劉若男　陳奎生

【摘要】 目的 探討Livin、Survivin是否與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)并評(píng)價(jià)兩者的相互關(guān)系。方法 利用免疫組化法檢測(cè)76例卵巢癌、24例卵巢良性上皮性腫瘤標(biāo)本中Livin、Survivin蛋白表達(dá)的情況。結(jié)果 卵巢癌中Livin陽(yáng)性率為81.58%， 顯著高于卵巢良性上皮性腫瘤的33.33%（P<0.05）。卵巢癌中Survivin陽(yáng)性率為63.16%， 明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤的25.00%（P<0.05）。Livin蛋白表達(dá)陽(yáng)性的卵巢癌中， Survivin的陽(yáng)性表達(dá)率為64.52%；Livin蛋白表達(dá)陰性的卵巢癌中， Survivin的陽(yáng)性表達(dá)率為57.14%， 相關(guān)分析表明兩者表達(dá)無(wú)相關(guān)性（χ2=0.267， P>0.05）。結(jié)論 Livin、Survivin與卵巢癌的發(fā)生密切相關(guān)， 但兩者在卵巢癌中的轉(zhuǎn)錄途徑可能具有差異。

【關(guān)鍵詞】 卵巢癌；Livin；Survivin；凋亡；免疫組化

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.07.002

Research of expression and correlation of Livin and Survivin in ovarian cancer LIU Ruo-nan， CHEN Kui-sheng. Department of Gynecological Tumor， Affiliated Tumor Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450008， China

【Abstract】 Objective To investigate relationship of Livin and Survivin with occurrence and development of ovarian cancer， and evaluate correlation between them. Methods Immunohistochemistry test was applied to detect expression of Livin and Survivin in 76 ovarian cancer cases and 24 benign ovarian epithelial tumor cases. Results Positive rate of Livin in ovarian cancer was much higher as 81.58% than 33.33% in benign ovarian epithelial tumor （P<0.05）. Positive rate of Survivin in ovarian cancer was much higher as 63.16% than 25.00% in benign ovarian epithelial tumor （P<0.05）. In ovarian cancer with positive Livin protein， the positive expression rate of Survivin was 64.52%， which was 57.14% in ovarian cancer with negative Livin protein. The analysis showed no correlation between them （χ2=0.267， P>0.05）. Conclusion Livin and Survivin are closely related with occurrence of ovarian cancer， while there may be difference in transcription way between them in ovarian cancer.

【Key words】 Ovarian cancer； Livin； Survivin； Apoptosis； Immunohistochemistry

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一， 晚期患者5年生存率僅為25%～30%。研究揭示凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein， IAP）在細(xì)胞凋亡的調(diào)控中發(fā)揮非常重要的作用， 其中Livin、Survivin為最引人注目的兩個(gè)成員。Survivin在許多腫瘤包括在卵巢癌中的表達(dá)國(guó)內(nèi)外已有許多報(bào)道。Livin和Survivin一樣， 在某些惡性腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞中高表達(dá)， 但在卵巢癌中的表達(dá)方式至今仍不清楚[1]?；谝陨峡紤]， 本研究擬采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)Livin、Survivin蛋白在良、惡性卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)， 分析卵巢癌組織中Livin與Survivin蛋白表達(dá)的相關(guān)性， 旨在加深對(duì)卵巢癌變分子基礎(chǔ)的了解， 為卵巢癌的防治提供重要的理論基礎(chǔ)和手段， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 組織標(biāo)本收集鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科保存的上皮原發(fā)性卵巢腫瘤石蠟標(biāo)本共100例， 所有標(biāo)本常規(guī)HE染色， 請(qǐng)兩名病理專家認(rèn)定。其中卵巢癌標(biāo)本76例， 供體年齡25～76歲， 平均年齡（53.70±7.43）歲， 手術(shù)前均未接受放、化療等治療；包含45例漿液性乳頭狀囊腺癌， 22例粘液性囊腺癌， 8例子宮內(nèi)膜樣腺癌， 1例透明細(xì)胞癌；高分化癌18例， 中分化癌31例， 低分化癌27例；Ⅰ期卵巢癌7例， Ⅱ期卵巢癌17例， Ⅲ期卵巢癌46例， Ⅳ期卵巢癌6例。卵巢良性上皮性腫瘤標(biāo)本24例， 供體年齡28～69歲， 平均年齡（46.30±7.28）歲；包含19例漿液性乳頭狀囊腺瘤， 5例粘液性囊腺瘤。

