長白山核桃源五肽對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及機(jī)理

郭 勇，秦漢雄，魏 貞，方 麗，閔偉紅*

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，小麥和玉米深加工國家工程實(shí)驗(yàn)室，吉林 長春 130118 ）

長白山核桃（Juglans mandshuricaMaxim）屬于落葉闊葉喬木樹種，核桃仁中含有18 種氨基酸，其中8 種必需氨基酸含量豐富，其效價(jià)與動(dòng)物蛋白接近，是一種天然的優(yōu)質(zhì)蛋白[1-2]。食源性生物活性肽是蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶水解后所得的一系列不同分子質(zhì)量肽段，這些肽段所表現(xiàn)出來的生理活性存在差異[3]，其生理活性包括預(yù)防癌癥[4]、調(diào)節(jié)免疫[5]、降血壓[6]、減肥[7]、降膽固醇[8]和提高記憶力[9]等。

氧化應(yīng)激是由于體內(nèi)氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)作用失衡，使體內(nèi)產(chǎn)生過多高活性分子，如活性氧（reactive oxygen species，ROS）等，從而造成組織損傷[10]。研究認(rèn)為，氧化應(yīng)激廣泛參與衰老[11]、炎癥[12]、糖尿病[13]、神經(jīng)退行性疾病[14]和心腦血管[15]等多種病理生理過程。氧化應(yīng)激產(chǎn)生的自由基是幾種疾病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷墓餐卣髦?，氧化?yīng)激產(chǎn)生的自由基影響神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而導(dǎo)致廣泛的神經(jīng)退行性疾病，包括帕金森病和阿爾茨海默病等[16]。PC12細(xì)胞是從大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤克隆的細(xì)胞株，具備神經(jīng)細(xì)胞的特性，其可被神經(jīng)生長因子（nerve growth factor，NGF）誘導(dǎo)分化成神經(jīng)元形態(tài)，廣泛用于神經(jīng)退行性疾病的研究[17]。

本實(shí)驗(yàn)室前期的工作中，通過對(duì)核桃粕分離蛋白進(jìn)行堿性蛋白酶定向水解、超濾、Sephadex G-25、Sephadex G-15和反相高效液相色譜分離純化后，經(jīng)電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜儀鑒定出分子質(zhì)量為610.416 6 Da的核桃源五肽Leu-Pro-Leu-Leu-Arg（LPLLR），本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上，對(duì)核桃源五肽進(jìn)行過氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)理研究，為核桃抗氧化肽保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

LPLLR（分子質(zhì)量610.416 6 Da，純度99.75%）北京中科亞光生物科技有限公司。

噻唑藍(lán)（3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO） 美國Sigma公司；胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS） 美國Gibco公司；NO、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、過氧化氫酶（catalase，CAT）、ROS和丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒 南京建成生物工程研究所；乙酰膽堿（acetylcholine，ACh） 美國Research and Development公司；SOD2、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iducible nitricoxide synthase，iNOS）、核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）、肌動(dòng)蛋白（β-actin） 美國Cell Signaling Technoloy公司；牛（脫脂）乳粉 科邁生物化學(xué)有限公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

RSA224S型分析天平 北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；CB150型CO2培養(yǎng)箱 德國Binder公司；AE31倒置顯微鏡 麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司；SPECTRA-MAX190型酶標(biāo)儀 美國Molecular Devices公司；Z36HK高速冷凍離心機(jī) 德國Hermle公司；UV-1700紫外-可見分光光度計(jì) 日本島津公司；IX53熒光倒置顯微鏡日本Olympus公司；ImageQuant LAS500凝膠成像系統(tǒng)上海通用電氣醫(yī)療集團(tuán)；1703940型半干式電轉(zhuǎn)儀美國Bio-Rad公司。

1.3 方法

1.3.1 LPLLR對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響

1.3.1.1 PC12細(xì)胞培養(yǎng)及傳代

將PC12細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中，待其生長穩(wěn)定后，進(jìn)行繼續(xù)培養(yǎng)（細(xì)胞培養(yǎng)液含90 mL 1640培養(yǎng)液、10 mL胎牛血清、2 mL雙抗），細(xì)胞傳代，細(xì)胞凍存（細(xì)胞凍存液中1640培養(yǎng)液、胎牛血清、DMSO體積比為7∶2∶1）處理。選擇生長狀態(tài)良好4～9 代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3.1.2 MTT法檢測LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞的毒性

