衣原體作為嚴(yán)格胞內(nèi)寄生的病原菌，其感染宿主遍及單細(xì)胞生物(阿米巴)、動物和人類[1]。目前已發(fā)現(xiàn)的對人類致病的衣原體有沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis，Ct)、鸚鵡熱嗜衣原體(Chlamydophilapsittaci，Cps)、肺炎嗜衣原體(Chlamydophilapneumoniae，Cpn)、流產(chǎn)嗜衣原體(Chlamydophilaabortus)等[1-2]。衣原體通過多種途徑感染宿主，且感染部位多，臨床病例以沙眼、呼吸系統(tǒng)及泌尿生殖系統(tǒng)疾病較為常見[2-3]。全面了解衣原體的致病機(jī)制，尋找有應(yīng)用價值的分子靶標(biāo)來有效預(yù)防和控制衣原體感染尤為重要。衣原體致病機(jī)制復(fù)雜，現(xiàn)存的基因改造工具效率低，基因操作比較困難，這很大程度上限制了對其致病機(jī)制的探索。本文主要從衣原體致病機(jī)制研究方法或研究策略的角度進(jìn)行綜述，為全面分析衣原體功能機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

1 衣原體致病物質(zhì)

目前發(fā)現(xiàn)的衣原體致病物質(zhì)有黏附素(adhesion)、包涵體膜蛋白(Inclusion membrane protein，Inc)、衣原體蛋白酶樣活性因子(chlamydial protease-like activity factor，CPAF)、尾特異性蛋白酶(the tail-specific protease，Tsp)、高溫需要A蛋白(high temperature requirement protein A，HtrA)、衣原體分泌性蛋白、紅細(xì)胞凝集素、脂多糖(lipopolysacharide，LPS)、巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)蛋白(MIP蛋白)等。衣原體感染形式原體(elementary body，EB)黏附于宿主細(xì)胞表面是致病過程至關(guān)重要的一步，EB表面各種蛋白可與宿主表面受體結(jié)合，其中最主要的有主要外膜蛋白[4](major outer membrane protein，MOMP)、衣原體外膜蛋白2[5](outer membrane protein，Omp2/OmcB)及多形態(tài)膜蛋白(polymorphic membrane proteins，Pmp)[6]等，介導(dǎo)衣原體粘附于宿主細(xì)胞表面，但其確切作用機(jī)制仍不清楚。

衣原體進(jìn)入細(xì)胞后，于胞質(zhì)內(nèi)形成包涵體，并在包涵體中繁殖發(fā)育。包涵體不僅為衣原體繁殖提供微環(huán)境，而且保護(hù)衣原體免遭宿主免疫系統(tǒng)的的識別和清除。同時衣原體必須通過包涵體從宿主細(xì)胞中攝取營養(yǎng)以及信號的轉(zhuǎn)換。Inc是包涵體主要組成成分，是衣原體基因編碼、表達(dá)定位于包涵體上的蛋白質(zhì)。在衣原體生長發(fā)育中Inc發(fā)揮重要作用[7]，但是與宿主細(xì)胞相互作用過程中的功能機(jī)制尚不清楚。另外，CPAF[8]、Tsp[9]、HtrA[10]、Pgp3[11]以及其它衣原體分泌性蛋白等在衣原體逃避宿主免疫識別、抑制NF-kB促炎信號通路、發(fā)揮水解蛋白活性、重組細(xì)胞骨架、抗宿主免疫等方面發(fā)揮重要作用，其具體功能機(jī)制仍待探究(表1)。

表1 衣原體致病物質(zhì)及相關(guān)功能
Tab.1 Pathogenic substances ofChlamydiaand their related functions