1. 2 研究方法 本研究參照說(shuō)明書(shū)行免疫組織化學(xué)SP法， 光學(xué)顯微鏡下Livin和Survivin免疫組化產(chǎn)物為棕黃色細(xì)顆粒狀， 多位于細(xì)胞質(zhì)， 偶可見(jiàn)于細(xì)胞核。隨機(jī)觀察10個(gè)高倍鏡下視野并參照文獻(xiàn)[2]：據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占所有腫瘤細(xì)胞數(shù)的百分比計(jì)算出Livin和Survivin蛋白的表達(dá)率， 同時(shí)根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度分別記錄為：（++）陽(yáng)性細(xì)胞的面積≥50%， 深染色；（+）陽(yáng)性細(xì)胞的面積≥10%， <50%， 較深染色；（-）無(wú)明顯陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞面積<10%， 淺染色。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)；使用Spearman相關(guān)檢驗(yàn)方法分析指標(biāo)間有無(wú)相關(guān)性。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 卵巢腫瘤中Livin的表達(dá)情況 76例卵巢癌組織和24例卵巢良性上皮性腫瘤組織中， Livin蛋白表達(dá)的陽(yáng)性數(shù)分別為62例和8例， 陽(yáng)性表達(dá)率分別為81.58%、33.33%， 兩種病理類型陽(yáng)性表達(dá)情況比較， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2. 2 卵巢腫瘤中Survivin的表達(dá)情況 76例卵巢癌組織和24例卵巢良性上皮性腫瘤組織中， Survivin蛋白表達(dá)的陽(yáng)性數(shù)分別為48例和6例， 陽(yáng)性表達(dá)率分別為63.16%和25.00%， 兩種病理類型陽(yáng)性表達(dá)情況比較， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2. 3 卵巢癌中Livin和Survivin表達(dá)的相關(guān)性 62例Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)的卵巢癌組織中， Survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)40例， 其陽(yáng)性表達(dá)率為64.52%；14例Livin蛋白表達(dá)陰性組織中， Survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)8例， 其陽(yáng)性表達(dá)率為57.14%。通過(guò)Spearman相關(guān)分析表明兩者的表達(dá)無(wú)相關(guān)性（χ2=0.267， P>0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

腫瘤的發(fā)生與發(fā)展離不開(kāi)細(xì)胞凋亡/增殖的失衡， 細(xì)胞凋亡抑制是正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞的重要因素， IAP家族就是一類存在于多個(gè)物種中的凋亡抑制蛋白。

3. 1 Livin蛋白在卵巢癌發(fā)生與發(fā)展中的作用 Livin蛋白含有一個(gè)桿狀病毒IAP重復(fù)區(qū)（baculoviral IAP repeat， BIR）結(jié)構(gòu)， 在羧基端還有一個(gè)環(huán)指樣結(jié)構(gòu)。BIR結(jié)構(gòu)域是Livin蛋白發(fā)揮其抗凋亡活性的最主要因素， 環(huán)指樣結(jié)構(gòu)域能夠介導(dǎo)其于亞細(xì)胞水平的分布。凋亡刺激信號(hào)達(dá)到一定強(qiáng)度作用于細(xì)胞后， Caspase的酶水解作用就會(huì)被激活， 從而執(zhí)行凋亡功能[3]。Livin的信號(hào)通路既有外在途徑（細(xì)胞表面死亡受體）， 又有內(nèi)在途徑（細(xì)胞色素C及化學(xué)藥物）， 均能夠干擾Caspase的活性而抑制細(xì)胞的凋亡。本研究采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)了76例卵巢癌組織和24例卵巢良性上皮性腫瘤組織中Livin蛋白的表達(dá)， 陽(yáng)性率分別為81.58%、33.33%。卵巢癌明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤， 這表明Livin與卵巢癌的發(fā)生有密切關(guān)系。

