大豆低聚肽對自發(fā)性高血壓大鼠血壓及血漿血管緊張素的影響

李雯暉，張 健，應(yīng) 欣，王 勇,，張連慧，李 赫,*，劉新旗

（1.北京工商大學(xué)食品學(xué)院，北京食品營養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心，北京市食品添加劑工程技術(shù)研究中心，北京 100048；2.中糧營養(yǎng)健康研究院，營養(yǎng)健康與食品安全北京市重點實驗室，老年營養(yǎng)食品研究北京市工程實驗室，北京 102209）

大豆蛋白是一種含有人體所需9 種必需氨基酸且不含膽固醇的植物蛋白，它是補充優(yōu)質(zhì)蛋白的良好來源。然而，大豆蛋白具有抗原性和溶解度低等缺陷，大大限制了其應(yīng)用范圍[1-2]。大豆低聚肽是以大豆粕或大豆蛋白等為主要原料，用酶解或微生物發(fā)酵法處理，再經(jīng)過分離和精制等特殊處理得到的低聚肽混合物，大部分由3～6 個氨基酸組成[3-4]。大豆低聚肽的氨基酸組成與大豆蛋白基本相同，必需氨基酸種類平衡且含量豐富，還具有降低膽固醇、抗疲勞、提高免疫力等諸多功能，廣泛應(yīng)用于食品中[5-8]。

近年來，隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，高血壓患者數(shù)量逐年攀升。目前，高血壓病人普遍使用藥物治療，雖然降壓效果較好，但是化學(xué)合成的藥物副作用較大，可以引起皮膚、肝臟、腎臟等器官的損害[9-10]。食源性降血壓肽與化學(xué)合成的降血壓藥物相比具有無副作用、易吸收、僅對病理性高血壓患者有降壓效果等優(yōu)點，因此，尋找合適的降血壓肽成為研究熱點[11-12]。目前，大部分的降壓藥物和降壓食品都是通過抑制血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶（angiotensin I converting enzyme，ACE）的活性來發(fā)揮降壓作用的，它們緊密結(jié)合ACE的活性位點，與血管緊張素I競爭，導(dǎo)致ACE不能將血管緊張素I轉(zhuǎn)化為血管緊張素II，從而降低血壓[13-15]。

很多學(xué)者已經(jīng)證明大豆蛋白是良好的食源性降血壓肽來源[16-17]，并且目前已經(jīng)有一些蛋白酶應(yīng)用于大豆蛋白ACE活性抑制肽的制備。范遠(yuǎn)景等[18]使用5 種不同的蛋白酶對大豆分離蛋白進行單酶水解，并測定不同大豆蛋白酶解物的ACE活性抑制效果，最終選定堿性蛋白酶作為生產(chǎn)大豆ACE抑制肽的最適酶。王升光等[19]采用兩種酶水解大豆分離蛋白，最終發(fā)現(xiàn)復(fù)合酶酶解液的ACE活性抑制效果最好。但是，在體外實驗中活性很高的降血壓肽，經(jīng)過消化道內(nèi)酶的分解后，一些物質(zhì)可能會被降解而失去活性。因此，進行體內(nèi)實驗評價降血壓肽的作用效果是必要的，而目前將體外酶解產(chǎn)物篩選和體內(nèi)實驗相結(jié)合驗證降壓機制的研究少有報道。

本實驗采用不同蛋白酶對大豆蛋白進行酶解，通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）及分子質(zhì)量分布實驗確定酶解產(chǎn)物分子質(zhì)量，通過體外ACE活性抑制實驗確定最佳酶解條件，選取ACE活性抑制率最高的大豆低聚肽進行體內(nèi)實驗，用等量大豆低聚肽替換飼料中的蛋白，采用飼喂的方式更好地模擬人體攝入大豆低聚肽的過程。實驗期間測定大鼠血壓、心率、尿蛋白質(zhì)量及血管緊張素II質(zhì)量濃度等指標(biāo)，探究大豆低聚肽對正常血壓大鼠（WKY大鼠）和自發(fā)性高血壓大鼠（SHR大鼠）的影響及其降血壓功能與機制。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

SPF級雄性SHR大鼠和WKY大鼠（11 周齡）由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2009-0012。嚙齒類動物維持飼料、含卡托普利（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%）及大豆低聚肽（質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.90%、1.80%和4.50%）的維持飼料由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供。