致病物質(zhì)功能粘附素(MOMP、OmcB、Pmp)通過與宿主細(xì)胞表面受體結(jié)合而參與致病[4-6]包涵體膜蛋白與高爾基復(fù)合體相關(guān)Rab GTP酶相互作用干擾宿主細(xì)胞能量代謝;促進(jìn)包涵體膜融合;調(diào)控細(xì)胞周期[7, 11-13]衣原體蛋白酶樣活性因子使衣原體免受T細(xì)胞B細(xì)胞的特異性識別;改變細(xì)胞周期和細(xì)胞骨架蛋白;在感染早期抑制凋亡[8, 14]尾特異性蛋白酶使NF-kB信號通路受阻從而抑制促炎細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄[9]高溫需要A蛋白 HtrA的PDZ區(qū)域可以調(diào)控蛋白酶活性[10]衣原體分泌性蛋白 (Tarp、CPAF)Tarp在細(xì)胞內(nèi)被快速磷酸化,可能啟動和參與調(diào)節(jié)肌動蛋白募集反應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[15]脂多糖維持EB特異性外膜蛋白穩(wěn)定、表達(dá)和定位[16]巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)蛋白刺激衣原體感染細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子[17]

2 致病機(jī)制研究策略

2.1比較基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)(質(zhì)譜分析)—尋找毒力因子、篩選差異表達(dá)蛋白 為了明確衣原體對人類和動物的致病機(jī)理，研究人員通過基因組學(xué)與蛋白組學(xué)對衣原體開展研究?；蚪M學(xué)是以生物體的全部基因為研究對象，對所有基因進(jìn)行基因組作圖，核苷酸序列分析，基因定位和基因功能分析的一門科學(xué)，以闡明生物基因組DNA中堿基對的序列情況，破譯其遺傳信息。 Russell[18]在體外競爭實驗中發(fā)現(xiàn)了致病性減弱的衣原體菌株，對其進(jìn)行基因組雜交發(fā)現(xiàn)減毒株tc0236基因的堿基置換，由此得出tc0236是參與衣原體致病的染色體基因。Chen[19]等將衣原體體外傳代，獲得了對小鼠生殖道致病率大大降低的減毒株，全基因組測序和比較基因組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)TC0668是衣原體致小鼠生殖道病變的毒力因子。衣原體減毒株還可經(jīng)紫外線或化學(xué)誘變劑如甲基磺酸乙酯(EMS)或乙基亞硝基脲(ENU)處理而獲得。CtL2型菌株經(jīng)EMS或ENU誘變后，全基因組測序比對出現(xiàn)84個開放閱讀框(open reading frames，ORFs)的無義突變，通過構(gòu)建對應(yīng)的突變株細(xì)胞感染模型，發(fā)現(xiàn)CtORFs參與糖代謝、DNA損傷及毒性作用[20]。Ct多形態(tài)膜蛋白D(PmpD)是一種高度保守的自轉(zhuǎn)運蛋白，Kari[21]等以制備的CtPmpD缺失株與野生株比較，發(fā)現(xiàn)CtPmpD缺失株接種的小鼠上生殖道其病理癥狀明顯弱于野生組，從而發(fā)現(xiàn)pmpD的毒力作用。CPAF被認(rèn)為是調(diào)控衣原體與宿主細(xì)胞相互作用關(guān)系的功能性蛋白酶，Snavely[22]等構(gòu)建CPAF缺失的衣原體細(xì)胞感染模型，其子代衣原體呈現(xiàn)生長發(fā)育缺陷現(xiàn)象，揭示了CPAF在衣原體復(fù)制方面的重要調(diào)控作用。比較基因組學(xué)從全基因角度對物種的遺傳與進(jìn)化進(jìn)行系統(tǒng)分析。對于物種間毒力丟失的研究，該方法可以快速鑒定物種間發(fā)生的所有突變，進(jìn)而闡明毒力丟失的分子機(jī)制。