細(xì)胞的分組處理：PC12細(xì)胞調(diào)整濃度為4×105個(gè)/mL，每孔100 μL接種于96 孔培養(yǎng)板，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，設(shè)空白組（未經(jīng)任何處理）和樣品組（LPLLR終濃度為25、50、100、200 μmol/L），于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，加入MTT溶液（終質(zhì)量濃度為5 mg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，棄去培養(yǎng)液，加入150 μL DMSO，振蕩10 min至甲瓚結(jié)晶完全溶解，酶標(biāo)儀測OD490nm，其中空白組記為OD0，樣品組記為OD1。樣品組細(xì)胞存活率按下式計(jì)算。

1.3.1.3 PC12細(xì)胞過氧化氫誘導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷模型的建立

細(xì)胞培養(yǎng)同1.3.1.2節(jié)，設(shè)空白組（未經(jīng)任何處理）和模型組（過氧化氫終濃度為100、200、300、400、500 μmol/L）于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)1、2、3、4、5 h后，加入MTT溶液（終質(zhì)量濃度為5 mg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，棄去培養(yǎng)液，加入150 μL DMSO，振蕩10 min至甲瓚結(jié)晶完全溶解，用酶標(biāo)儀測OD490nm，其中空白組記為OD0，模型組記為OD1。模型組細(xì)胞存活率按1.3.1.2節(jié)公式計(jì)算。

1.3.1.4 LPLLR對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用

細(xì)胞培養(yǎng)同1.3.1.2節(jié)，設(shè)空白組（未經(jīng)任何處理）、模型組（僅過氧化氫處理）、樣品組（過氧化氫+LPLLR，其中低、中、高濃度組LPLLR濃度分別為25、50、100 μmol/L）。在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，加入各樣品100 μL孵育18 h后，加入終濃度300 μmol/L的過氧化氫繼續(xù)孵育2 h，加入MTT溶液（終質(zhì)量濃度為5 mg/mL）繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去培養(yǎng)液，加入150 μL DMSO，振蕩10 min至甲瓚結(jié)晶完全溶解，用酶標(biāo)儀測OD490nm，其中空白組記為OD0，實(shí)驗(yàn)組（模型組及樣品組）記為OD1。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率按1.3.1.2節(jié)公式計(jì)算。

1.3.1.5 LPLLR對(duì)氧化損傷PC12細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響

細(xì)胞培養(yǎng)及分組同1.3.1.2節(jié)，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，分別加入終濃度為25、50、100 μmol/L的樣品100 μL孵育18 h后，加入終濃度為300 μmol/L的過氧化氫繼續(xù)孵育2 h，棄去孔內(nèi)液體，按照試劑盒說明進(jìn)行操作，以相對(duì)熒光強(qiáng)度表示細(xì)胞內(nèi)ROS水平。

1.3.1.6 LPLLR對(duì)氧化損PC12細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT、GSH-Px活力及MDA、NO、ACh含量的影響

細(xì)胞的分組處理：PC12細(xì)胞調(diào)整密度為4×105個(gè)/mL，每孔800 μL接種于6 孔培養(yǎng)板，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，分別加入終濃度為25、50、100 μmol/L的樣品100 μL孵育18 h后，加入終濃度為300 μmol/L的過氧化氫繼續(xù)孵育2 h，棄去過氧化氫刺激的細(xì)胞培養(yǎng)液后，用滅菌的磷酸鹽緩沖液清洗2 次，加入100 μL細(xì)胞裂解液，待細(xì)胞完全裂解完畢后吸入1.5 mL的EP管中，4 ℃、2 000 r/min離心10 min，吸上清液待測。按試劑盒說明書測定SOD、CAT、GSH-Px活力及MDA、NO、ACh含量。

