大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)及耐藥性分析

蘇芳芳

[摘要] 目的 針對(duì)大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌實(shí)施超廣譜β-內(nèi)酰胺（ESBLs）檢測(cè)，對(duì)其耐藥性進(jìn)行分析。 方法 方便選擇該院2016年1月—2017年12月期間從120例住院患者當(dāng)中進(jìn)行標(biāo)本采集后并進(jìn)行分離，大腸埃希菌共計(jì)161株、肺炎克雷伯菌共計(jì)92株，應(yīng)用細(xì)菌分析檢測(cè)儀針對(duì)大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌進(jìn)行分析鑒定。 結(jié)果 肺炎克雷伯菌以及大腸埃希菌共計(jì)253株，共計(jì)檢出ESBLs菌99株（39.13%）;大腸埃希菌的檢出率是42.24%，肺炎克雷伯菌檢出率是33.70%（χ2=3.261，P=0.000）;肺兩種菌株的ESBLs底物模式以單CTX和CTX/CIAV陽(yáng)性模式為主，均能夠產(chǎn)生ESBLs的菌株。哌拉西林、頭孢噻吩、阿莫西林等藥物的耐藥性可達(dá)到50%～100%，而對(duì)于藥物美羅培南和亞胺培南的耐藥性相對(duì)較低。 結(jié)論 大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌在產(chǎn)出ESBLs菌方面比較嚴(yán)重，多呈現(xiàn)為多重耐藥性，因此醫(yī)院需依據(jù)ESBLs菌特點(diǎn)并結(jié)合第3代頭孢菌素類(lèi)藥物的應(yīng)用情況，實(shí)施多底物的ESBLs菌檢測(cè)。

[關(guān)鍵詞] 大腸埃希菌;肺炎克雷伯菌;檢測(cè);耐藥性

[中圖分類(lèi)號(hào)] R446.5 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1674-0742（2019）02（a）-0181-03

[Abstract] Objective To investigate the drug resistance of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae by detection of extended-spectrum β-lactam （ESBLs）. Methods From January 2016 to December 2017， we convenient selected samples from 120 hospitalized patients. A total of 161 Escherichia coli strains and 92 strains of Klebsiella pneumoniae were used. Analysis and identification of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae. Results A total of 253 strains of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli were detected， and 99 strains of ESBLs were detected （39.13%）. The detection rate of Escherichia coli was 42.24%， and the detection rate of Klebsiella pneumoniae was 33.70% （χ2=3.261， P=0.000）; the ESBLs substrate pattern of both lung strains was dominated by single CTX and CTX/CIAV positive patterns， all of which were able to produce ESBLs. The drug resistance of piperacillin， cefotaxime， amoxicillin and the like can reach 50%-100%， while the resistance to the drugs meropenem and imipenem was relatively low. Conclusion Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae are serious in producing ESBLs， and they are multi-drug resistant. Therefore， hospitals need to implement the characteristics of ESBLs and combine with the application of the third-generation cephalosporins multi-substrate ESBLs test.

[Key words] Escherichia coli; Klebsiella pneumoniae; Detection; Drug resistance

近年來(lái)隨著臨床中對(duì)于第3代頭孢菌素的應(yīng)用率不斷上升，國(guó)內(nèi)外關(guān)于ESBLs的流行情況報(bào)道也在不斷增多[1]。ESBLs是基于腸桿菌科細(xì)菌而產(chǎn)生的，特別是肺炎克雷伯菌以及大腸埃希菌最具代表性個(gè)典型性。屬于質(zhì)粒介導(dǎo)，是基于常規(guī)β-內(nèi)酰胺發(fā)生基因突變后形成的，在其結(jié)合與轉(zhuǎn)化的過(guò)程中，此類(lèi)細(xì)菌當(dāng)中的耐藥基因不斷的擴(kuò)散，因此極易引發(fā)院內(nèi)感染呈流行性暴發(fā)[2]。為了進(jìn)一步掌握ESBLs所具有的耐藥性特征，該次研究將針對(duì)該院2016年1月—2017年12月期間期間的120例住院患者實(shí)施標(biāo)本采集后分離大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌實(shí)施ESBLs檢測(cè)，并對(duì)其耐藥性進(jìn)行探討。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

