金葉龜甲冬青組培快繁技術(shù)的研究

丁久玲 鄭凱 梁慧敏

摘要：以金葉龜甲冬青（Ilex crenata）幼嫩莖段為外植體，設(shè)置不同的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗及生根培養(yǎng)基進(jìn)行對比研究，建立金葉龜甲冬青組培快繁體系。結(jié)果表明，采用培養(yǎng)基MS+ZT 0.5～1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L進(jìn)行初代培養(yǎng)，腋芽誘導(dǎo)率達(dá)95%左右;利用培養(yǎng)基MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L，叢生芽增殖系數(shù)高，幼苗生長健壯且色澤深綠;叢生芽接種于MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，幼苗高度可達(dá)4.9 cm，生長健壯，色澤深綠;適宜的生根培養(yǎng)基配方1/2 MS+IBA 0.1 mg/L+NAA 0.5 mg/L+活性炭3.0 g/L，生根率100%，根系生長健壯，色澤白色;經(jīng)生根的試管苗移栽于園土（V）∶蛭石（V）∶泥炭（V）=2∶1∶1混合基質(zhì)，加以合理管理，成活率可達(dá)95%。

關(guān)鍵詞：金葉龜甲冬青（Ilex crenata）;組培快繁;誘導(dǎo)率;生根率

中圖分類號：S687? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）04-0093-05

Abstract： To establish an efficient tissue culture system for rapidly propagating， taking young stem section of Ilex crenata ender as explant， different bud-induction medium， proliferation medium， robust seedling medium and rooting medium were conducted. The results showed that the optimal bud-induction medium was MS+ZT 0.5～1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L and the induction rate of axillary bud was about 95%; The optimal medium for proliferation was MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L，multiplication coefficient was high， seedling growth was strong with thick green; The optimal robust seedling medium was MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+sugar 30 g/L， the height of seedling reached 4.9 cm; The optimal rooting medium was 1/2 MS+IBA 0.1 mg/L+NAA 0.5 mg/L+active-carbon 3.0 g/L， and the roots were strong and white in color， the rooting rate was 100%; The survival percentage of plantlets could be up to 95% through transplanted in the substrate containing garden soil， vermiculite and peat （2∶1∶1，V/V/V）.

Key words： Ilex crenata; tissue culture and rapid propagation; induction rate; rooting rate

金葉龜甲冬青（Ilex crenata）是冬青科（Aquifoliaceae）冬青屬彩葉植物，具有常綠、耐低溫、植株低矮、緊湊等特點(diǎn)，其老葉色澤濃綠且具光澤，新葉葉色金黃，色澤亮麗。近年來，國內(nèi)外綠化產(chǎn)業(yè)對金葉龜甲冬青的需求旺盛，因此應(yīng)加快其繁殖速度，滿足其日益增加的市場需求。金葉龜甲冬青的常規(guī)繁殖方法有扦插繁殖和嫁接繁殖，但繁殖速度較慢。組培繁殖可以提高金葉龜甲冬青的繁殖系數(shù)，加快推廣應(yīng)用速度，對豐富中國彩葉綠化樹種有重要意義。

目前，國內(nèi)外已有關(guān)于金葉龜甲冬青組織培養(yǎng)的部分報(bào)道[1-5]，但鮮見細(xì)胞分裂素ZT和6-BA對比分析、不同蔗糖濃度對試管苗的影響及添加活性炭對生根培養(yǎng)的影響等方面的研究。本研究從金葉龜甲冬青的外植體消毒、初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等幾方面著手，以細(xì)胞分裂素ZT和6-BA的對比分析、蔗糖濃度對試管苗的影響及活性炭的添加對生根的影響等方面進(jìn)行研究，以期為金葉龜甲冬青優(yōu)質(zhì)種苗的快速繁殖提供技術(shù)支持。