1.3.2 Western blotting法檢測定PC12細(xì)胞中SOD2、NF-κB和iNOS蛋白表達(dá)水平

細(xì)胞處理方法同1.3.1.6節(jié)，用BCA蛋白質(zhì)量濃度測定試劑盒測定蛋白質(zhì)量濃度。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離目的蛋白，采用半濕法使目的蛋白電轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%脫脂奶粉封閉1 h；TBST洗膜3 次，每次10 min。將PVDF膜放入含質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%脫脂奶粉的SOD2、NF-κB和iNOS的抗體稀釋液中（體積比1∶1 000稀釋），4 ℃過夜孵育；TBST洗膜3 次，每次10 min。二抗室溫孵育1 h；TBST洗膜3 次，每次10 min。用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑顯色后于凝膠成像儀中曝光拍照。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 LPLLR的質(zhì)譜分析結(jié)果

圖1 LPLLR的質(zhì)譜圖Fig. 1 Mass spectrum of LPLLR

圖1 為經(jīng)電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜儀鑒定出LPLLR的質(zhì)譜圖，其分子質(zhì)量為610.416 6 Da，并由北京中科亞光生物科技有限公司進(jìn)行化學(xué)合成（純度99.75%）。

2.2 MTT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖2 不同濃度的LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞存活率的影響Fig. 2 Effects of different concentrations of LPLLR on survival rates of PC12 cells

MTT法是一種廣泛應(yīng)用于檢測細(xì)胞增殖、生存能力和藥物毒性的方法，其檢測原理為活細(xì)胞中的氧化還原酶使MTT還原為不溶性物質(zhì)甲瓚沉淀于細(xì)胞內(nèi)，生成的甲瓚結(jié)晶溶于DMSO，在490 nm波長處有最大吸收峰[18]。由圖2可知，與空白組相比，LPLLR的濃度為25、50、100 μmol/L時(shí)，PC12細(xì)胞活力沒有顯著差異，說明在此濃度下對(duì)細(xì)胞無毒性作用，對(duì)PC12細(xì)胞生長繁殖無影響。但在LPLLR的濃度為200 μmol/L時(shí)，對(duì)PC12細(xì)胞活力有顯著的抑制作用（P＜0.05）。因此，選取樣品濃度為25、50、100 μmol/L進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.3 PC12細(xì)胞氧化損傷模型建立

如圖3所示，當(dāng)過氧化氫濃度小于200 μmol/L時(shí)，對(duì)PC12細(xì)胞損傷不明顯，細(xì)胞存活率在70%以上；當(dāng)濃度大于300 μmol/L時(shí)，過氧化氫對(duì)PC12細(xì)胞損傷明顯，隨著濃度增加和刺激時(shí)間延長，細(xì)胞存活率降低，當(dāng)刺激時(shí)間達(dá)到5 h后，細(xì)胞存活率降到10%以下。本實(shí)驗(yàn)主要研究LPLLR肽段在自然衰老模型中對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，因此選取300 μmol/L過氧化氫刺激2 h建立損傷模型。

圖3 不同過氧化氫濃度和作用時(shí)間對(duì)PC12細(xì)胞存活率的影響Fig. 3 Effects of different hydrogen peroxide concentrations and treatment time on survival rates of PC12 cells

2.4 LPLLR對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用

圖4 LPLLR對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型的保護(hù)作用Fig. 4 Protective effect of LPLLR on PC12 cells against H2O2-induced oxidative injury

MTT法檢測LPLLR對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激模型的保護(hù)作用，如圖4所示，與空白組相比，模型組的細(xì)胞存活率高度顯著降低（P＜0.001），說明模型構(gòu)建成功。經(jīng)LPLLR刺激后，各組細(xì)胞存活率隨著LPLLR濃度的增加而逐漸升高，呈濃度依賴關(guān)系，說明LPLLR對(duì)氧化應(yīng)激損傷的PC12細(xì)胞具有有效的保護(hù)作用。

2.5 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響

圖5 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響Fig. 5 Effect of LPLLR on ROS level in PC12 cells

如圖5所示，與空白組相比，模型組中ROS的相對(duì)熒光強(qiáng)度高度顯著升高（P＜0.001），說明模型構(gòu)建成功。與模型組相比，添加LPLLR的實(shí)驗(yàn)組中ROS的相對(duì)熒光強(qiáng)度均顯著降低（P＜0.001，P＜0.05），說明LPLLR能降低氧化損傷PC12細(xì)胞內(nèi)的ROS水平。

