藥用植物microRNA研究現(xiàn)狀與展望

嚴(yán)武平 吳友根 于靖 楊東梅 張軍鋒

（海南大學(xué)熱帶農(nóng)林學(xué)院，?？?571100）

microRNA（miRNA）是一類小的非編碼RNA，通常為20-24個核苷酸（Nucleotide，nt），通過序列互補(bǔ)在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因表達(dá)［1］。microRNA自身不具備開放閱讀框架（ORF），不編碼蛋白質(zhì)，具有高度保守性、組織特異性和階段特異性，通過切割靶mRNA和抑制mRNA翻譯，可在動植物中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。1993年，Victor Ambros和他的同事Rosalind Lee及Rhonda Feinbaum發(fā)現(xiàn)了一種控制秀麗隱桿線蟲幼蟲發(fā)育時間的基因Lin-4，該基因不編碼蛋白而是產(chǎn)生一對小RNAs。一個RNA的長度約為22 nt；另一個約為61 nt；較長的一個被預(yù)測會折疊成一個莖環(huán)，這個莖環(huán)被認(rèn)為是較短的RNA的前體［2］。Ambros和Ruvkun實驗室隨后發(fā)現(xiàn)這些lin-4 rna與lin-14基因3'UTR的多個位點具有反義互補(bǔ)。這種互補(bǔ)性出現(xiàn)在3'UTR區(qū)域，該區(qū)域先前被提議用lin-4基因產(chǎn)物介導(dǎo)lin14的抑制［2-3］。Ruvkun 實驗室繼續(xù)證明了這些互補(bǔ)位點對于lin-4調(diào)控lin-14的重要性，并表明這種調(diào)控在顯著降低lin-14蛋白數(shù)量的同時，不會顯著改變lin-14 mRNA的水平。2000年，Reinhart等［4］發(fā)現(xiàn)let-7調(diào)控lin-41并非常保守。Let-7的發(fā)現(xiàn)，以及當(dāng)時RNAi領(lǐng)域的興起，讓人們意識到這種調(diào)節(jié)性小RNA可能是一種廣泛存在的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制［4-5］。2001年10月，Thomas Tuschl、David P.Bartel和 Victor Ambros三人分別領(lǐng)導(dǎo)的3個研究組在Science雜志同期發(fā)文，將這種小RNA命名為microRNA（微小核糖核酸），簡稱miRNA。

剛開始miRNA的研究主要集中動物方面，直到2002年才首次在植物中出現(xiàn)報道［6］。植物miRNA幾乎調(diào)控所有的生物學(xué)和代謝過程，包括生長發(fā)育、細(xì)胞維持和分化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及對逆境脅迫的響應(yīng)。在藥用植物中，目前已從一些藥用植物中鑒定出miRNA，并分析了其在藥用植物中的調(diào)控作用，這對藥用植物的研究具有重要意義。本文首先對植物miRNA的生物形成途徑、作用方式以及植物miRNA及其靶基因的鑒定和驗證方法進(jìn)行了概述，其后概述了miRNA調(diào)控藥用植物生長發(fā)育與藥用植物次生代謝產(chǎn)物生物合成，miRNA參與藥用植物逆境脅迫等研究現(xiàn)狀，并對藥用植物與miRNA未來的研究方向進(jìn)行展望。

1 植物miRNA的生物形成途徑

植物miRNA主要是由位于基因間隔區(qū)的內(nèi)源性基因（MIR）編碼的，許多miRNA在不同植物物種中是保守的［7］。植物miRNA的生物形成途徑如下：首先在細(xì)胞核內(nèi)，大多數(shù)植物MIR基因被RNA聚合酶II（Pol II）轉(zhuǎn)錄成長度為幾百個核苷酸的初級產(chǎn)物pri-miRNA。轉(zhuǎn)錄后，pri-miRNA的5'末端加上甲基鳥苷帽子（m7GPPPN）結(jié)構(gòu)，3'末端加上多聚腺苷酸尾（或聚A尾），以穩(wěn)固pri-miRNA。隨 后，pri-miRNAs經(jīng) 由 DICER-LIKE1（DCL1），HYPONASTIC LEAVES1（HYL1）和SERRATE（SE）為核心組分組成的切割復(fù)合物處理，生成成熟的miRNA/miRNA*雙鏈體［8-9］。DCL1主要是以基到環(huán)方式分兩步處理pri-miRNA。首先切割的是距莖基部15-17 nt或在環(huán)形遠(yuǎn)端莖內(nèi)的隆起或非結(jié)構(gòu)區(qū)域。由此產(chǎn)生的pre-miRNA被DCL1進(jìn)一步切割生成一個長度為21 nt左右的 miRNA / miRNA *雙鏈［10-11］。miRNA / miRNA *雙鏈兩個3'末端的自由羥基被甲基轉(zhuǎn)移酶HUA ENHANCER1（HEN1）甲基化，以羥甲基的形式存在，甲基化的3'末端被保護(hù)不受降解［12-13］，穩(wěn)定后的雙鏈在HASTY（Exportin 5在植物中的同源基因）的作用下從細(xì)胞核運送到細(xì)胞質(zhì)［14-15］。miRNA / miRNA *雙鏈進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)后，被裝載到ARGONAUTE（AGO）蛋白中，在解旋酶的作用下解離成2條單鏈，成熟的單鏈miRNA與AGO蛋白結(jié)合（以及一些其他蛋白）形成活性RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RNA-induced silencing complex，RISC）［16］。另一條互補(bǔ)鏈（miRNA *）除具有的少數(shù)功能被保留外其余多數(shù)被降解。