1? 材料與方法

1.1? 材料

供試的金葉龜甲冬青材料由江蘇綠苑園林建設(shè)有限公司苗木基地提供。

選擇生長兩年的健壯植株，再選擇當(dāng)年生帶有腋芽的幼嫩莖段（長約2 cm）為外植體。

1.2? 消毒滅菌

將外植體置于流水下沖洗1 h，加入適量的洗滌劑浸泡清洗3次，邊浸泡邊振蕩，沖洗干凈后移至超凈工作臺進(jìn)行下一步的消毒滅菌。具體操作為：先用75%乙醇浸泡20 s，用無菌水沖洗3次;轉(zhuǎn)入0.1% HgCl2消毒8～9 min，無菌水沖洗3～5次后，用滅菌紙將外植體表面的水分吸干，接種于初代培養(yǎng)基上。

1.3? 接種培養(yǎng)

1.3.1? 初代培養(yǎng)? 將經(jīng)過消毒滅菌的金葉龜甲冬青外植體接種于初代培養(yǎng)基上，各培養(yǎng)基配方均在MS培養(yǎng)基中添加不同種類和不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑，同時(shí)添加7.0 g/L瓊脂和25 g/L蔗糖，pH 5.6～5.8。每個(gè)配方接種24瓶，每瓶接種4個(gè)外植體。培養(yǎng)條件為：溫度（20±2） ℃、光照強(qiáng)度1 000～1 500 lx、光照時(shí)間10～12 h/d。定期觀察記錄腋芽萌動情況，腋芽誘導(dǎo)率=（誘導(dǎo)出芽苗的腋芽數(shù)/外植體上總腋芽數(shù)）×100%。

1.3.2? 增殖培養(yǎng)? 選用優(yōu)化的初代培養(yǎng)基進(jìn)行初代培養(yǎng)后，將初代培養(yǎng)得到的芽苗切成帶一個(gè)腋芽的長0.5 cm的莖段，接種在增殖培養(yǎng)基上，各培養(yǎng)基配方均是在MS培養(yǎng)基中添加不同種類和不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑，同時(shí)添加7.0 g/L瓊脂和25 g/L蔗糖，pH 5.6～5.8。每個(gè)配方接種24瓶，每瓶接種3個(gè)莖段。培養(yǎng)條件為：溫度（25±2） ℃、光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx、光照時(shí)間12～14 h/d。定期觀察記錄叢生芽苗生長情況，計(jì)算增殖系數(shù)。增殖系數(shù)=增殖叢生芽總數(shù)/接種數(shù)。

1.3.3? 壯苗培養(yǎng)? 選用優(yōu)化的增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)后，將產(chǎn)生的叢生芽切下后接種于壯苗培養(yǎng)基上，各培養(yǎng)基配方均在MS培養(yǎng)基中添加不同種類和濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑及不同濃度的蔗糖，同時(shí)添加7.0 g/L瓊脂，pH 5.6～5.8。每個(gè)配方接種21瓶，每瓶接種3個(gè)小苗。培養(yǎng)條件同增殖培養(yǎng)。

1.3.4? 生根培養(yǎng)? 當(dāng)金葉龜甲冬青無根苗長至3～4 cm時(shí)，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，各培養(yǎng)基配方均在1/2MS培養(yǎng)基中添加不同種類和濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑及不同濃度的活性炭，同時(shí)添加7.0 g/L瓊脂、20 g/L蔗糖，pH 5.6～5.8。每個(gè)配方接種21瓶，每瓶接種3個(gè)小苗。培養(yǎng)條件同增殖培養(yǎng)。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 初代培養(yǎng)對金葉龜甲冬青的影響