大豆蛋白 山東御馨生物科技有限公司；中性蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶、馬尿酸（hippuric acid，HA）、馬尿酰-組氨酰-亮氨酸（N-hippuryl-His-Leu hydrate，HHL）、甘氨酸、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸、桿菌肽、胰島素 上海源葉生物科技有限公司；ACE美國Sigma公司；總蛋白測定試劑盒、碘[125I]血管緊張素II放射免疫分析藥盒 美國賽默飛世爾科技公司。

1.2 儀器與設(shè)備

EX623ZH千分之一天平、NVL5100B電子天平上海奧豪斯儀器有限公司；恒溫水浴鍋 金壇市科析儀器有限公司；小型垂直電泳系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)美國伯樂公司；真空冷凍干燥機 博勱行儀器有限公司；1260 Infinity高效液相色譜儀 美國安捷倫科技有限公司；Infinite 200 Pro Nanoquant酶標(biāo)儀 瑞士Tecan公司；植入式生理信號遙測系統(tǒng) 美國DSI公司；7020全自動生化分析儀 日本日立公司；DFM-96型放射免疫γ計數(shù)器 眾誠機電技術(shù)公司。

1.3 方法

1.3.1 大豆蛋白的酶解

準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量的大豆蛋白粉末，使其充分溶解于蒸餾水中，配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%的大豆蛋白溶液，調(diào)節(jié)至pH 7.0。配制6 份大豆蛋白溶液，分別加入堿性蛋白酶0.2%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）、中性蛋白酶0.2%、胰蛋白酶0.2%、堿性蛋白酶和中性蛋白酶（復(fù)合酶1）各0.1%、中性蛋白酶和胰蛋白酶（復(fù)合酶2）各0.1%、堿性蛋白酶和胰蛋白酶（復(fù)合酶3）各0.1%進行水解，50 ℃恒溫水浴4 h，隨后將溫度提高至85 ℃進行滅酶，15 min后得到多肽酶解液。將酶解液于-42 ℃下真空冷凍干燥30 h，得到不同大豆蛋白酶解物粉末。

1.3.2 大豆蛋白與不同大豆蛋白酶解物的SDS-PAGE分析

對象 入選標(biāo)準(zhǔn)：回顧性分析2011年1月至2014年12月在北京安貞醫(yī)院接受睡眠呼吸檢測和超聲心動圖的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往診斷SA并接受氣道正壓、手術(shù)、口腔矯治器等治療的患者?；加杏绊懸归g血氧飽和度的先天性心臟病、慢性阻塞性肺疾病、肺栓塞的患者不納入研究。心力衰竭確診需符合當(dāng)時《中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會慢性心力衰竭診斷治療指南》[4]，由臨床醫(yī)生診斷。

參考Boye等[20]的方法，配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%丙烯酰胺溶液、1.5 mol/L Tris-HCl、1 mol/L Tris-HCl、10% SDS溶液、10%過硫酸銨溶液，混合配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的分離膠和5%濃縮膠。蛋白上樣量為15 μg左右，與上樣緩沖液混合，95 ℃水浴5 min使樣品中的蛋白質(zhì)變性，隨后每孔上樣10 μL，調(diào)整電壓為80 V進行SDS-PAGE，以三色預(yù)染蛋白分子（分子質(zhì)量范圍為10～180 kDa）為蛋白分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)品。SDS-PAGE結(jié)束后，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色，脫色后于凝膠成像系統(tǒng)照相分析。

