)線來(lái)判定樣本量是否足夠，層析過(guò)程是否正常，綜合判定是否存在惡性瘧感染、惡性瘧與其他瘧原蟲(chóng)混合感染，惡性瘧以外的其他瘧原蟲(chóng)感染。魏容等[22]對(duì)86例2012年5月- 2016年5月間接診的疑似瘧疾患者利用萬(wàn)孚瘧原蟲(chóng)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)并與鏡檢法對(duì)比，其檢測(cè)靈敏度為100%，特異度為97.43%，與鏡檢法相比無(wú)顯著性差異，與薛成軍等[23]2009年10月- 2010年7月在蘇丹維和期間檢測(cè)236份發(fā)熱患者的結(jié)果一致。該方法具有操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)速度快，技術(shù)要求低且價(jià)格低廉等優(yōu)勢(shì)，適用于基層醫(yī)院和大規(guī)模普查。

3 小結(jié)

綜上所述，臨床診斷從流行病學(xué)和醫(yī)療安全角度出發(fā)不宜提倡，僅供參考。鏡檢法作為瘧疾診斷的金標(biāo)準(zhǔn)沿用至今，有著其他診斷方法不可替代的優(yōu)勢(shì)，特異度高，可直接鑒別蟲(chóng)種及原蟲(chóng)不同發(fā)育時(shí)期，可以確定原蟲(chóng)感染密度，對(duì)患者治療有指導(dǎo)作用，而且成本低廉。QBC法雖然操作簡(jiǎn)易快捷，但需要價(jià)格昂貴的熒光顯微鏡和QBC管，很難推廣。以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的DNA探針技術(shù)和PCR技術(shù)，檢測(cè)靈敏度和特異度高，且能鑒別蟲(chóng)種，但操作繁瑣，對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件和技術(shù)水平要求較高，儀器昂貴，成本高，主要適用于實(shí)驗(yàn)室研究。基于分子免疫學(xué)原理的瘧疾診斷試劑盒，因其快速簡(jiǎn)便，無(wú)需大型設(shè)備而廣受歡迎。其中凝聚法由于靈敏度和特異度不高而應(yīng)用受限，ELISA法因操作繁瑣而難于推廣，免疫點(diǎn)印漬法則因綜合性能競(jìng)爭(zhēng)不過(guò)免疫層析法而沒(méi)有產(chǎn)品上市。膠體金免疫層析技術(shù)生產(chǎn)的瘧疾診斷試劑盒，因其靈敏度和特異度高，性能穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)便快速，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和技術(shù)水平要求不高，適合在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)和現(xiàn)場(chǎng)工作中廣泛應(yīng)用。相對(duì)于國(guó)產(chǎn)的杭州艾康、廣州萬(wàn)孚瘧疾診斷試劑盒，Para sight-F試劑盒、ICT Malaria P.f/P.v試劑盒、OptiMAL試劑盒、BinaxNOW試劑盒、CareStart瘧疾HRP-Ⅱ/pLDH復(fù)合試劑盒等國(guó)外產(chǎn)品，其共同缺點(diǎn)是價(jià)格比較貴。我國(guó)已進(jìn)入消除瘧疾監(jiān)測(cè)階段，2017年還實(shí)現(xiàn)了無(wú)本地感染目標(biāo)，阻斷境外輸入瘧疾病例是當(dāng)務(wù)之急，應(yīng)大力推廣普及國(guó)產(chǎn)試劑盒在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)的應(yīng)用，針對(duì)日益增多的到非洲和東南亞務(wù)工、經(jīng)商、旅游回歸人員進(jìn)行快速瘧原蟲(chóng)檢測(cè)，及時(shí)準(zhǔn)確地診斷出瘧疾患者并開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查和處置。其他國(guó)家和地區(qū)可根據(jù)當(dāng)?shù)氐囊咔樾蝿?shì)、經(jīng)濟(jì)狀況和社會(huì)條件，選擇一種或幾種準(zhǔn)確有效的瘧疾診斷方法應(yīng)用于瘧疾防治的現(xiàn)場(chǎng)和研究工作。

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