由表1可知，不同的初代培養(yǎng)基對金葉龜甲冬青腋芽的誘導(dǎo)產(chǎn)生不同的影響。細(xì)胞分裂素ZT對腋芽的誘導(dǎo)有明顯影響，濃度過低時(shí)，腋芽誘導(dǎo)率較低，僅為38.5%;ZT濃度為0.5和1.0 mg/L時(shí)腋芽誘導(dǎo)率較高，分別為96.2%和94.5%，且誘導(dǎo)出的芽苗高度較高，分別為2.0和2.2 cm;當(dāng)ZT濃度過高時(shí)，腋芽誘導(dǎo)率明顯降低，芽苗高度亦明顯降低。細(xì)胞分裂素6-BA對金葉龜甲冬青腋芽誘導(dǎo)有一定的影響，但誘導(dǎo)效果稍差于ZT，初代培養(yǎng)基6-BA濃度為0.5和1.0 mg/L時(shí)腋芽誘導(dǎo)率分別為76.6%和84.5%。根據(jù)不同的初代培養(yǎng)基對金葉龜甲冬青腋芽誘導(dǎo)的情況，初步判斷，在同種濃度下ZT促進(jìn)腋芽誘導(dǎo)的活性較6-BA高;適宜的ZT濃度利于金葉龜甲冬青腋芽的誘導(dǎo)，濃度過高或過低均不利于腋芽的誘導(dǎo)。本研究表明，金葉龜甲冬青適宜的初代培養(yǎng)基配方為MS+ZT 0.5～1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，外植體在初代培養(yǎng)基上培養(yǎng)7～10 d，腋芽開始萌動，50 d后芽苗高度約2 cm。通過初代培養(yǎng)，腋芽誘導(dǎo)率達(dá)95%左右。

2.2? 增殖培養(yǎng)對金葉龜甲冬青的影響

接種的莖段在增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)至10 d左右時(shí)有叢生芽長出，培養(yǎng)至40 d時(shí)觀察記錄叢生芽生長情況，發(fā)現(xiàn)不同培養(yǎng)基對金葉龜甲冬青的影響亦有所不同（表2）。其中，配方2的叢生芽增殖系數(shù)最高，達(dá)2.6，明顯高于其他配方，叢生芽生長健壯，且色澤深綠。叢生芽增殖系數(shù)和高度位于其次的是配方1，叢生芽生長一般，色澤淡綠。配方3的叢生芽高度較高（1.2 cm），但增殖系數(shù)低，且叢生芽生長細(xì)弱，黃綠色。因此，適宜金葉龜甲冬青增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L。叢生芽苗通過反復(fù)切割，每25～35 d將長出的叢生芽苗切下，繼續(xù)繼代培養(yǎng)1次，繼代培養(yǎng)3次后，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。

2.3? 壯苗培養(yǎng)對金葉龜甲冬青的影響

選用優(yōu)化的培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)后，將繼代培養(yǎng)基上的叢生芽苗切下后接種于壯苗培養(yǎng)基上，由表3可知，叢生芽苗接種于不同的壯苗培養(yǎng)基上其表現(xiàn)有所不同。在同樣的蔗糖濃度下，配方1、配方4和配方7相比較，配方4的幼苗生長良好;配方2、配方5和配方8相比較，配方5的幼苗生長良好;配方3、配方6和配方9相比較，配方6的幼苗生長良好。根據(jù)此初步判斷，在蔗糖濃度不變的情況下，生長調(diào)節(jié)劑的濃度比例以ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L為宜。在同樣的生長調(diào)節(jié)劑濃度比例下，配方1、配方2和配方3相比較，三者的幼苗生長狀況均較差，且差異不明顯;配方4、配方5和配方6相比較，配方4和配方5的幼苗高度差異不明顯，但配方4的幼苗健壯度和色澤均明顯差于配方5，配方6的幼苗高度明顯低于配方5，且幼苗生長一般、色澤黃綠;配方7、配方8和配方9相比較，三者的幼苗生長狀況均較差，且差異不明顯。據(jù)此可初步判斷，在同樣的生長調(diào)節(jié)劑濃度比例下，蔗糖濃度以30 g/L為宜。綜合在同樣的蔗糖濃度和同樣的生長調(diào)節(jié)劑濃度比例下各壯苗培養(yǎng)基配方幼苗的高度、健壯度和色澤等生長情況，適宜金葉龜甲冬青壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L，幼苗高度可達(dá)4.9 cm，生長健壯，色澤深綠。