方便選擇該院從120例住院患者當(dāng)中進(jìn)行標(biāo)本采集后并進(jìn)行分離，應(yīng)用VIT60型細(xì)菌分析檢測(cè)儀針對(duì)大腸埃希菌共計(jì)161株以及肺炎克雷伯菌共計(jì)92株進(jìn)行分析鑒定。班次研究中的質(zhì)控菌株是大腸埃希菌（ATCC26833）。儀器與試劑：VIT60型細(xì)菌分析檢測(cè)儀和GNS602藥敏實(shí)驗(yàn)檢測(cè)卡。藥敏紙片為氨曲南、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢三嗪、頭孢西丁等;M-H瓊脂。

1.2 ?方法

雙紙片協(xié)同實(shí)驗(yàn)：參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作流程規(guī)范》[3]進(jìn)行菌液的制備，應(yīng)用M-H瓊脂將受試菌進(jìn)行涂抹，于平板的中央?yún)^(qū)域粘貼阿莫西林和棒酸紙片，之后需在此符合紙片的四周處粘貼30 μg頭孢三嗪、頭孢噻肟以及頭孢他啶和氨曲南制片。每張紙片的中心均需與復(fù)合紙片的中心保持大約25～30 mm的距離，放置于35℃環(huán)境中進(jìn)行孵育，于20 h后取出。任意一張紙片于符合紙片的周邊發(fā)生協(xié)同現(xiàn)象時(shí)，即可進(jìn)行ESBLs的陽(yáng)性判定。應(yīng)用細(xì)菌檢測(cè)儀和K-B紙片發(fā)針對(duì)細(xì)菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè)。

1.3 ?統(tǒng)計(jì)方法

研究數(shù)據(jù)均以SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）來(lái)進(jìn)行表示，行t檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用率[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 ?ESBLs的檢出率情況

該院于2016年1月—2017年12月期間臨床分離肺炎克雷伯菌以及大腸埃希菌共計(jì)253株，經(jīng)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)共計(jì)檢出ESBLs菌99株，此次的檢出率是39.13%。大腸埃希菌共計(jì)檢出ESBLs菌68株，檢出率是42.24%（68/161）;肺炎克雷伯菌共計(jì)檢出ESBLs菌31株，檢出率是33.70%（31/92）;該次研究中大腸埃希菌相較于肺炎克雷伯菌的ESBLs菌株率更高。

具體比較結(jié)果見(jiàn)表1。兩組資料相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 ?雙紙片法的ESBLs底物模式

雙紙片法下肺炎克雷伯菌與大腸埃希菌兩者的ESBLs底物模式當(dāng)中，主要為單CTX和CTX/CIAV陽(yáng)性模式，其占比分別為69.12/61.29%。單AZ和CAZ/CIAV的陽(yáng)性底物模式占比則分別僅為2.94%、0.00%。因此僅應(yīng)用單AZ和CAZ/CIAV紙片實(shí)驗(yàn)實(shí)施ESBLs檢測(cè)時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致漏檢情況。詳見(jiàn)表2。

2.3 ?肺炎克雷伯菌與大腸埃希菌對(duì)于多種抗生素耐藥性統(tǒng)計(jì)

肺炎克雷伯菌與大腸埃希菌當(dāng)中能夠產(chǎn)生ESBLs的菌株其耐藥性都顯著高于未產(chǎn)生ESBLs的菌株，并且大部分均呈現(xiàn)多重耐藥性。特別是對(duì)于哌拉西林、頭孢噻吩、阿莫西林、頭孢他啶以及替卡西林等藥物的耐藥性較高，可達(dá)到50%～100%。對(duì)于藥物美羅培南和亞胺培南的耐藥性相對(duì)較低，其次是哌拉西林。詳見(jiàn)表3。

