高 燕，姜 艷*，李薇莎，李桂琳，李澤生，楊燕芳

（1.云南省德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，云南瑞麗678600；2.瑞麗鑫水園林花卉有限公司，云南瑞麗678600）

木鱉子（Momordica cochinchinensis）又名木鱉藤，是一種葫蘆科苦瓜屬藥食同源的多年生草質(zhì)藤本，為常用中藥［1］，生于海拔450～1 100 m的山坡、林緣，土層較深厚的地方，喜溫暖、潮濕的氣候和向陽(yáng)的環(huán)境，我國(guó)主要分布于湖南、臺(tái)灣、廣西、四川、云南等地［2］。木鱉子嫩莖尖可食用，以根入藥，種仁含脂肪油約41.2%，油中組分有29.02%的α-桐酸（α-eleostearic acid）［3-4］。已知化學(xué)成分還有海藻糖（mgcose）［5］、α-菠菜甾醇（αspinasterol）［6］、木鱉子酸（momordic acid）、齊墩果酸（oleanolic acid）、甾醇（sterol）［7］、木鱉糖蛋白［8-9］、氨基酸及蛋白質(zhì)等。據(jù)《中國(guó)藥典》記載，木鱉子具有散結(jié)消腫、攻毒療瘡的功效，可用于治療瘡瘍腫毒、乳癰、瘰疬、痔瘺、干癬、禿瘡等癥［10］。迄今為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)于木鱉子的研究較少，僅有其化學(xué)成分的相關(guān)分析報(bào)道。

木鱉子的繁殖方法主要有種子播種和根頭繁殖法。種子播種繁殖的植株，由于種子間差異大，雌雄株差異明顯，要求在開(kāi)花時(shí)拔除多數(shù)雄株，只保留少數(shù)雄株，以供授粉；根頭繁殖選擇雌株根頭，將根上的芽數(shù)切成種根，傷口易腐爛，原材料浪費(fèi)大，成活率低。為此，需要利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)野生的木鱉子品種進(jìn)行組培育苗技術(shù)研究，以突破其育苗技術(shù)的瓶頸。目前有關(guān)木鱉子的組培育苗技術(shù)還未見(jiàn)報(bào)道，筆者就此對(duì)木鱉子幼嫩莖蔓組織培養(yǎng)技術(shù)中的愈傷組織誘導(dǎo)、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽方法等關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了初步研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試木鱉子幼嫩莖蔓取自瑞麗鑫水園林花卉有限公司種植基地（2017年4月），剪下的幼嫩莖蔓放入玻璃瓶中備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 愈傷組織誘導(dǎo)分化培養(yǎng)

選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的幼嫩莖蔓，去除多余葉片后切成小段，放入0.1%的洗衣粉或洗潔劑中浸泡3～5 min，經(jīng)自來(lái)水沖洗10～15 min，純凈水清洗1～2次，用濃度75%酒精消毒30 s，0.1%HgCl2滅菌5 min，無(wú)菌水沖洗5～6次，然后用無(wú)菌過(guò)濾紙吸干水分，切成長(zhǎng)2～3 cm帶1～2節(jié)的莖蔓，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基接30個(gè)節(jié)，每處理接種30瓶，每瓶接種3個(gè)莖節(jié)，暗培養(yǎng)7 d后再轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)60 d，光照強(qiáng)度為1 800～2 000 lx，光照時(shí)間 10 h/d，pH 5.8～6.0，培養(yǎng)溫度（25±2）℃。統(tǒng)計(jì)愈傷組織數(shù)，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。愈傷組織誘導(dǎo)率＝（愈傷組織數(shù)/接種外植體數(shù)）×100%。試驗(yàn)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基見(jiàn)表1，木鱉子莖蔓愈傷組織的誘導(dǎo)分化最適宜培養(yǎng)基為MS+6-BA0.8 mg/L+NAA0.1 mg/L+蔗糖30 g/L。

表1 愈傷誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基 m g/L

1.2.2 繼代增殖分化培養(yǎng)

將生長(zhǎng)至4 cm以上的不定芽切成帶1～2節(jié)的莖蔓，接種于繼代增殖分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為2 000～2 200 lx，光照時(shí)間12 h/d，培養(yǎng)時(shí)間60 d。統(tǒng)計(jì)增殖苗數(shù)，計(jì)算增殖倍數(shù)。增殖倍數(shù)＝增殖苗數(shù)/原接種小苗數(shù)。試驗(yàn)最適宜繼代增殖培養(yǎng)基為MS6+6-BA0.6mg/L+NAA 0.2 mg/L+馬鈴薯泥2%+活性炭1 g/L+蔗糖30 g/L（表 2）。