2.4? 生根培養(yǎng)對金葉龜甲冬青的影響

選用優(yōu)化的壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)20～30 d后，把健壯的金葉龜甲冬青無根幼苗轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，由表4可知，叢無根幼苗接種于不同的生根培養(yǎng)基上其表現(xiàn)有所不同。

15 d時(shí)統(tǒng)計(jì)生根率，不同的生根培養(yǎng)基其生根率不同，其中配方1、配方2和配方3的生根率均較高，三者差異不明顯，配方2的生根率最高，達(dá)100%;配方4、配方5和配方6的生根率均較低，明顯低于前3個(gè)配方。據(jù)此初步判斷，金葉龜甲冬青的生根培養(yǎng)基中選用生長調(diào)節(jié)劑IBA和NAA合理配比時(shí)生根率較高，而選用生長調(diào)節(jié)劑IAA和NAA合理配比時(shí)生根率均較低，故金葉龜甲冬青的生根培養(yǎng)基應(yīng)添加合理配比的生長調(diào)節(jié)劑IBA和NAA。

金葉龜甲冬青無根幼苗經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)40～50 d后，觀察記錄根系生長狀況，包括根系數(shù)量、根系長度、健壯度和色澤等指標(biāo)。因配方4、配方5和配方6的生根率較低，這里僅對前3個(gè)配方的根系生長狀況進(jìn)行分析。配方1、配方2和配方3三者的根系數(shù)量差異不明顯，其中配方2的根系數(shù)量最多、根系長度最長、且生長健壯、色澤為健康的白色;配方1和配方3的根系長度明顯低于配方2，且這兩個(gè)配方的根系生長一般或細(xì)弱、色澤呈現(xiàn)為不健康的淡黃色或黃褐色。據(jù)此可判斷，金葉龜甲冬青的生根培養(yǎng)基中應(yīng)添加適宜濃度的活性炭，活性炭濃度以3.0 g/L為宜，過高和過低均不利于根系的生長。綜上所述，金葉龜甲冬青適宜的生根培養(yǎng)基配方為1/2 MS+IBA 0.1 mg/L+NAA 0.5 mg/L+活性炭3.0 g/L，生根率100%，根系數(shù)量為5.4條/株，根系生長良好，長度3.6 cm、生長健壯，色澤為白色。

2.5? 煉苗及移栽

金葉龜甲冬青在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)40～50 d后可進(jìn)行煉苗移栽。金葉龜甲冬青組培苗煉苗可先在（23±2） ℃的溫室內(nèi)擰松瓶蓋放置3～5 d，然后進(jìn)行溫床過渡移栽。過渡苗床（即溫床）可建在普通單體的塑料大棚內(nèi)，床寬1.2 m左右，床四周砌高30 cm，床底整平，栽培基質(zhì)用園土（V）∶蛭石（V）∶泥炭（V）=2∶1∶1，栽培基質(zhì)須經(jīng)過滅菌，充分混勻后使用。移栽時(shí)，將幼苗從瓶內(nèi)取出，用清水將金葉龜甲冬青組培苗根部的固體培養(yǎng)基清洗干凈，同時(shí)應(yīng)盡量減少傷根。種入苗床后，選擇清潔水澆灌，并噴施稀釋800～1 000倍的甲基托布津或稀釋1 000倍多菌靈藥液，以后每隔1周噴施1次，連續(xù)3～4次。移栽初期要特別注意保持苗床和空氣濕度，濕度保持在90%左右，溫度（23±2） ℃，前期應(yīng)進(jìn)行遮陰7～10 d;一般需全封閉管理7 d左右，根據(jù)情況在20 d左右可以逐步通風(fēng)，并除去覆蓋物。一般成活率可達(dá)95%。

