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      黃芪多糖對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞凋亡的影響

      2019-07-15 08:43趙淑敏
      現(xiàn)代養(yǎng)生·下半月 2019年6期
      關(guān)鍵詞:凋亡

      【摘 要】目的:探討黃芪多糖(簡(jiǎn)稱(chēng)APS)對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞凋亡產(chǎn)生的影響。方法:經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)來(lái)研究APS對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞凋亡產(chǎn)生的影響,而APS在K562細(xì)胞之中對(duì)Caspase-3產(chǎn)生的影響可通過(guò)Caspase-3活性測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè);經(jīng)Western blot以及RT-PCR對(duì)對(duì)照組(K562細(xì)胞)及APS組(通過(guò)200mg/L的APS進(jìn)行48h誘導(dǎo)形成的K562細(xì)胞)之中的Bcl-XL、Bcl-2、IAP-1、Bax、Smac mRNA和蛋白進(jìn)行表達(dá)。結(jié)果:APS組細(xì)胞凋亡數(shù)量相較于對(duì)照組更高,兩組有顯性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05;APS組K562細(xì)胞中的Caspase-3相較于對(duì)照組明顯增加,但I(xiàn)AP-1及Bcl-2的mRNA和蛋白的表達(dá)都顯示降低,而Smac以及Bax的mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯增加,兩組有顯性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05;兩組在Bcl-XL的mRNA和蛋白方面的表達(dá)無(wú)顯性差異,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05。結(jié)論:APS對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)凋亡可能是通過(guò)對(duì)Smac、Bax上調(diào)以及對(duì)IAP-1、Bcl-2下調(diào)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

      【關(guān)鍵詞】黃芪多糖;人紅白血病;K562細(xì)胞;凋亡

      白血病是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤,此癥使人類(lèi)健康受到嚴(yán)重的威脅,白血病細(xì)胞在生長(zhǎng)的過(guò)程中具有凋亡受阻、增殖失控以及分化障礙等特點(diǎn)[1]。而APS屬于黃芪的活性成分之一,其具有抗應(yīng)激、降血壓、降血糖、強(qiáng)心以及抗病毒等功效,相關(guān)研究表明[2]APS能夠有效抑制多種惡性腫瘤,為了研究APS對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞凋亡的影響,本次研究通過(guò)試驗(yàn)檢測(cè)對(duì)APS組和對(duì)照組中的Bcl-XL、Bcl-2、IAP-1、Bax、Smac mRNA和蛋白進(jìn)行表達(dá),目的旨在研究APS對(duì)白血病治療的依據(jù),現(xiàn)做如下報(bào)道。

      1 一般資料以及主要方法

      1.1 一般資料

      1.1.1 細(xì)胞來(lái)源和培養(yǎng)

      K562細(xì)胞主要來(lái)源于本地細(xì)胞庫(kù),通過(guò)使用10%(體積分?jǐn)?shù))的胎牛血清(簡(jiǎn)稱(chēng)FBS)、100mg/L鏈霉素以及100U/mL青霉素所形成的RPMI培養(yǎng)基參與細(xì)胞培養(yǎng),并置于5%(體積分?jǐn)?shù))的CO2培養(yǎng)箱之中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)箱溫度為37℃。

      1.1.2 試劑

      (1)FBS:杭州四季青有限公司生產(chǎn);

      (2)Trizol試劑、RPMI培養(yǎng)基以及100bp DNA Marker:美國(guó)Invitrogen公司生產(chǎn);

      (3)Taq DNA聚合酶、RT-PCR試劑盒、dNTPs:日本TAKARA公司生產(chǎn);

      (4)Annexin V-FITC/PI:碧云天生物科技有限公司生產(chǎn);

      (5)化學(xué)發(fā)光試劑盒:美國(guó)Santa Cruz公司生產(chǎn);

      (6)Colorimetric試劑盒、CaspACETM Assay System試劑盒:美國(guó)Promega公司生產(chǎn)。

      1.2 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

      1.2.1 細(xì)胞凋亡檢測(cè)

