黃連等6味中草藥對耐藥性鮑曼不動桿菌的抑菌作用研究

楊娟

【摘要】 目的 研究黃連等6味中草藥對耐藥性鮑曼不動桿菌的抑菌作用。方法 選擇黃連、黃芩、黃柏、千里光、白頭翁和金銀花， 通過水煎法和醇提法對有效成分進行提取， 之后采用K-B法進行上述6味中草藥提取物的測定， 比較三種不同濃度的菌液在不同提取方法下的6味中草藥的抑菌直徑。結果 當菌液濃度達到1.0g/L的時候， 6味中草藥均存在有一定的抑菌作用。與菌液濃度為1.00 g/L時， 當菌液濃度為0.25、0.50 g/L時， 6味中藥物的抑菌直徑較大， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;黃連、黃芩的抑菌直徑均大于其余4味中草藥， 差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 黃連等6味中草藥對于耐藥性鮑曼不動桿菌均有不同程度的抑菌作用， 而菌液濃度升高其抑菌作用會存在不同程度的降低， 黃連和黃芩通過水煎法和醇提法提取的有效成分對耐藥性不動桿菌的抑菌作用最強。

【關鍵詞】 黃連;中草藥;耐藥性鮑曼不動桿菌

鮑曼不動桿菌是一種較為嚴重的獲得性耐藥性的條件致病菌， 均會在各個自然角落存在， 這種病菌容易導致患者出現(xiàn)感染， 在現(xiàn)如今是引起院內感染的主要病菌。近年來， 抗生素的濫用導致患者出現(xiàn)耐藥不動桿菌率逐年提高， 所以臨床上有存在多重耐藥的鮑曼不動桿菌， 甚至會存在完全耐藥的鮑曼不動桿菌， 給臨床的干預工作帶來較大的影響， 加重患者的病情和炎癥反應[1]。在這種背景下， 為防止患者的病毒耐藥性加重， 為臨床工作提供有效的治療， 已開始成為一個重要的課題。本文從中藥角度分析黃連、黃芩、黃柏、千里光、白頭翁和金銀花6味中草藥通過不同方法進行提取所得的提取物對于耐藥性鮑曼不動桿菌的抑菌作用進行分析， 并將研究情況報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 本研究的鮑曼不動桿菌菌株種本院檢驗科通過細菌分離式進行分離、鑒定和保存的菌種。而黃連、黃芩、黃柏、千里光、白頭翁和金銀花6味中草藥均為本院的藥房提供。其余材料包括M-H培養(yǎng)基、生物安全柜、培養(yǎng)皿、酒精燈、試管、鑷子、無菌紗布、燒杯、無菌棉簽、濾紙和卡尺等。

1. 2 方法

1. 2. 1 中藥藥液提取 分別采用水煎方法和醇提方法提取中藥藥液。采用水煎方法對藥液進行提取時， 選擇黃連30 g首先進行研磨處理， 并且加入到300 ml蒸餾水中浸泡大約1 h， 再選擇文火煎煮2 h， 對枝葉進行收取。選擇無菌紗布進行過濾， 再加入水300 ml， 進行加熱， 直到水分收縮到30 ml為止， 進行裝瓶加蓋， 采用高壓滅菌0.5 h后取出備用。選擇同樣的方法對其余的5味藥材進行水煎提取。

采用醇提方法進行提取時， 對黃連等6味中草藥需要先進行干燥， 之后再次進行研磨。通過75%的酒精6倍回流處理， 然后進行2次的提取， 將酒精的濃度進行減壓， 并且縮成1∶1的藥液。

1. 2. 2 藥敏紙制作 應用打孔器對定性濾紙進行打孔， 保證濾紙形成直徑為6 mm的圓形小紙片， 通過30 min的高壓滅菌處理后， 將小紙片放入烘烤箱中進行烘干處理， 當完全干燥后， 則制備的濾紙片浸泡在中草藥中進行相關處置， 使濾紙片完全吸收藥液以后， 再次進行烘干， 將兩種提取液的濾紙片均進行無菌保存。

1. 2. 3 菌液制作 需要將相關菌株接種在瓊脂平板上， 然后將其放在37℃的溫度下進行24 h的孕育， 對單個菌落需要接種在培養(yǎng)基里， 同時在37℃的溫度下， 進行24 h的培 養(yǎng)， 分別接種無菌生理鹽水， 試管中將濃度校正為0.25、0.50、1.00 g/L三檔備用。

1. 2. 4 體外抑菌試驗 采用K-B法進行體外抑菌試驗。根據M-H瓊脂粉38 g配備1000 ml蒸餾水， 制成瓊脂培養(yǎng)基， 并且將其放在三角燒瓶中進行高壓滅菌， 每個平板大約25 ml 分配。之后通過對無菌棉拭子的應用， 對相關菌液進行選擇， 試管內壁通過無菌棉拭子旋轉， 將多余菌液擠出， 在瓊脂平板表面均勻進行反復3次的涂抹進行接種處理， 然后旋轉平板60°/次， 沿著平板內壁， 再均勻地進行1周的涂抹， 對 3種梯度， 分別需要制作相關的平板。并且保證在室溫環(huán)境下進行5 min的干燥， 放置在酒精燈前或者生物安全柜中， 通過無菌鑷子將制好的藥敏紙片貼在平板的瓊脂表面進行壓實， 在培養(yǎng)箱37℃的溫度中進行撫育， 時間大約為24 h， 對于抑菌直徑進行測量和記錄。為確保實驗數據的準確性， 進行3次抑菌試驗， 取平均值作為最終結果[2]。

1. 3 觀察指標 對三種不同濃度的菌液在不同提取方法下的6味中草藥的抑菌直徑進行比較。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS25.0統(tǒng)計學軟件對研究數據進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

對于水煎方法所提取的藥液， 黃連、黃芩、黃柏、千里光、白頭翁和金銀花等中草藥在0.25、0.50、1.00 g/L濃度下的抑菌直徑分別為（13.41±4.20）、（13.32±5.03）、（11.66± 5.02）mm， （11.42±2.83）、（10.41±4.67）、（9.07±6.01）mm， （7.01±1.84）、（6.80±1.04）、（6.85±1.75）mm， （7.41±3.08）、（8.25±3.12）、（6.91±1.68）mm， （9.41±3.41）、（9.32±3.67）、（8.82±3.27）mm， （7.91±2.18）、（7.82±2.85）、（6.91±1.43）mm; 對于醇提方法所提取的藥液， 黃連、黃芩、黃柏、千里光、白頭翁和金銀花等中草藥在0.25、0.50、1.00 g/L的濃度下抑菌直徑分別為（13.51±4.37）、（13.40±4.93）、（11.74± 4.98）mm， （11.42±2.83）、（10.91±3.67）、（9.17±6.02）mm， （7.07±1.82）、（6.82±1.02）、（6.82±1.74）mm， （7.91±2.10）、（8.32±3.15）、（7.01±1.66）mm， （9.51±3.08）、（9.42±3.59）、（8.81±3.25）mm， （8.01±2.21）、（7.91±2.80）、（7.07±1.37）mm。