3? 小結(jié)與討論

3.1? 細(xì)胞分裂素對金葉龜甲冬青腋芽誘導(dǎo)的影響

不同的細(xì)胞分裂素對植物組培快繁的效果有所不同。張楠等[6]通過對大果黑果枸杞進(jìn)行初代培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)ZT的培養(yǎng)效果明顯優(yōu)于6-BA，前者的腋芽萌芽率明顯高于后者。劉曉娜等[7]對上西早生甜柿的快繁技術(shù)進(jìn)行了研究，認(rèn)為ZT 110 mg/L的快繁效果明顯好于6-BA 510 mg/L。孟志霞等[8]研究表明，BA和ZT對金線蓮增殖的作用差異較大，6-BA對金線蓮芽苗增殖作用較ZT強(qiáng)。Jin等[9]認(rèn)為，與ZT相比，6-BA是較適合藍(lán)靛果組培的細(xì)胞分裂素。程廣有等[10]研究ZT、6-BA對苦參組培快繁的影響，認(rèn)為2種細(xì)胞分裂素誘導(dǎo)芽增殖時(shí)差異不顯著。本研究與張楠等[6]、劉曉娜等[7]的研究結(jié)果相似，認(rèn)為同種濃度下ZT促進(jìn)金葉龜甲冬青腋芽誘導(dǎo)的活性較6-BA高。用細(xì)胞分裂素ZT來誘導(dǎo)金葉龜甲冬青腋芽，濃度應(yīng)適當(dāng)，且應(yīng)與生長素NAA配合使用，ZT濃度過高或過低均不利于腋芽的誘導(dǎo)，金葉龜甲冬青適宜的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+ZT 0.5～1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，腋芽誘導(dǎo)率達(dá)95%左右。

3.2? 蔗糖對金葉龜甲冬青壯苗培養(yǎng)的影響

不同的蔗糖濃度對植物組培快繁產(chǎn)生不同的影響。閆斌等[11]認(rèn)為NAA與蔗糖的含量對組培苗的壯苗生根具有顯著影響，0.1 mg/L NAA與20 g/L蔗糖有利于組培苗的壯苗生根;蔗糖為30 g/L時(shí)，組培苗出現(xiàn)葉片卷曲，葉片較小。李云海等[12]研究表明，在有生長素存在的條件下，調(diào)整蔗糖的用量（品種ZH，20 g/L;品種BY-14，40 g/L），馬鈴薯壯苗效果更好，表現(xiàn)在促進(jìn)根系發(fā)育和增加莖葉干物質(zhì)的含量方面;蔗糖濃度過高，造成培養(yǎng)苗老化，不利于試管苗的快速生長和繁殖。魏梅娟等[13]證明了隨著蔗糖濃度的增加，鐵皮石斛原球莖增殖速度加快，當(dāng)蔗糖30 g/L時(shí)原球莖生長狀態(tài)最好，而當(dāng)蔗糖濃度達(dá)40 g/L時(shí)，原球莖的生長受到抑制。本研究得出了與此一致的結(jié)論，發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞分裂素和生長素適宜配比下（ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L），蔗糖應(yīng)控制在適宜的濃度，蔗糖濃度過低或過高均不利于金葉龜甲冬青組培幼苗生長，金葉龜甲冬青壯苗培養(yǎng)時(shí)蔗糖適宜的濃度為30 g/L，低濃度蔗糖抑制試管苗生長，可能與提供的碳水化合物不足有關(guān)[12]，而高濃度的蔗糖使試管苗生長受到抑制可能與高濃度蔗糖產(chǎn)生較高的滲透壓有關(guān)[13]。本研究認(rèn)為適宜金葉龜甲冬青壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L，幼苗高度達(dá)4.9 cm，生長健壯、色澤深綠。