3 ?討論

ESBLs菌廣泛的存在于革蘭陰性桿菌當(dāng)中，特別是大腸埃希菌以及肺炎克雷伯菌最具代表性[4-5]。該次研究中大腸埃希菌的檢出率是42.24%，而肺炎克雷伯菌的檢出率是33.70%，該次研究的總檢出率是39.13%，這與黃磊杰等[4]所報(bào)道的37.62%比較相近，但高于王曉麗等[5]所報(bào)道的23.62%，這種陽(yáng)性率之間的差異可能同不同地區(qū)及醫(yī)院所應(yīng)用的第三代頭孢菌索具體種類(lèi)、數(shù)量和時(shí)間等差異而導(dǎo)致的ESBLs篩選和誘導(dǎo)差異有關(guān)。由于ESBLs的產(chǎn)生主要源自于質(zhì)粒介導(dǎo)，因此非常容易造成不同菌屬細(xì)菌之間的轉(zhuǎn)移，應(yīng)引起重視。兩種菌株在陽(yáng)性檢出率方面存在差異可能同地區(qū)差異、院內(nèi)第3代頭孢菌素應(yīng)用情況等有關(guān)。因?yàn)镋SBLs菌的產(chǎn)生是基于質(zhì)粒介導(dǎo)，因而容易發(fā)生不同菌種之間轉(zhuǎn)移，因此需引起臨床醫(yī)學(xué)界的重視[6-9]。該次研究中藥物替卡西林、頭孢噻吩、阿莫西林等耐藥性均較高，分別達(dá)到97.81%、100.00%、97.62%，而美羅培南、亞胺培南以及哌拉西林的耐藥性相對(duì)較低，分別為3.82%、3.84%、7.06%，因此臨床應(yīng)用中需結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果合理選擇藥物，降低耐藥性。這與張鵬亮等[10]報(bào)道的美羅培南（3.64%）、亞胺培南（3.86%）以及哌拉西林（8.25%）的耐藥研究結(jié)果相一致。

大腸埃希菌以及肺炎克雷伯菌的ESBLs試驗(yàn)當(dāng)中.特別是以CTX和CIx/CIAV的檢出陽(yáng)性率最較高，分別達(dá)到69.12%和61.29%;而兩組均呈現(xiàn)陽(yáng)性者則分別高達(dá)44.12%與35.48%：而單CAZ或者CAZ/C1AV組的陽(yáng)性者僅為1例，占比為2.94%。產(chǎn)生ESBLs的大腸埃希菌以及肺炎克雷伯菌其臨床分離的菌株均對(duì)于CTX所具有的耐藥性顯著高于CAZ，這也表明說(shuō)明其內(nèi)因ESBks主要是頭孢噻肟酶，也就是即CTX型酶，因而在表型確認(rèn)試驗(yàn)當(dāng)中需要采取雙紙片試驗(yàn)法，如果僅僅只采用單紙片進(jìn)行的CAZ、或CAZ/CLAV作為底物進(jìn)行試驗(yàn)，則可能會(huì)導(dǎo)致漏檢。產(chǎn)生ESBb的是腸桿菌科的細(xì)菌對(duì)于β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗腎素出現(xiàn)耐藥性的重要影響因素之一。該酶一方面能夠同水解青霉素以及一代和二代頭孢菌素，另一方面還可以水解三代頭孢菌素與單酰胺類(lèi)抗生素，這也給臨床當(dāng)中的患者抗感染治療帶來(lái)了較大的困難。產(chǎn)ESBLs菌對(duì)于臨床當(dāng)中比較常用的諸多抗生素均具有多重耐藥，例如對(duì)于青霉素類(lèi)和頭孢菌素類(lèi)的耐藥性可高達(dá)55%～100%。而其中的大腸埃希菌ESBKs（+）對(duì)于慶大霉索和妥布霉索此兩種氨基苷婁具有的耐藥也可達(dá)到50%以上，然而對(duì)于藥物阿米卡星的耐藥性相對(duì)較低，僅為13.19%，同時(shí)對(duì)于藥物亞胺培南、哌拉西林以及美洛匹寧等藥物具有的銘感度較低，因此可將以上幾種藥物作為臨床中的治療產(chǎn)ESBLs菌感染的優(yōu)選藥物。肺炎克雷伯菌對(duì)于幾種藥物具有的耐藥性程度都高于大腸埃希菌，并且對(duì)于亞胺培南以及美洛匹寧的耐藥率均為8%左右，人對(duì)于哌拉西林的耐藥率則相對(duì)較高，達(dá)到22.89%。除此之外，該次研究中還發(fā)現(xiàn)那些非產(chǎn)ESBLs的腸科桿菌對(duì)于抗生素具有的耐藥性與產(chǎn)ESBLs菌相比其耐藥程度相對(duì)較低，然而也可能存在著不同程度的交叉耐藥性。這也表明超廣譜β-內(nèi)酰胺酶不是唯一引發(fā)的耐藥原因，其因而其耐藥機(jī)制應(yīng)該引起臨床中的重視。

綜上所述，大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌在產(chǎn)出ESBLs菌方面比較嚴(yán)重，多呈現(xiàn)為多重耐藥性，因此醫(yī)院需依據(jù)ESBLs菌特點(diǎn)并結(jié)合第3代頭孢菌素類(lèi)藥物的應(yīng)用情況，實(shí)施多底物的ESBLs菌檢測(cè)。

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（收稿日期：2018-11-06）