蛋白質(zhì)是轉(zhuǎn)錄翻譯后表達(dá)的產(chǎn)物，蛋白質(zhì)組學(xué)是大規(guī)模研究蛋白質(zhì)的特征，包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，翻譯后的修飾，蛋白與蛋白相互作用(protein-protein interaction，PPI)等，由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生，細(xì)胞代謝等過程的整體而全面的認(rèn)識，與比較基因組學(xué)相輔相成?；谇捌诘贸龅腡C0668為毒力因子，研究人員可通過建立單基因差異型菌株細(xì)胞感染模型，iTRAQ相對定量蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析篩選出致病相關(guān)分子及信號通路，基因敲除小鼠進(jìn)行信號通路驗證等，進(jìn)一步揭示TC0668可能致病機(jī)制。Yang[23]等構(gòu)建轉(zhuǎn)錄激活因子CtChxR突變株細(xì)胞感染模型，與未突變組相比，蛋白質(zhì)組學(xué)分析有CT005、 CT214、 CT565、 CT694和CT695蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)，這5種蛋白歸屬于包涵體膜蛋白及三型分泌系統(tǒng)蛋白，表明ChxR是調(diào)節(jié)毒力基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄激活因子。同樣地，對衣原體質(zhì)?；騪gp4的調(diào)控功能進(jìn)行研究，建立pgp4單基因差異型菌株細(xì)胞感染模型，蛋白質(zhì)組學(xué)分析突變組有CPAF表達(dá)下調(diào)，從而說明pgp4能夠負(fù)向調(diào)節(jié)CPAF表達(dá)[24]。隨著人類基因組計劃的實施和推進(jìn)，生命科學(xué)研究已進(jìn)入了后基因組時代。在這個時代，生命科學(xué)的主要研究對象是功能基因組學(xué)，包括結(jié)構(gòu)基因組研究和蛋白質(zhì)組研究等。蛋白質(zhì)是生理功能的執(zhí)行者，是生命現(xiàn)象的直接體現(xiàn)者，對蛋白質(zhì)復(fù)雜的翻譯后修飾、蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位或遷移、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用等進(jìn)行研究，將直接闡明衣原體在生理或病理條件下的作用機(jī)制。

2.2從大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)、哺乳動物細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)到衣原體轉(zhuǎn)化系統(tǒng)—靶基因功能研究手段的更新

2.2.1大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng) 原核表達(dá)系統(tǒng)是目前掌握最為成熟的表達(dá)系統(tǒng)，大腸桿菌是常用的原核表達(dá)系統(tǒng)。構(gòu)建衣原體目的基因的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，靶基因連同載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌，通過誘導(dǎo)表達(dá)、純化獲得目的蛋白。已知肽聚糖是一種細(xì)菌必需的糖/氨基酸聚合物，它由D-谷氨酸參與合成。大腸桿菌D-谷氨酸由谷氨酸消旋酶(Murl)基因編碼產(chǎn)生，而在衣原體中卻沒有發(fā)現(xiàn)Murl的同源基因。結(jié)合前期研究結(jié)果，為了探索CtdapF基因擁有編碼肽聚糖合成酶的功能，George克隆dapF基因通過pBAD18載體轉(zhuǎn)化到Murl缺失的大腸桿菌中，結(jié)果使Murl缺失的大腸桿菌由缺陷生長發(fā)展為恢復(fù)正常生長，說明CtdapF基因編碼活性的D-谷氨酸消旋酶[25]。Ct脂蛋白MIP(D541)對宿主細(xì)胞具有致病作用，Wang[26]通過建立大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)誘導(dǎo)Ct重組脂蛋白(D381、D541、D067、D775)表達(dá)，通過一系列檢測項目發(fā)現(xiàn)Ct脂蛋白通過MyD88依賴信號通路誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。構(gòu)建原核表達(dá)重組體能夠在較短時間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物，且所需的成本相對較低，因此被研究人員大量采用。但原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)產(chǎn)物的生物活性較低，而且衣原體基因轉(zhuǎn)化到大腸桿菌系統(tǒng)中表達(dá)的蛋白并不一定是具有天然構(gòu)象的目的蛋白，不能真正反映目的基因在衣原體致病過程中所參與的功能。