表2 繼代增殖分化培養(yǎng)基 m g/L

1.2.3 生根培養(yǎng)

待不定芽小芽長(zhǎng)至2 cm以上，切成單株接種于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為2 200～2 400 lx，光照時(shí)間12 h/d。每10 d觀察、記錄生根狀況，60 d后測(cè)定根長(zhǎng)，統(tǒng)計(jì)生根數(shù)，計(jì)算生根率。生根率＝生根苗數(shù)/接種小苗數(shù)×100%。試驗(yàn)最佳生根培養(yǎng)基為MS+NAA 0.4 mg/L+香蕉泥5%+活性炭2 g/L+蔗糖20 g/L（表3）。

表3 生根培養(yǎng)基 m g/L

1.2.4 煉苗與移栽

將株高3～5 cm，根長(zhǎng)2～4 cm，生根數(shù)在3根以上的瓶苗置于自然光溫室大棚苗床上煉苗。10 d后取出生根苗，洗凈根部的培養(yǎng)基，放入1 000倍多菌靈溶液浸泡5 min，撈出晾干至根發(fā)白，移栽于不同基質(zhì)中，澆透定根水，蔭蔽度85%，相對(duì)濕度70%～80%，溫度22～30℃。移栽7 d后，用1 000倍多菌靈溶液噴霧消毒，15 d后用3 000倍低濃度葉面肥噴施。移栽前5 d，將基質(zhì)用1 000倍多菌靈溶液噴灑作消毒處理，移栽的混合基質(zhì)為腐殖土∶火燒土∶腐熟艾蒿（體積比5∶3∶2）。

2 結(jié)果與分析

2.1 愈傷組織誘導(dǎo)分化培養(yǎng)

接種10 d后，莖節(jié)切口處開(kāi)始膨大，30 d后切口出現(xiàn)乳白色緊密狀愈傷組織，60 d后逐漸形成黃綠色愈傷組織塊。愈傷組織誘導(dǎo)率及顏色、結(jié)構(gòu)和狀態(tài)在不同培養(yǎng)基中表現(xiàn)差異較明顯（表4）。隨著6-BA濃度的升高，愈傷組織的生長(zhǎng)量增大，當(dāng)6-BA為0.8 mg/L（A5）時(shí)，愈傷組織生長(zhǎng)量狀態(tài)最好，呈黃綠色，結(jié)構(gòu)較緊密，當(dāng)6-BA為1.2 mg/L（A8）時(shí)，愈傷組織呈黃竭色，結(jié)構(gòu)較松散；同時(shí)添加6-BA、NAA、KT的培養(yǎng)基中莖蔓切口產(chǎn)生的愈傷組織比單一添加6-BA的生長(zhǎng)量大，其中添加6-BA 0.8 mg/L和NAA 0.1 mg/L的愈傷組織生長(zhǎng)狀態(tài)最好，呈黃綠色，結(jié)構(gòu)緊密。

表4 木鱉子莖蔓愈傷組織的誘導(dǎo)率

將愈傷組織分別轉(zhuǎn)接至配方相同的分化培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖分化培養(yǎng)，7 d后愈傷組織顏色由乳白色變成黃綠色，愈傷組織表面分化出不定芽（圖1）。不定芽隨著6-BA濃度的升高而增加，當(dāng)6-BA為0.8 mg/L（A5）時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率最高，達(dá) 66.7%，當(dāng) 6-BA 為1.2 mg/L（A8）時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率下降至53.3%，添加NAA 0.1 mg/L或KT 0.1 mg/L培養(yǎng)基上的愈傷組織誘導(dǎo)率比單純添加6-BA的要高。因此，木鱉子莖蔓愈傷組織的誘導(dǎo)分化最適宜培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L。

圖1 愈傷組織分化出不定芽

2.2 不同激素配比對(duì)不定芽增殖分化的影響

試驗(yàn)結(jié)果（表5、圖2）表明，6-BA為0.6 mg/L（B4）的培養(yǎng)基增殖倍數(shù)最高，為5.6，添加NAA 0.2 mg/L培養(yǎng)基上的不定芽生長(zhǎng)快而整齊，葉片大而寬，莖節(jié)短而粗壯，有利于后期生根培養(yǎng)。因此，最適宜繼代增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.2 mg/L+馬鈴薯泥2%+活性炭1g/L+蔗糖30 g/L。