3. 2 Survivin蛋白在卵巢癌發(fā)生與發(fā)展中的作用 Survivin在結(jié)構(gòu)上與其他IAP家族成員有所不同， 表現(xiàn)為N端僅有一個(gè)半胱氨酸/組氨酸為基礎(chǔ)的鋅指結(jié)構(gòu)——部分保守的BIR， C端無(wú)環(huán)指結(jié)構(gòu)， 代之以α螺旋纏繞區(qū)， 體外實(shí)驗(yàn)顯示缺失該結(jié)構(gòu)可增強(qiáng)其凋亡抑制功能。Survivin通過(guò)直接或間接抑制Caspase的活性來(lái)阻斷內(nèi)、外源性兩個(gè)凋亡途徑中的最后通路而抑制凋亡， 還可間接借助分子中唯一的BIR結(jié)構(gòu)同線粒體活化因子Smac/DIABLO相作用， 抑制Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)[4]。本研究采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)76例卵巢癌組織和24例卵巢良性上皮性腫瘤中Survivin蛋白的表達(dá)， 陽(yáng)性率分別為63.16%、25.00%。卵巢癌明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤， 這表明Survivin與卵巢癌的發(fā)生同樣具有密切聯(lián)系。

3. 3 Livin和Survivin在卵巢癌中的相關(guān)性 Livin與Survivin雖然同屬于IAP家族， 但它們之間仍存在較多區(qū)別。Livin的C端有一個(gè)環(huán)指樣結(jié)構(gòu)， 而Survivin卻沒(méi)有；Livin蛋白只有26.3%的氨基酸序列和Survivin一樣；在腫瘤中Survivin既能調(diào)節(jié)凋亡也能調(diào)節(jié)分化， Livin只能調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡[5]。有研究發(fā)現(xiàn)正常膀胱組織中Livin不表達(dá)， 膀胱癌組織中卻高度表達(dá)， 認(rèn)為L(zhǎng)ivin可成為早期判斷膀胱癌復(fù)發(fā)的一個(gè)敏感指標(biāo)， 而不建議Survivin作為判斷膀胱癌是否復(fù)發(fā)的腫瘤標(biāo)志物[6]。Yagihashi等[7] 的研究提示胃腸道癌患者Livin抗體表達(dá)的陽(yáng)性率為47.00%， 并且和Survivin抗體沒(méi)有相關(guān)性。然而在卵巢癌組織中Livin與Survivin的表達(dá)有無(wú)相關(guān)性國(guó)內(nèi)還未見(jiàn)報(bào)道， 國(guó)外報(bào)道也很少。本研究結(jié)果顯示， Livin和Survivin蛋白在卵巢癌組織中的含量顯著高于卵巢良性上皮性腫瘤組織（P<0.05）。這表明兩者均在卵巢癌的發(fā)生中起了重要的促進(jìn)作用， 可能具有協(xié)同作用。但在實(shí)驗(yàn)中顯示卵巢癌組織中Livin蛋白與Survivin蛋白的表達(dá)無(wú)相關(guān)性， 提示了這兩個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄途徑可能具有差異。

參考文獻(xiàn)

[1] Yan B. Research progress on Livin protein： an inhibitor of apoptosis.Mol Cell Biochem， 2011， 357（1-2）：39-45.

[2] Lu S， Zhang B， Wang Z. Expression of survivin， cyclin D1， P21（WAF1）， caspase-3 in cervical cancer and its relation with prognosis. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci， 2005， 25（1）： 78-81.

[3] Premkumar DR， Jane EP， Pollack IF. Cucurbitacin-I inhibits Aurora kinase A， Aurora kinase B and survivin， induces defects in cell cycle progression and promotes ABT-737-induced cell death in a caspase-independent manner in malignant human glioma cells. Cancer Biol Ther， 2015， 16（2）：233-243.

[4] Liu T， Brouha BD. Rapid induction of mitochondrial events and caspase-independent apoptosis in Survivin-targeted melanoma cells. Oncogene， 2004， 23（1）：39-48.

[5] Crnkovi?-Mertens I， Semzow J， Hoppe-Seyler F， et al. Isoform-specific silencing of the Livin gene by RNA interference defines Livin beta as key mediator of apoptosis inhibition in HeLa cells. J Mol Med（Berl）， 2006， 84（3）：232-240.

[6] Xi RC， Sheng YR， Chen WH， et al. Expression of survivin and livin predicts early recurrence in non-muscle invasive bladder cancer. J Surg Oncol， 2013， 107（5）：550-554.

[7] Yagihashi A， Asanuma K， Tsuji N， et al. Detection of anti-livin antibody in gastrointestinal cancer patients. Clin Chem， 2003， 49（7）： 1206-1208.

[收稿日期：2015-10-29]