      收集對(duì)照組(K562細(xì)胞)及APS組(通過(guò)200mg/L的APS進(jìn)行48h誘導(dǎo)形成的K562細(xì)胞)樣本,并對(duì)細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)量。通過(guò)195μL的Annexin V-FITC結(jié)合也將收集的細(xì)胞進(jìn)行重懸,然后向其中加入5μL的Annexin V-FITC,進(jìn)行10min的避光孵育,離心5min,1000r/min,去除上清。并通過(guò)190μL的Annexin V-FITC再次對(duì)細(xì)胞進(jìn)行重懸,然后向其中加入10μL的染色液(碘化丙啶),并于冰上對(duì)其進(jìn)行避光孵育,然后通過(guò)上流式細(xì)胞儀完成凋亡細(xì)胞數(shù)量的計(jì)量。實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中需要設(shè)置3個(gè)平行樣本。

      1.2.2 Caspase-3活性測(cè)定

      將APS組和對(duì)照組中的K562細(xì)胞總蛋白進(jìn)行提取,并對(duì)其進(jìn)行定量。然后進(jìn)行Caspase-3活性測(cè)定,測(cè)定方法需嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定操作,并將相應(yīng)試劑依次加入到96孔板中使反應(yīng)混合物得以制備完成。兩組各設(shè)3個(gè)復(fù)孔,并設(shè)置空白對(duì)照孔(不加蛋白)。然后向每孔加入2μL的AC-DEVA-PNA底物,避光培育,溫度設(shè)定為37℃,時(shí)間設(shè)定為4h,并對(duì)405nm位置的光密度值進(jìn)行測(cè)定,同時(shí)將各組的平均值進(jìn)行計(jì)算,將各組所得平均值檢出空白對(duì)照平均值所形成的差值來(lái)對(duì)Caspase-3活性進(jìn)行表示。

      1.2.3 Western blot及RT-PCR檢測(cè)

      (1)Western blot檢測(cè):將兩組K562細(xì)胞總蛋白進(jìn)行提取,同時(shí)進(jìn)行定量,應(yīng)用Western blot法進(jìn)行檢測(cè)。將β-actin當(dāng)做內(nèi)參照。上樣量設(shè)定為100μg,Bcl-XL、Bcl-2、Bax、IAP-1、Smac、β-actin克隆抗體的稀釋度分別為100倍、150倍、150倍、100倍、150倍。并通過(guò)軟件對(duì)目的條帶同內(nèi)參照條帶之間的灰度比值進(jìn)行分析。

      (2)RT-PCR檢測(cè):將兩組K562細(xì)胞總RNA進(jìn)行提取,同時(shí)進(jìn)行定量,完成cDNA第一條鏈的體外合成,并將cDNA當(dāng)做模板來(lái)完成PCR反應(yīng),然后使用軟件對(duì)PCR擴(kuò)增物的目的條帶同內(nèi)參照條帶之間的灰度比值進(jìn)行分析。

      1.3 觀察指標(biāo)

      本次研究選擇的觀察指標(biāo)為Caspase-3、Bcl-XL、Bcl-2、IAP-1、Bax、Smac mRNA和蛋白。

      1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

      此次研究在數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方面使用的軟件版本為SPSS20.0,以()表示計(jì)量資料,采用t檢驗(yàn),以率(%)表示計(jì)數(shù)資料,采用X2檢驗(yàn),當(dāng)顯性差異出現(xiàn)時(shí),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05。

      2 結(jié)果

      2.1 APS對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞凋亡產(chǎn)生的影響

      通過(guò)檢測(cè),APS組中K562細(xì)胞凋亡數(shù)量為(3319.00±408.64)個(gè),相較于對(duì)照組(104.84±19.17)個(gè)更多,兩組有顯性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05,t=14.2831。

      2.2 APS對(duì)Caspase-3產(chǎn)生的影響

      APS組Caspase-3活性為(0.349±0.032),相較于對(duì)照組Caspase-3活性(0.092±0.011)更高,兩組有顯性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05,t=4.7436。

      2.3 APS對(duì)Bcl-XL、Bcl-2、IAP-1、Bax、Smac表達(dá)產(chǎn)生影響

      如表1~2,APS組K562細(xì)胞中的IAP-1及Bcl-2的mRNA和蛋白的表達(dá)相較于對(duì)照組都顯示降低,而Smac以及Bax的mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯增加,兩組有顯性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05;兩組在Bcl-XL的mRNA和蛋白方面的表達(dá)無(wú)顯性差異,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05。