2.2.2哺乳動物細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng) 建立穩(wěn)定表達(dá)外源基因的真核細(xì)胞模型，是研究基因的功能、細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的蛋白定位的重要途徑。真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)是將目的基因經(jīng)PCR擴(kuò)增，利用合適載體轉(zhuǎn)染至真核細(xì)胞(一般是哺乳動物細(xì)胞)。衣原體編碼特異性酶CT149參與脂代謝，Peters[27]將ct149基因轉(zhuǎn)染至人宮頸癌上皮細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)的膽固醇酯類表達(dá)水平明顯下降，表明CT149具有膽固醇酯酶活性，并且很有可能對真核細(xì)胞膽固醇酯水解產(chǎn)生作用。Vromman[28]前期利用酵母雙雜交初步篩選到衣原體蛋白CT619的相互作用蛋白為宿主蛋白Tsg101。研究者將攜帶標(biāo)簽的Tsg101基因載體與ct619基因載體共轉(zhuǎn)染于真核HEK-293T細(xì)胞,免疫共沉淀實驗驗證兩者為互作蛋白。真核表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)外源新基因的細(xì)胞系,為進(jìn)一步研究該蛋白的結(jié)構(gòu)功能、闡明衣原體的致病機(jī)制、疫苗研制等提供有利的條件。但是利用細(xì)胞基因工程技術(shù)表達(dá)外源蛋白， 技術(shù)復(fù)雜，成本較高，難以滿足大規(guī)模的實際應(yīng)用。

2.2.3衣原體轉(zhuǎn)化系統(tǒng) 目前存在的衣原體轉(zhuǎn)化系統(tǒng)包括水平基因轉(zhuǎn)移(lateral gene transfer，LGT)、TargeTron、FRAEM及CRISPRi等。LGT[29]是由質(zhì)粒介導(dǎo)遺傳物質(zhì)在同源或異源物種之間傳遞。Wang[30]等將轉(zhuǎn)化外源基因的方法應(yīng)用到衣原體轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，即向L2型Ct穩(wěn)定轉(zhuǎn)化相應(yīng)的pL2質(zhì)粒載體。 Agaisse[31]等成功構(gòu)建GFP、mCherry、青色熒光蛋白基因的重組質(zhì)粒，實時觀察到衣原體目的蛋白在宿主細(xì)胞中的定位。質(zhì)粒編碼Pgp1-Pgp8八個質(zhì)粒蛋白及一個非編碼小RNA。由于臨床分離的自然無質(zhì)粒株非常少見，有質(zhì)粒菌株在體外實驗和動物模型中，顯出與無質(zhì)粒株明顯不同的毒力和感染后果，提示質(zhì)粒與衣原體的致病性密切相關(guān)[32]。研究者分別構(gòu)建pgp3缺失轉(zhuǎn)化株、pgp5缺失轉(zhuǎn)化株與鼠衣原體(Cm)質(zhì)粒完整株的小鼠生殖道感染模型，與質(zhì)粒完整株相比，pgp3、pgp5缺失轉(zhuǎn)化株其小鼠輸卵管水腫程度明顯下降，表明pgp3和pgp5是致上生殖道病變的致病因子[11, 33]，且pgp3也是Cm由生殖道傳播到胃腸道的作用因子[34]， Liu等利用構(gòu)建的pgp5缺失轉(zhuǎn)化株揭示Cmpgp5抑制某些質(zhì)粒依賴基因的表達(dá)[35]。Michael[24]和Song[36]利用穿梭載體構(gòu)建pgp4差異型菌株細(xì)胞感染模型，聯(lián)合蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果揭示pgp4正向調(diào)節(jié)pgp3及染色體基因表達(dá)，負(fù)向調(diào)節(jié)CPAF表達(dá)。