2.6 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)MDA含量的影響

圖6 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)MDA含量的影響Fig. 6 Effect of LPLLR on MDA content in PC12 cells

LPLLR保護(hù)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型中MDA含量的變化，如圖6所示。與空白組相比，模型組中MDA的含量高度顯著大于空白組（P＜0.001），說明模型構(gòu)建成功。與模型組相比，添加LPLLR的實(shí)驗(yàn)組中除低濃度組外，中濃度和高濃度組的MDA含量均顯著降低（P＜0.05）。

2.7 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT和GSH-Px活力的影響

表1 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT和GSH-Px活力的影響Table 1 Effect of LPLLR on SOD, CAT and GSH-Px activity in PC12 Cells

由表1可知，與空白組相比，模型組SOD、CAT和GSH-Px的活力均高度顯著下降（P＜0.001）；與模型組相比，添加LPLLR的實(shí)驗(yàn)組SOD、CAT和GSH-Px活力均顯著提高（P＜0.001，P＜0.05）。由此表明，LPLLR能夠增加PC12中SOD、CAT和GSH-Px的活力。

2.8 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)ACh含量的影響

如圖7所示，與空白組相比，模型組中ACh含量高度顯著降低（P＜0.001），說明模型構(gòu)建成功。與模型組相比，PC12細(xì)胞中ACh含量都隨LPLLR濃度的增加而增加，呈濃度依賴性，其中，中濃度和高濃度組與模型組存在顯著差異（P＜0.05）。

圖7 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞中ACh含量的影響Fig. 7 Effect of LPLLR on ACh content in PC12 cells

2.9 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)NO濃度的影響

圖8 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞中NO濃度的影響Fig. 8 Effect of LPLLR on the production of NO in PC12 cells

如圖8所示，與空白組相比，模型組的NO濃度高度顯著上升（P＜0.001）；與模型組相比，LPLLR實(shí)驗(yàn)組的NO濃度均高度顯著下降（P＜0.001）。

2.10 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞中SOD2、NF-κB p65和iNOS蛋白表達(dá)的影響

如圖9所示，與空白組相比，模型組中SOD2蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著降低（P＜0.05）。與模型組相比，LPLLR低、中、高濃度組中SOD2蛋白相對(duì)表達(dá)量均顯著升高（P＜0.001，P＜0.05）。與空白組相比，模型組中iNOS和細(xì)胞質(zhì)NF-κB p65蛋白相對(duì)表達(dá)量均高度顯著升高（P＜0.001）。與模型組相比，LPLLR各濃度組中iNOS和細(xì)胞質(zhì)NF-κB p65蛋白相對(duì)表達(dá)量均顯著下降（P＜0.001，P＜0.05）。

圖9 LPLLR對(duì)PC12細(xì)胞中SOD2（A）、NF-κB p65（B）和iNOS（C）蛋白表達(dá)的影響Fig. 9 Effect of LPLLR on protein expression of SOD2 (A),NF-κB p65 (B) and iNOS (C) in PC12 cells

3 討 論

氧化應(yīng)激是導(dǎo)致機(jī)體衰老的關(guān)鍵因素，會(huì)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成直接傷害，主要是由于中樞神經(jīng)細(xì)胞耗氧量大但抗氧化水平相對(duì)較低，神經(jīng)元處于氧化應(yīng)激高風(fēng)險(xiǎn)中[19-20]。通常情況下，ROS與機(jī)體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)協(xié)調(diào)維持穩(wěn)態(tài)，所以少量的ROS不會(huì)對(duì)機(jī)體造成損傷。但當(dāng)ROS大量積累時(shí)，抗氧化系統(tǒng)不能抵御ROS，機(jī)體內(nèi)發(fā)生氧化應(yīng)激，使脂質(zhì)過氧化進(jìn)而損傷神經(jīng)細(xì)胞。本研究中，LPLLR能明顯提高氧化損傷PC12細(xì)胞的存活率，降低細(xì)胞中ROS水平，呈濃度依賴關(guān)系。有文獻(xiàn)報(bào)道其他食源性生物活性多肽對(duì)氧化損傷的PC12細(xì)胞具有保護(hù)作用，如美國肉參膠原蛋白肽I1在100 μg/mL時(shí)可使氧化損傷PC12細(xì)胞的存活率提高68.8%[21]；脫脂麥胚蛋白肽在1 mg/mL時(shí)可使氧化損傷PC12細(xì)胞的存活率提高33%[22]；花生蛋白肽[23]和金華火腿肽[24]對(duì)氧化損傷的PC12細(xì)胞具有良好的保護(hù)作用。與這些食源性生物活性肽相比，LPLLR的保護(hù)作用更加明顯，其原因可能是LPLLR肽段中疏水性氨基酸所占比例為80%，并且末端含有堿性氨基酸R，所以同濃度下，LPLLR的效果更好。研究表明，序列中含有疏水性氨基酸的肽段抗氧化活性較高，而堿性氨基酸R可作為電子受體，奪取氧化所形成自由基的電子從而阻斷氧化反應(yīng)[25-26]。