1.3.3 大豆蛋白與不同大豆蛋白酶解物ACE活性抑制率的測定

參考Boschin[21]和Wu Jianping[22]等的方法并加以改進，分別配制1 mmol/L HHL溶液、10 mg/mL大豆蛋白溶液、6 種10 mg/mL大豆蛋白酶解物溶液，溶于緩沖液1（100 mmol/L Tris-HCOOH、300 mmol/L NaCl，pH 8.3）；配制1 mU ACE溶液溶于緩沖液2（100 mmol/L Tris-HCOOH、300 nmol/L NaCl、10 mol/L ZnCl2，pH 8.3）。將100 μL HHL溶液和30 μL樣品溶液混合，在37 ℃下預(yù)反應(yīng)15 min，加入15 μL ACE溶液，反應(yīng)60 min后用125 μL 0.1 mol/L HCl停止反應(yīng)，再經(jīng)乙酸乙酯萃取兩次后在高效液相色譜-二極管陣列檢測器（high performance liquid chromatography-diode array detector，HPLC-DAD）系統(tǒng)中過Eclipse Plus C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）進行分析。以水和乙腈作為流動相，洗脫條件為：0 min，5%（體積分?jǐn)?shù)，下同）乙腈；10 min，60%乙腈；12 min，60%乙腈；15 min，5%乙腈。進樣體積為10 μL，流速為0.5 mL/min，于228 nm波長處檢測HA的峰面積。抑制劑空白樣品不添加大豆蛋白酶解物，不同抑制劑樣品添加不同大豆蛋白酶解物，反應(yīng)空白樣品添加不同大豆蛋白酶解物但不添加ACE。ACE活性抑制率按式（1）計算。

式中：A1為抑制劑空白樣品中HA峰面積；A2為不同抑制劑樣品中HA峰面積；A3為反應(yīng)空白樣品中HA峰面積。

1.3.4 大豆低聚肽分子質(zhì)量分布的測定

參考GB/T 22492—2008《大豆肽粉》[4]的方法并加以改進，選取酶解后所得肽段分子質(zhì)量小以及ACE活性抑制效果最佳的酶解物進行分析，進一步確定其分子質(zhì)量分布。將標(biāo)準(zhǔn)品和酶解物凍干粉配制成1 mg/mL溶液，過0.22 μm濾膜，隨后在HPLC-DAD系統(tǒng)中過TSK gel G2000SWXL色譜柱（300 mm×7.8 mm，5 μm）進行檢測分析。流動相為乙腈、水、三氟乙酸（45:55:0.1，V/V），進樣體積為10 μL，流速為0.5 mL/min，于220 nm波長處檢測得到標(biāo)準(zhǔn)品及樣品色譜圖，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時間及其分子質(zhì)量計算標(biāo)準(zhǔn)曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到大豆低聚肽的分子質(zhì)量分布，用峰面積歸一化法得到不同肽段相對分子質(zhì)量分布。

1.3.5 動物分組及處理

實驗動物共48 只，其中SHR大鼠40 只，WKY大鼠8 只。在實驗開始前，對動物進行1 周適應(yīng)性飼養(yǎng)，在適應(yīng)期內(nèi)對受試動物進行多次血壓測量，使其適應(yīng)測壓環(huán)境[23]。適應(yīng)期結(jié)束后，將SHR大鼠按體質(zhì)量隨機分為5 組，每組8 只，分別為陰性對照組（飼喂嚙齒類動物維持飼料）、陽性對照組（飼喂添加0.0l g/kg卡托普利的嚙齒類動物維持飼料）、大豆低聚肽低劑量組（0.90 g/kg大豆低聚肽）、中劑量組（1.80 g/kg大豆低聚肽）和高劑量組（4.50 g/kg大豆低聚肽），其中3 個大豆低聚肽劑量組將大豆低聚肽替換嚙齒類動物維持飼料中等量蛋白，大鼠每日攝食量按體質(zhì)量的10%計算，飼料中大豆低聚肽相應(yīng)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.90%、1.80%和4.50%，分別相當(dāng)于人體推薦攝入量的1、2、5 倍；卡托普利質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01%。正常對照組為8 只WKY大鼠，與大豆低聚肽高劑量組飼喂相同的飼料。各組動物自由進食、飲水，飼養(yǎng)30 d[24]。

1.3.6 大鼠血壓和心率的測定

實驗期間每周記錄大鼠給食量、撒食量、剩食量，并稱體質(zhì)量1 次，同時用植入式生理信號遙測系統(tǒng)測定其血壓（包括收縮壓、平均壓和舒張壓）和心率一次[25-26]。平均動脈壓（平均壓）是指心臟在整個心動周期中給予血流的平均推動力，相較于收縮壓和舒張壓而言，它既能表示心動周期中動脈血壓的平均變化，又能反映心、腦、腎的血流狀態(tài)，其數(shù)值增高則表示心臟和動脈的負(fù)荷增高。平均壓的計算公式如式（2）所示。

1.3.7 大鼠24 h尿中總蛋白質(zhì)量的測定

實驗結(jié)束前1 d，用大鼠代謝籠收集所有大鼠24 h尿液，記錄尿量，按總蛋白測定試劑盒（Doumas法）說明書，采用全自動生化分析儀測定尿中總蛋白質(zhì)量[27-28]。