圖2 繼代增殖培養(yǎng)

表5 不同激素配比對(duì)不定芽增殖分化的影響

2.3 再生植株的生根培養(yǎng)

試驗(yàn)結(jié)果（表6）顯示，NAA和IBA均能使不定芽生根，生根率達(dá)100%，但不同激素種類(lèi)、不同濃度對(duì)不定芽生根效果不同。觀察發(fā)現(xiàn)，木鱉子再生植株的根出現(xiàn)較慢，15 d才開(kāi)始有乳白色根壯突起，而后慢慢伸長(zhǎng)，40 d分化出白色根（圖3）。添加NAA 的培養(yǎng)基（C1、C2、C3），不定芽生根比IBA早，生根數(shù)多，根粗而短，但添加IBA的培養(yǎng)基（C4、C5、C6）上的不定芽生根普遍比 NAA 長(zhǎng)，生根數(shù)少，根長(zhǎng)而細(xì)。根的多少和粗度是影響生根苗移栽成活率的主要因素，根多而粗壯，成活率高；根少而細(xì)則成活率低。因此，最佳生根培養(yǎng)基為MS+NAA 0.4 mg/L+香蕉泥5%+活性炭2 g/L+蔗糖20 g/L，平均生根數(shù)達(dá)4.8條，平均根長(zhǎng)3.9 cm（圖 4）。

表6 不同激素濃度對(duì)生根培養(yǎng)的影響

圖3 4 0 d生根狀況

圖4 6 0 d生根狀況

2.4 煉苗與移栽

從移栽30 d后的調(diào)查結(jié)果（表7）看，試驗(yàn)各處理的成活率與不同栽培基質(zhì)配比的透氣、保水性有關(guān)。處理D1透氣性差，保水時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，移栽成活率最低，為73.3%；處理D2、D3透氣性好，保水持續(xù)時(shí)間較短，成活率較低，分別為86.7%和90%；處理D4為腐殖土∶火燒土∶腐熟艾蒿（體積比5∶3∶2）的混合基質(zhì)最好，透氣適宜，保水性較好，移栽成活率最高，達(dá)93.3%。

表7 不同基質(zhì)配比對(duì)移栽成活率的影響

3 結(jié)論

試驗(yàn)研究結(jié)果，以高濃度6-BA 0.8 mg/L誘導(dǎo)木鱉子莖蔓，切口處產(chǎn)生愈傷組織，低濃度6-BA 0.6 mg/L誘導(dǎo)愈傷組織分化再生植株，NAA和KT對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)起到一定的促進(jìn)作用，最適宜愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA0.8 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L，愈傷組織誘導(dǎo)分化率達(dá)66.7%。

在不定芽繼代增殖分化的過(guò)程中，6-BA濃度對(duì)繼代增殖效率起到?jīng)Q定性的作用，生長(zhǎng)素NAA和低濃度的馬鈴薯泥對(duì)不定芽生長(zhǎng)增殖分化有一定的促進(jìn)作用，最適宜不定芽繼代增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.2 mg/L+馬鈴薯泥2%+活性炭1g/L+蔗糖30 g/L，增殖倍數(shù)達(dá)5.6倍，不定芽分化多，生長(zhǎng)健壯，莖節(jié)短。

在生根培養(yǎng)基中添加香蕉泥對(duì)木鱉子不定芽生根有促進(jìn)作用［11］，NAA對(duì)不定芽生根效果好于IBA，最適宜不定芽生根培養(yǎng)基為MS+NAA 0.4 mg/L+香蕉泥5%+活性炭2 g/L+蔗糖20 g/L，平均生根數(shù)達(dá)4.8條，平均根長(zhǎng)達(dá)3.9 cm，不定根分化多而粗壯。生根苗最適宜移栽的基質(zhì)為腐殖土∶火燒土∶腐熟艾蒿（體積比5∶3∶2）的復(fù)合基質(zhì)，環(huán)境條件控制在蔭蔽度85%，相對(duì)濕度70%～80%，溫度22～30℃，移栽成活率可達(dá)93.3%。