李春碧 伏攀

體外診斷設(shè)備，如儀器、試劑、血液真空采集管等，對實驗室檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，而多數(shù)實驗室在使用前沒有對上述設(shè)備（包括真空采血管）進(jìn)行驗證。國際標(biāo)準(zhǔn)真空采血管以強化玻璃和特種塑料為原材料，由于塑料的分子致密度明顯低于玻璃，所以真空和水分的保持程度是評估塑料采血管質(zhì)量的首要技術(shù)指標(biāo)［1］。目前實驗室所有血細(xì)胞分析儀采用的抗凝劑均為乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）鹽，包括EDTA-Na2、EDTA-K2、EDTA-K3。本研究主要探討EDTA-K3真空采血管對外周血血細(xì)胞檢測分析參數(shù)的影響，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集100例自愿者的新鮮全血標(biāo)本，其中男性58例，女性42例；年齡18～40歲。

1.2 儀器與試劑 深圳邁瑞科技股份有限公司生產(chǎn)的全自動血細(xì)胞分析儀BC6900；試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品均為邁瑞科技股份有限公司生產(chǎn)的配套試劑；真空采血管包括四川瑞奇科技股份有限公司生產(chǎn)的EDTA-K3真空采血管，美國BD公司生產(chǎn)的EDTA-K3真空采血管，江西供達(dá)科技股份有限公司生產(chǎn)的EDTA-K3真空采血管。

1.3 檢測方法 測試前儀器進(jìn)行常規(guī)保養(yǎng)后校準(zhǔn)，再進(jìn)行質(zhì)控測定，儀器在控后方可進(jìn)行下一步實驗。分別用3種品牌的EDTA-K3真空采血管采集受檢者靜脈血各3 mL，立即顛倒混勻10次，標(biāo)本采集后放置15 min，選擇全血自動模式進(jìn)行上機檢測。

1.4 檢測指標(biāo) 檢測參數(shù)包括紅細(xì)胞計數(shù)（red blood cell count，RBC）、血紅蛋白（hemoglobin，HGB）、血細(xì)胞壓積（hematocrit，HCT）、平均紅細(xì)胞體積（mean corpuscular volume，MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC）、紅細(xì)胞分布寬度（red blood cell distribution width，RDW）；白細(xì)胞計數(shù)（white blood cell count，WBC）、淋巴細(xì)胞（lymphocyte，LYM）、單核細(xì)胞（monocytes，MON）、中性粒細(xì)胞（neutrophil，NEU）、嗜酸粒細(xì)胞（eosinophilic，EOS）、嗜堿粒細(xì)胞（basocyte，BASO）；血小板計數(shù)（blood platelet，PLT）、平均血小板體積（mean platelet volume，MPV）、血小板分布寬度（platelet distribution width，PDW）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用配對t檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

美國BD公司、四川瑞奇公司兩種EDTA-K3真空采血管檢測的RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、RDW、WBC、LYM、MON、NEU、EOS、BASO、PLT、MPV、PDW等參數(shù)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）；美國BD公司、江西供達(dá)公司兩種EDTA-K3真空采血管檢測的RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、RDW、WBC、LYM、MON、NEU、EOS、BASO、PLT差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），但MPV、PDW差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；四川瑞奇公司、江西供達(dá)公司兩種EDTA-K3真空采血管檢測的RBC、HCT、HGB、MCV、MCH、MCHC、RDW、WBC、LYM、MON、NEU、EOS、BASO、PLT差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），但MPV、PDW差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同品牌EDTA-K3真空采血管血細(xì)胞參數(shù)檢測結(jié)果

3 討論

血細(xì)胞分析抗凝劑為EDTA鹽，其抗凝原理是EDTA鹽與血液中的Ca2+結(jié)合形成配位化合物，使Ca2+失去凝血作用，從而阻止血液凝固。因EDTA鹽對血細(xì)胞形態(tài)的影響很小，而EDTA的K鹽較EDTA的Na鹽溶解度大，與血液混合后溶解更快，特別適合用于全血細(xì)胞分析，因此國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會（International Council for Standardization in Haematology，ICSH）建議以EDTA的K鹽作為血細(xì)胞分析儀抗凝劑，現(xiàn)已被接受并在臨床廣泛使用。以真空定量采血技術(shù)代替?zhèn)鹘y(tǒng)意義的采血方法具有操作簡單方便、快速、采血量精確的優(yōu)點，已在臨床全面推廣應(yīng)用。而生產(chǎn)真空采集試管的塑料材質(zhì)、試管內(nèi)真空度，抗凝劑的標(biāo)準(zhǔn)在不同廠家要求不完全一致。由于塑料本身的固有屬性，部分真空或管內(nèi)加入的水分不可避免地會隨時間的延長而丟失［2］，引起真空試管內(nèi)EDTA-K3溶液濃縮，甚至出現(xiàn)固體結(jié)晶，影響標(biāo)本的采集，亦影響標(biāo)本檢測的準(zhǔn)確性。根據(jù)美國病理家學(xué)會（College of American Pathologists，CAP）要求，若使用不同廠商的真空采血管必須進(jìn)行新鮮全血對比，以確保真空采血管的質(zhì)量、結(jié)果具有可比性，才能應(yīng)用于臨床。