除了質(zhì)?？梢宰鳛檩d體攜帶外源基因外，TargeTron技術(shù)[30]將可移動II 型內(nèi)含子作為目標(biāo)基因的載體， Fisher[37]、Weber[7]等應(yīng)用TargeTron技術(shù)成功構(gòu)建多種inc基因缺失衣原體的細(xì)胞感染模型，出現(xiàn)了包涵體提前裂解和宿主細(xì)胞死亡現(xiàn)象，表明包涵體膜蛋白對衣原體生長發(fā)育的重要支持作用。而FRAEM技術(shù)[38]是利用DNA同源性，在保持基因組完整性情況下向衣原體基因組區(qū)域靶向插入基因使目標(biāo)基因沉默或者發(fā)生等位基因交換。該技術(shù)同樣應(yīng)用于靶向衣原體基因組插入GFP基因，光學(xué)顯微鏡下動態(tài)觀察目的基因的表達(dá)和定位。Mueller[38]等利用此方法使CtL2型菌株trpA基因缺失并由編碼GFP和β內(nèi)酰胺酶的基因表達(dá)，這也成為操縱衣原體的重要突破。Ouellette[39]描述了CRISPR干擾技術(shù)(CRISPRi)來誘導(dǎo)/抑制衣原體基因表達(dá)的方法。CRISPRi已經(jīng)被成功應(yīng)用在大腸桿菌及結(jié)核分枝桿菌上，Ouellette首次將此技術(shù)應(yīng)用在抑制衣原體包涵體膜蛋白基因incA的表達(dá)，實現(xiàn)了由CRISPRi引起的衣原體基因敲除?；蜣D(zhuǎn)移系統(tǒng)研究衣原體質(zhì)粒及染色體基因組所編碼產(chǎn)物的生物學(xué)功能， 為闡明致病機(jī)制提供了可行性方案。一系列研究成果表明基因轉(zhuǎn)化系統(tǒng)在推動衣原體致病機(jī)制研究進(jìn)展方面具有舉足輕重的地位。

2.3酵母雙雜交、免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation，Co-IP)、GST Pull down—尋找相互作用蛋白

2.3.1酵母雙雜交 核酸是生命體的遺傳物質(zhì)，而蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，核酸與蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間存在著交互作用，而這種交互作用決定生命體的代謝發(fā)育活動。蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)主要有酵母雙雜交、免疫共沉淀、GST Pull down等。衣原體分泌效應(yīng)蛋白干預(yù)宿主細(xì)胞代謝發(fā)育，而衣原體基因編碼的4～5個效應(yīng)蛋白共享未知功能區(qū)域DUF582。 Vromman[28]利用酵母雙雜交系統(tǒng)尋找衣原體DUF582蛋白的相互作用蛋白。研究者克隆DUF582基因，融合到酵母載體pGBKT7的GAL4 DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，克隆Hrs基因融合到pGADT7的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域，兩類載體轉(zhuǎn)化于酵母菌AH107，通過報告基因功能篩選到DUF582蛋白CT619的相互作用蛋白為宿主蛋白Tsg101，而且二者在細(xì)胞內(nèi)的ESCRT結(jié)構(gòu)結(jié)合，參與宿主細(xì)胞膜收縮過程。同樣，Lutter和Mital[40]等利用酵母雙雜交系統(tǒng)得出包涵體膜蛋白CT228、CT850分別與肌球蛋白磷酸酶亞基MYPT1、動力蛋白輕鏈DNYLT1具有相互作用關(guān)系，為包涵體在微管組織中的定位提供更深層次的認(rèn)識。

2.3.2GST pull-down GST pull-down是行之有效的驗證酵母雙雜交系統(tǒng)的體外試驗技術(shù)。衣原體Scc4蛋白(CT663)是T3S的伴侶蛋白且也是RNA聚合酶抑制劑。Hanson[41]等將Scc4，T3S伴侶蛋白Scc1和T3S亞基 CopN分別利用相應(yīng)載體轉(zhuǎn)化到酵母菌，pulldown實驗探究兩種蛋白之間關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Scc4的表達(dá)導(dǎo)致其它基因轉(zhuǎn)錄水平下降，說明Scc4可能是連接T3S的橋梁。同樣，Lorenzini[42]通過Pulldown 捕捉到沙眼衣原體蛋白CT670與三型分泌系統(tǒng)蛋白CT671的相互作用關(guān)系。Pull-down試驗其“誘餌蛋白”和“捕獲蛋白”均可通過細(xì)胞裂解物、純化的蛋白、表達(dá)系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。