3.3? 生長素和活性炭對金葉龜甲冬青生根培養(yǎng)的影響

生長素種類及其濃度對金葉龜甲冬青生根極為重要，生根培養(yǎng)時(shí)應(yīng)選用合適種類和濃度的生長素。梁慧敏等[3]研究表明日本龜甲冬青生根培養(yǎng)基用1/2 MS+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.1 mg/L，生根率達(dá)100%。史云光等[5]篩選出金葉龜甲冬青生根的最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.25 mg/L+IBA 0.75 mg/L，培養(yǎng)出的根系均勻、色白。李登中[4]認(rèn)為金葉日本冬青適宜的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.6 mg/L，生根率達(dá)95%。朱志國[14]研究表明金葉日本冬青的再生植株在培養(yǎng)基1/2 MS+NAA 0.3 mg/L中不定根誘導(dǎo)效果較好。本研究與梁慧敏等[3]、史云光等[5]的結(jié)果有一定的相似之處，認(rèn)為金葉龜甲冬青試管苗生根培養(yǎng)時(shí)應(yīng)添加NAA和IBA兩種生長素，且二者比例和濃度適當(dāng)時(shí)試管苗生根率較高，而選用生長素IAA和NAA合理配比時(shí)生根率均較低，生長素適宜的濃度配比為NAA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L。

活性炭是組培苗生根時(shí)常用的一種附加物。不同的活性炭濃度對組培苗誘導(dǎo)生根的效果不同，因此選擇適宜的活性炭濃度顯得非常重要，濃度過高有抑制作用，濃度過低無效果。金香花等[15]認(rèn)為樹莓試管苗生根培養(yǎng)加入活性炭1.0 g/L，根多、根系健壯，活性碳濃度增加至2.0 g/L時(shí)對根系生長不利。陳雄偉等[16]研究表明添加3.0 mg/L活性炭明顯提高鼎湖山紫背天葵生根質(zhì)量。張素勤等[17]研究了活性炭對非洲菊不定芽生根誘導(dǎo)的影響，表明0.2%～0.3%活性炭能明顯促進(jìn)生根，縮短生根時(shí)間，增加了根數(shù)和根長。本研究與陳雄偉等[16]、張素勤等[17]的研究基本一致，表明在適宜的生長素配比（NAA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L）下，添加3.0 g/L活性炭生根率高，根系白色、且生長健壯;過高或過低均不利于根系的萌發(fā)和根系的生長?；钚蕴看龠M(jìn)試管苗生根的原因可能是活性炭為根的生長發(fā)育營造了近似自然生長條件的黑暗環(huán)境，同時(shí)吸附培養(yǎng)基中有毒副作用的物質(zhì)，降低鹽離子濃度等[17]。

研究了金葉龜甲冬青組培快繁體系的建立，在腋芽誘導(dǎo)階段對比了細(xì)胞分裂素ZT與6-BA的效果，認(rèn)為ZT的效果優(yōu)于6-BA;適宜的蔗糖濃度（30 g/L）利于金葉龜甲冬青壯苗培養(yǎng);添加適宜濃度的活性炭（3.0 g/L）可以明顯提高金葉龜甲冬青生根率、根系生長健壯。與扦插繁殖和嫁接繁殖等常規(guī)繁殖方法相比，本研究發(fā)現(xiàn)優(yōu)化的金葉龜甲冬青組培繁殖方法：腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基采用MS+ZT 0.5～1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，用培養(yǎng)基MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L進(jìn)行增殖培養(yǎng)，叢生芽在MS+ZT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，在1/2 MS+IBA 0.1 mg/L+NAA 0.5 mg/L+活性炭3.0 g/L上生根培養(yǎng)，可以將其繁殖系數(shù)提高4～6倍，繁殖周期縮短至200～230 d，成活率可達(dá)95%。

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