1.3.8 大鼠血清的制備

實驗結(jié)束當(dāng)天，將所有大鼠稱體質(zhì)量，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%戊巴比妥鈉（0.5 mL/100 g）將動物麻醉，經(jīng)腹主動脈取血5 mL注入含抗凝劑的試管中混勻，在4 ℃下3 000 r/min離心15 min，分離上清液收集于滅菌離心管中，于-70 ℃保存。

1.3.9 大鼠血管緊張素II質(zhì)量濃度的測定

按碘[125I]血管緊張素II放射免疫分析藥盒說明書，采用DFM-96型放射免疫γ計數(shù)器測定各組大鼠血漿中血管緊張素II質(zhì)量濃度[29]。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

使用SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析。先進行方差齊性檢驗，若方差齊，則計算F值，F(xiàn)＜F0.05表示各組平均數(shù)間差異不顯著；若F≥F0.05、P≤0.05，則用最小顯著性差異法進行各劑量組和陰性對照組間平均數(shù)的兩兩比較，P＜0.05表示差異顯著；對方差不齊的數(shù)據(jù)使用Dunnett’s T3法進行各劑量組和陰性對照組間平均數(shù)的兩兩比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 大豆蛋白與不同大豆蛋白酶解物的SDS-PAGE分析結(jié)果

圖1 大豆蛋白與不同大豆蛋白酶解物的SDS-PAGE譜圖Fig. 1 SDS-PAGE of soy protein and its hydrolysates

由圖1可知，大豆蛋白經(jīng)酶解后變?yōu)樾》肿与模颐附馕锓肿淤|(zhì)量均低于35 kDa，堿性蛋白酶、復(fù)合酶1和復(fù)合酶3的水解效果較好，將大豆蛋白分解為15 kDa以下的肽段，其中復(fù)合酶1的酶解效果最好，大部分肽段分子質(zhì)量集中在10 kDa以下。

2.2 大豆蛋白與不同大豆蛋白酶解物的ACE活性抑制效果分析結(jié)果

圖2 大豆蛋白及其不同酶解物的ACE活性抑制率Fig. 2 Percentage inhibition of ACE activity by soy protein and its hydrolysates

如圖2所示，與大豆蛋白相比，大豆蛋白酶解物ACE活性抑制率顯著提高（P＜0.05），這表明大豆蛋白酶解為小分子肽后對于ACE活性的抑制作用更強，可能具有更好的降血壓效果。復(fù)合酶1酶解物的ACE活性抑制率最好，達到71.2%；其次為堿性蛋白酶酶解物，其ACE活性抑制率為63.7%；ACE活性抑制率最差的是胰蛋白酶酶解物，僅為51.9%。結(jié)合圖1結(jié)果分析，復(fù)合酶1的酶解效果最好，大豆蛋白大部分被酶解為小分子肽，對于ACE活性的抑制效果更明顯。就單一酶酶解而言，本實驗結(jié)果與韓飛等[1]研究一致，他們采用4 種酶對大豆分離蛋白進行水解，測定其對ACE活性的抑制效果，結(jié)果表明堿性蛋白酶酶解物的抑制效果好于中性蛋白酶酶解物。本研究發(fā)現(xiàn)，相較于單一酶酶解，堿性蛋白酶與中性蛋白酶復(fù)合酶解后對ACE活性的抑制效果得到了提升。

2.3 大豆低聚肽的分子質(zhì)量分布分析結(jié)果

綜合圖1、2可知，復(fù)合酶1酶解物肽段分子質(zhì)量小，且對ACE活性的抑制效果最好，但圖1中低于10 kDa的肽段沒有得到明顯的分離。為了進一步確定其成分，進行分子質(zhì)量分布分析。由表1可知，酶解物有82.4%分子質(zhì)量分布在1 000 Da以下，即低聚肽比例約為82.4%。

表1 大豆低聚肽的分子質(zhì)量分布Table 1 Molecular mass distribution of soybean oligopeptides

2.4 大豆低聚肽對大鼠體質(zhì)量的影響

表2 大豆低聚肽飼喂30 d對大鼠體質(zhì)量的影響Table 2 Effects of soybean oligopeptides on body mass in rats after 30 days of feeding