2.3.3免疫共沉淀(Co-IP) 免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，可以確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的關(guān)系。Vromman[28]通過共沉淀方法對酵母雙雜交結(jié)果進(jìn)行驗證，確認(rèn)了DUF582蛋白CT619與宿主蛋白Tsg101存在相互作用關(guān)系。Zhao[43]同樣應(yīng)用免疫共沉淀法驗證肺炎衣原體包涵體膜蛋白Cpn0147與宿主蛋白CREB3具有相互作用關(guān)系，這也印證了衣原體包涵體膜蛋白與宿主細(xì)胞質(zhì)之間的某種聯(lián)系。免疫共沉淀得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實際情況，得到的結(jié)果可信度高。常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合，也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。

2.4構(gòu)建動物模型—衣原體的致病機(jī)制研究及其防治的重要平臺 動物模型已成為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中極其重要的實驗方法和手段，有助于更方便、更有效地認(rèn)識人類疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律和防治措施研究。衣原體毒力因子致病性均通過動物實驗來驗證，而選擇合適的動物模型也是致病機(jī)制研究的關(guān)鍵一步。靈長類動物在解剖、生理、免疫系統(tǒng)方面與人類相似并且能夠被沙眼衣原體人類血清型感染，是較理想的沙眼衣原體感染模型。但其價格較昂貴并且數(shù)量稀少，因此很難被應(yīng)用。小鼠體積較小，容易操作，價格低，并且針對小鼠的相關(guān)生化試劑較易獲得，這使得小鼠模型成為研究生殖道沙眼衣原體感染應(yīng)用最多的模型[44]。沙眼衣原體分離株均來自人類，小鼠本身的固有免疫機(jī)制可能導(dǎo)致對沙眼衣原體不易感而導(dǎo)致感染小鼠后很快被機(jī)體清除，無法在小鼠模型上對沙眼衣原體致病作用進(jìn)行后續(xù)的研究。也有可能是衣原體處于選擇壓力下的體外增殖，造成其毒力基因的丟失，無法通過動物實驗去驗證致病作用。Cm與Ct的具有高度同源性，通過Cm感染小鼠建立生殖道感染模型能夠替代研究Ct的致病機(jī)制。因此，實驗室常用Cm感染小鼠建立感染模型進(jìn)行沙眼衣原體致病機(jī)制的研究[45]。

動物實驗是衣原體研究的重要實驗基礎(chǔ)。LEi[32]即是通過建立質(zhì)粒差異型衣原體的小鼠感染模型，驗證了衣原體質(zhì)粒的致病性，為進(jìn)一步分析質(zhì)?；蛑虏⌒缘於ɑA(chǔ)。同時動物實驗還為衣原體疫苗校檢提供有效途徑，Connell[46]將質(zhì)粒缺失衣原體接種小鼠，在接種質(zhì)粒完整衣原體后檢測到小鼠血清有保護(hù)性抗體且未出現(xiàn)明顯的生殖道病變，以此判斷衣原體質(zhì)粒缺失株作為衣原體減毒活疫苗是否發(fā)揮保護(hù)性免疫作用。

3 生物學(xué)意義

近幾年，生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展使衣原體致病機(jī)制的研究有了突破性進(jìn)展。比較基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)成為篩選毒力因子的有效手段。蛋白相互作用技術(shù)是尋找互作蛋白的重要途徑，是衣原體致病機(jī)制研究歷史上重要的里程碑。衣原體轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的應(yīng)用將衣原體基因致病作用的神秘面紗逐漸揭開。當(dāng)然，分子生物學(xué)技術(shù)仍存在缺陷與不足。因此，在選擇表達(dá)系統(tǒng)時，應(yīng)充分考慮各種因素、各種蛋白表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點，權(quán)衡利弊，做出最佳判斷和選擇?；?蛋白表達(dá)系統(tǒng)的更新是人類對事物發(fā)現(xiàn)和創(chuàng)新能力的提高的必然結(jié)果，相信未來所有表達(dá)系統(tǒng)也會在功能上得到進(jìn)一步的改善。動物感染模型能貼切地表達(dá)衣原體感染生殖道的病理反應(yīng)，而選擇合適的動物模型也是衣原體致病機(jī)制研究方向上不可或缺的基石。未來，對相關(guān)分子生物學(xué)技術(shù)的探索將是加速衣原體致病機(jī)制研究進(jìn)程的必經(jīng)之路。