      3 討論

      常規(guī)下細(xì)胞凋亡及增殖之間達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡時(shí),可對(duì)機(jī)體穩(wěn)定性進(jìn)行維持,而凋亡和增殖一旦出現(xiàn)失衡,將可能造成腫瘤產(chǎn)生[3]。而細(xì)胞凋亡受基因調(diào)控的影響較大,其中,Caspase家族便是關(guān)鍵分子,Caspase家族成員一般都具備半胱氨酸蛋白酶活性,Caspase-8以及Caspase-9在凋亡途徑中處于上游位置,而Caspase-3則屬于凋亡效應(yīng)因子,Caspase家族形成的級(jí)聯(lián)激活共同導(dǎo)致細(xì)胞凋亡出現(xiàn)[4]。

      對(duì)于Caspase家族激活方面,Bcl-2家族在對(duì)其激活過(guò)程中能夠發(fā)揮調(diào)控作用,其屬于一種蛋白因子,在參與細(xì)胞凋亡調(diào)控過(guò)程中,具體以線粒體這一途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)調(diào)控的[5]。從Bcl-2家族在細(xì)胞凋亡方面發(fā)揮的作用來(lái)看,其家族蛋白通??煞謨深?lèi),分別為促進(jìn)凋亡蛋白(Bax等)和抑制凋亡蛋白(Bcl-XL、Bcl-2等),后者能夠?qū)?xì)胞出現(xiàn)的凋亡進(jìn)行抑制,從而使細(xì)胞的壽命得到延長(zhǎng),而前者則能夠使Caspase家族得以激活,從而造成細(xì)胞凋亡產(chǎn)生[6]。此外,還有研究表明[7],Smac能夠同IAPs之間進(jìn)行結(jié)合從而使Caspase得以釋放,最終促進(jìn)細(xì)胞凋亡;而XIAP、Livin則能夠使Smac釋放減少,從而使細(xì)胞凋亡被抑制[8],為此,此次研究特將上述指標(biāo)加入到研究之中,以明確APS對(duì)K562細(xì)胞凋亡發(fā)揮的機(jī)制影響。

      本次研究中,APS組細(xì)胞凋亡數(shù)量多于對(duì)照組,且APS組K562細(xì)胞中的Caspase-3相較于對(duì)照組明顯增加,但I(xiàn)AP-1及Bcl-2的mRNA和蛋白的表達(dá)都顯示降低, Smac以及Bax的mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯增加,兩組有顯性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05;兩組在Bcl-XL的mRNA和蛋白方面的表達(dá)無(wú)顯性差異,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05。此結(jié)果能夠與上述機(jī)理對(duì)應(yīng),說(shuō)明APS可對(duì)K562細(xì)胞凋亡產(chǎn)生重要影響。

      綜上所述,APS對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)凋亡可能是通過(guò)對(duì)Smac、Bax上調(diào)以及對(duì)IAP-1、Bcl-2下調(diào)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

      參考文獻(xiàn)

      [1]張海兵,辛勇,唐天友等.低劑量照射對(duì)人紅白血病細(xì)胞株 K562凋亡、Bcl-2、Bax及p53蛋白表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)醫(yī)刊,2015(09):65-69.

      [2]羅昊,孟贊,劉澤洪等.阿糖胞苷通過(guò)自噬途徑影響K562細(xì)胞增殖凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J].重慶醫(yī)學(xué),2017(13):14-17.

      [3]孫華麗,洪其軍.X射線照射后Rac1蛋白對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞凋亡的影響[J].醫(yī)學(xué)信息,2014(13):46-47.

      [4]王淡瑜,劉澤林,金夢(mèng)迪等.PKF118-310對(duì)白血病K562細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制[J].白血病·淋巴瘤,2016,25(06)344-348.

      [5]魏萬(wàn)敏.大蒜素對(duì)人白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J].醫(yī)學(xué)美學(xué)美容旬刊,2014(07):141-141.

      [6]張帥帥,鮮敬榮,鄒琴等.敲低TRAF6對(duì)白血病K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其分子機(jī)制[J].中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào),2015(12):1659-1665.

      [7]封蔚瑩,周煬,劉忠民.高三尖杉酯堿聯(lián)合survivin抑制劑YM155對(duì)人白血病K562細(xì)胞系增殖和凋亡的影響[J].臨床血液學(xué)雜志,2015(02):209-211.

      [8]廖瓊,孫玉梅,姜夏薇等.DBO對(duì)人慢性髓系白血病細(xì)胞K562增殖和凋亡以及自噬影響[J].中華腫瘤防治雜志,2017(19):1342-1348.

      作者簡(jiǎn)介

      趙淑敏(1990-),女 ,山東省菏澤市人。住院醫(yī)師。研究方向?yàn)檠簝?nèi)科。

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