由表2可知，以大豆低聚肽飼喂大鼠30 d，各組大鼠體質(zhì)量均呈增長趨勢，大豆低聚肽各劑量組及陽性對照組大鼠的體質(zhì)量增長趨勢與陰性對照組及正常對照組比較均無顯著性差異（P＞0.05），表明大豆低聚肽對于大鼠體質(zhì)量無顯著影響。

2.5 大豆低聚肽對大鼠血壓的影響

表3 飼喂大豆低聚肽30 d對WKY大鼠血壓的影響Table 3 Effects of soybean oligopeptides on blood pressure of WKY rats after 30 days of feeding

由表3可知，以大豆低聚肽飼喂大鼠30 d，正常對照組大鼠的收縮壓、平均壓和舒張壓在整個實驗過程中均無顯著差異（P＞0.05），表明大豆低聚肽對于正常大鼠血壓、心臟和動脈的負(fù)荷無影響。

表4 飼喂大豆低聚肽30 d對SHR大鼠收縮壓的影響Table 4 Effects of soybean oligopeptides on systolic blood pressure of SHR rats after 30 days of feeding

表5 飼喂大豆低聚肽30 d對SHR大鼠平均壓的影響Table 5 Effects of soybean oligopeptides on mean arterial pressure of SHR rats after 30 days of feeding

由表4～6可知，隨著飼養(yǎng)時間延長，SHR大鼠血壓逐漸升高。與陰性對照組相比，陽性對照組大鼠的收縮壓和平均壓自第3周起有所下降，到第4周時有顯著差異（P＜0.05）；而舒張壓在第3、4周時均顯著降低（P＜0.05），表明卡托普利可以降低SHR大鼠血壓，減輕心臟和動脈的負(fù)荷。楊雯晴等[30]對SHR大鼠灌胃25 mg/kg卡托普利，1 周后與給藥前相比血壓顯著下降（P＜0.05），隨著干預(yù)時間的延長，降壓效果逐漸增強。本實驗中由于卡托普利的質(zhì)量分?jǐn)?shù)低，并且采取混入飼料的方式，造成其發(fā)揮降血壓作用存在一定的時間窗。大豆低聚肽各劑量組大鼠的收縮壓在第4周時與陰性對照組相比顯著降低（P＜0.05）；大豆低聚肽低、中劑量組大鼠的平均壓和舒張壓到第4周時有下降的趨勢，但差異不顯著（P＞0.05）；大豆低聚肽高劑量組大鼠的平均壓和舒張壓自第2周起至實驗結(jié)束均略低于陰性對照組，血壓逐漸穩(wěn)定并有降低的趨勢，心臟和動脈的負(fù)荷減輕，到第4周時有顯著性差異（P＜0.05）。Wu Jianping等[31]通過口服給予SHR大鼠1 g/kg大豆肽1 個月后，發(fā)現(xiàn)其收縮壓顯著降低。盧靜等[32]通過造模急性腎性高血壓大鼠，并在短時間內(nèi)靜脈給予其大豆肽，發(fā)現(xiàn)大豆肽對正常大鼠血壓無影響，但能夠顯著降低高血壓大鼠收縮壓和舒張壓。這與本研究在大豆肽發(fā)揮降血壓效果的作用劑量和時間上有所差異，這可能是由于選取的動物模型有所不同，并且大豆蛋白使用不同的酶解方案，其酶解位點、形成的肽段不同。

2.6 大豆低聚肽對大鼠心率的影響

心率是直接反映心臟功能狀態(tài)和交感神經(jīng)活性的指標(biāo)，心率的變化與心血管疾病發(fā)生率緊密相關(guān)。高血壓通常會導(dǎo)致心律失常。通過測定SHR大鼠心率可以評估大豆低聚肽輔助降血壓的效果[33-34]。

表7 飼喂大豆低聚肽30 d對SHR大鼠心率的影響Table 7 Effects of soybean oligopeptides on heart rate of SHR rats after 30 days of feeding

由表7可知，以大豆低聚肽飼喂大鼠30 d，與陰性對照組相比，陽性對照組和大豆低聚肽各劑量組大鼠的心率在整個實驗過程中均無顯著性差異（P＞0.05）。這表明大豆低聚肽對于大鼠心率沒有顯著影響。