目前，國內(nèi)外關(guān)于各種實驗性能驗證的標(biāo)準(zhǔn)和指南主要指各檢測數(shù)據(jù)的精密度、準(zhǔn)確度、檢測底限、參考范圍、限行范圍等，單獨涉及真空采集管性能驗證的內(nèi)容較少，因此本研究采用幾種試管對比測試分析進(jìn)行驗證。

通過對比100例新鮮全血標(biāo)本全血細(xì)胞檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，美國BD公司與四川瑞奇公司EDTA-K3真空采血管檢測RBC、HCT、MCV、HGB、WBC、LYM、MON、NEU、EOS、BASO、PLT、MCHC、RDW、MPV、PDW無明顯差異，但PDW、MPV差異有統(tǒng)計學(xué)意義；而江西供達(dá)公司EDTA-K3真空采血管與美國BD公司、四川瑞奇公司相比，MPV、PDW差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明江西供達(dá)公司的EDTA-K3真空采血管可能存在一種引起MPV和PDW發(fā)生改變的未知變異源。MPV可用于鑒別PLT降低的原因，也可用于評估骨髓造血功能的恢復(fù)情況；PDW指血小板體積的異質(zhì)性，是心血管疾病的危險因素；MPV、PDW是血小板活化的標(biāo)志，并與循環(huán)系統(tǒng)血小板的超微結(jié)果、酶活性及功能狀態(tài)密切相關(guān)［3］。有研究顯示，急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）患者M(jìn)PV水平明顯高于穩(wěn)定性心絞痛患者和健康人群［4］，MPV和PDW水平可能是冠心病的危險因素，且MPV、PDW與ACS患者預(yù)后有相關(guān)性。Coban等［5］對高脂血癥患者的研究發(fā)現(xiàn)，高脂血癥患者的MPV明顯高于健康人群，當(dāng)患者使用舒伐他汀治療12周后，MPV明顯降低，提示他汀類藥物具有降低血小板活性的作用。2014年，黃瑩芝等［6］在研究MPV變化與2型糖尿病和糖尿病腎病的關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病組的MPV和PDW均高于對照組，且血小板活化因子和血小板源性生長因子均升高。急性腎損傷Ⅲ期MPV水平明顯高于Ⅰ期；PDWⅡ、Ⅲ期水平明顯高于Ⅰ期，且二者與急性腎損傷分期呈正相關(guān)，說明MPV和PDW可隨疾病嚴(yán)重程度增加而增加，即疾病越嚴(yán)重，血小板損傷越嚴(yán)重［7］。

對血常規(guī)檢測而言，不同的EDTA-K3真空采血管是一種未知的變異源，美國BD公司、四川瑞奇公司、江西供達(dá)公司生產(chǎn)的3種EDTA-K3真空采血管所用塑料材質(zhì)、EDTA-K3純度、試管內(nèi)真空度、試管密封程度均有差異。目前本實驗室主要使用江西供達(dá)科技股份有限公司生產(chǎn)的EDTA-K3真空采血管，在日常使用過程中發(fā)現(xiàn)，真空度不全一致，致使標(biāo)本量有時不足3 mL，有時超過3 mL，偶有標(biāo)本出現(xiàn)凝固現(xiàn)象。經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)，江西供達(dá)真空采血管MPV、PDW兩項指標(biāo)與美國BD、四川瑞奇采血管有差異。實驗室在選擇真空采血管時，除考慮成本外，質(zhì)量才是最重要的。目前，部分臨床醫(yī)師對MPV、PDW兩項指標(biāo)不夠重視，但隨著認(rèn)識的加深，上述兩項指標(biāo)將逐漸受到重視，使其更好地應(yīng)用于臨床。