機(jī)體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)主要包括酶抗氧化系統(tǒng)和非酶抗氧化系統(tǒng)，酶抗氧化系統(tǒng)主要包括SOD、CAT和GSH-Px；非酶抗氧化系統(tǒng)主要包括類胡蘿卜素、Zn和Se等。酶抗氧化系統(tǒng)往往與非酶抗氧化系統(tǒng)聯(lián)合發(fā)揮抗氧化作用，例如SOD常與非酶抗氧化因子Cu、Zn和Mn結(jié)合形成酶復(fù)合物Cu-SOD、Zn-SOD和Mn-SOD[27-29]。在機(jī)體中SOD存在3 種形式：SOD1存在于細(xì)胞質(zhì)中，SOD2存在于線粒體中，SOD3存在于細(xì)胞外。本研究，LPLLR能顯著提高PC12細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT和GSH-Px活力。ROS主要由線粒體產(chǎn)生，因此本實(shí)驗(yàn)采用Western blotting法分析SOD2在PC12細(xì)胞中蛋白表達(dá)情況，結(jié)果表明LPLLR能提高PC12細(xì)胞內(nèi)SOD2含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Jia Ji等[30]的研究結(jié)果相一致，能提高細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT和GSH-Px活力，以及提高細(xì)胞內(nèi)SOD2蛋白表達(dá)含量。

研究表明，ROS可以增強(qiáng)IκB激酶復(fù)合物NEMO的Cys54和Cys347二聚化，從而激活NF-κB[31]。NF-κB是以p50/p65異二聚體的形式存在于細(xì)胞漿中，其激活可以誘導(dǎo)許多因子如iNOS、環(huán)氧合酶2和Mn-SOD等轉(zhuǎn)錄。iNOS被激活后催化L-精氨酸末端胍基中的一個(gè)氮原子氧化而合成大量NO，NO可以與超氧陰離子反應(yīng)生成超氧亞硝酸陰離子，并進(jìn)一步分解為羥自由基和NO2等自由基，使神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生神經(jīng)毒性，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。此外，高濃度NO通過抑制多種與線粒體電荷傳遞和檸檬酸循環(huán)有關(guān)的酶，來抑制線粒體呼吸作用，使神經(jīng)細(xì)胞受到損傷。本研究采用Western blotting法分析PC12細(xì)胞中NF-κB p65和iNOS蛋白表達(dá)情況，以及用酶聯(lián)免疫吸附檢測法測定細(xì)胞中NO含量。結(jié)果表明，模型組中過氧化氫能上調(diào)NF-κB p65和iNOS蛋白表達(dá)，增加NO分泌量；實(shí)驗(yàn)組中LPLLR能下調(diào)NF-κB p65和iNOS蛋白表達(dá)，降低NO分泌量。說明LPLLR可能通過抑制NF-κB/iNOS/NO信號(hào)通路對(duì)過氧化氫誘導(dǎo)PC12細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)作用。

綜上所述，LPLLR對(duì)氧化應(yīng)激損傷的PC12細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用，主要是通過提高酶抗氧化系統(tǒng)中抗氧化酶的活力和抑制NF-κB/iNOS/NO信號(hào)通路發(fā)揮作用。