2.7 大豆低聚肽對大鼠24 h尿蛋白質(zhì)量的影響

腎臟既是血壓的重要調(diào)節(jié)器官，也是高血壓損傷的靶器官之一。當(dāng)血壓升高時，人體腎臟發(fā)生病變，導(dǎo)致蛋白質(zhì)進入尿液，從而形成了蛋白尿[35-36]。通過測定大鼠尿蛋白質(zhì)量可以評估大豆低聚肽輔助降血壓的效果。

表8 大豆低聚肽飼喂30 d對SHR大鼠24 h尿蛋白質(zhì)量的影響Table 8 Effects of soybean oligopeptides on 24-hour urine protein content in SHR rats after 30 days of feeding

由表8可知，以大豆低聚肽飼喂大鼠30 d，大豆低聚肽各劑量組及陰性對照組、陽性對照組大鼠的24 h尿蛋白質(zhì)量之間均無顯著性差異（P＞0.05），表明大豆低聚肽對于尿蛋白質(zhì)量無顯著影響。

2.8 大豆低聚肽對大鼠血管緊張素II質(zhì)量濃度的影響

圖3 大豆低聚肽飼喂30 d對SHR大鼠血管緊張素II質(zhì)量濃度的影響Fig. 3 Effects of soybean oligopeptides on plasma levels of angiotensin II in rats after 30 days of feeding

由圖3可知，SHR大鼠飼喂大豆低聚肽30 d后，與陰性對照組相比，陽性對照組大鼠血管緊張素II質(zhì)量濃度顯著降低（P＜0.05），大豆低聚肽各劑量組大鼠血管緊張素II質(zhì)量濃度均有下降趨勢，其中低、中劑量組無顯著性差異（P＞0.05），而高劑量組顯著下降（P＜0.05），其血管緊張素II質(zhì)量濃度為174.2 pg/mL。盧靜等[32]通過靜脈給予正常大鼠及急性腎性高血壓大鼠低、中、高劑量的大豆肽，結(jié)果顯示3 組大鼠的血管緊張素II質(zhì)量濃度均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)合血壓結(jié)果分析，本研究中大豆低聚肽低、中劑量組大鼠的收縮壓在第4周時與陰性對照組相比顯著降低（P＜0.05），而血管緊張素II質(zhì)量濃度沒有顯著性差異（P＞0.05），可能是因為在血壓調(diào)控系統(tǒng)中存在另一種激肽-激肽生成酶系統(tǒng)，ACE作用于激肽使其失活，導(dǎo)致血壓升高[37]。推測大豆低聚肽通過抑制ACE活性，一方面使血管緊張素I無法轉(zhuǎn)換為血管緊張素II，導(dǎo)致血管緊張素II質(zhì)量濃度降低；另一方面提高激肽的活性。兩方面聯(lián)合作用降低血壓，具體機制還需要進一步研究證明。

3 結(jié) 論

本研究采用堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶＋中性蛋白酶復(fù)合、中性蛋白酶＋胰蛋白酶復(fù)合、堿性蛋白酶＋胰蛋白酶復(fù)合酶解大豆蛋白，得到6 種不同酶解產(chǎn)物，通過SDS-PAGE實驗和ACE活性抑制實驗確定最佳酶解條件為：堿性蛋白酶和中性蛋白酶質(zhì)量分?jǐn)?shù)各0.1%，50 ℃酶解4 h。通過分子質(zhì)量分布實驗確定其分子質(zhì)量，最終得到分子質(zhì)量小于1 000 Da比例為82.4%的大豆低聚肽。選取此大豆低聚肽進行體內(nèi)實驗，飼喂30 d后，WKY大鼠血壓無顯著性變化，SHR大鼠血壓有降低的趨勢。與陰性對照組相比，大豆低聚肽高劑量組大鼠的收縮壓、平均壓、舒張壓和血管緊張素II質(zhì)量濃度在第4周時顯著降低（P＜0.05）；大鼠體質(zhì)量、心率與尿蛋白質(zhì)量無顯著性變化（P＞0.05）。結(jié)果表明：體外實驗中大豆低聚肽較大豆蛋白的ACE活性抑制效果更好；體內(nèi)實驗證明，大豆低聚肽可以降低SHR大鼠的血壓和血管緊張素II質(zhì)量濃度，且對正常血壓大鼠無明顯影響；推測大豆低聚肽通過抑制ACE活性的方式發(fā)揮降壓功效。