2 植物miRNA的作用方式

植物miRNA通過轉(zhuǎn)錄切割和翻譯抑制兩大機(jī)制在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因。植物miRNA需要高的互補(bǔ)性來識別其底物［17］。2014年的一項研究表明，在擬南芥中，除了互補(bǔ)，miRNA結(jié)合位點的環(huán)境和表達(dá)水平也可能有助于目標(biāo)識別［18］。用大規(guī)模平行末端分析（Parallel analysis of RNA ends，PARE）對miRNA 介導(dǎo)的降解 mRNA 的剪切片段進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)植物miRNA目標(biāo)都經(jīng)歷了轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的切割［19］。切割由AGO蛋白的PIWI域完成，該結(jié)構(gòu)域形成RNase H樣折疊并顯示核酸內(nèi)切酶活性；這種活性已經(jīng)在主要miRNA效應(yīng)物擬南芥 AGO1以及AGO2、AGO4、AGO7和 AGO10中得到證實［20-21］。AGO1切割不需要3'端脫腺苷化或5'端脫帽，就能通過核外酶觸發(fā)靶mRNA的降解。切割時，5'和3'的切割片段隨后被核外酶降解。在擬南芥中，核糖核酸外切酶4（Exoribonuclease，XRN4）是一種5'-3'的核酸外切酶，負(fù)責(zé)降解3'片段［22］。

miRNA介導(dǎo)的翻譯抑制最初是為了解釋miRNAs對靶基因抑制的不成比例的影響，即在蛋白質(zhì)對mRNA水平上［23-24］。后來又對miRNA介導(dǎo)的翻譯抑制機(jī)制進(jìn)行了深入研究。2013年的一項研究表明，在植物中，AGO1-miRNA在與目標(biāo)RNA的5'非翻譯區(qū)（UTR）或開放閱讀框架結(jié)合后，能夠有效地抑制核糖體的合成或運動［25］。這表明miRNAs可以抑制植物中靶RNA的翻譯起始和延伸。有研究表明miRNA介導(dǎo)的翻譯抑制與加工體（P-body）之間存在一定的相關(guān)性［26］。目前，人們還未能就miRNA介導(dǎo)的mRNA翻譯阻遏機(jī)制達(dá)成共識。在植物中，翻譯抑制比轉(zhuǎn)錄切割更少被觀察到，這可能是由于普遍存在mirna引導(dǎo)的切割，同時由于缺乏高質(zhì)量抗體，很難確定蛋白質(zhì)水平。

除了mRNA的切割和翻譯抑制外，一些miRNA還會從其靶轉(zhuǎn)錄本中觸發(fā)階段性次級siRNA（phasiRNA）的產(chǎn)生，這在植物中是一種廣泛而保守的現(xiàn)象［16，27］。在擬南芥中有幾項研究將miRNA活性位點與多核糖體［28］、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜［29］和膜結(jié)合多核糖體［29-30］聯(lián)系起來。由于AGO1是miRNA的主要效應(yīng)器，AGO1的亞細(xì)胞定位是發(fā)現(xiàn)miRNA活性位點的重要線索。

3 植物miRNA及其靶基因的鑒定和驗證方法

在植物生長發(fā)育過程中miRNA 的表達(dá)具有組織特異性和時空特異性。因此，檢測和分析不同組織或樣品中miRNA及其靶基因的種類與表達(dá)特征，可為研究miRNA的生物學(xué)功能提供重要信息和依據(jù)。傳統(tǒng)的miRNA鑒定方法包括直接克隆、正向遺傳學(xué)和生物信息學(xué)預(yù)測。從生物樣品中分離和克隆小RNA是最直接的方法，目前已發(fā)現(xiàn)許多植物miRNA。然而，這種方法并不包括低豐度或在特定環(huán)境條件下或在特定組織中表達(dá)的miRNA。由于新一代深度測序技術(shù)和先進(jìn)生物信息學(xué)的發(fā)展，從最開始的直接克隆到生物信息學(xué)的介入，保守及新的miRNA的尋找與克隆問題得到了極大的改善［31］。在很多藥用植物中（白木香、地黃、卷丹、豆蔻、薄荷、三七、紅豆杉、罌粟、人參和半夏等）都實現(xiàn)了深度序列測定（表1）。

植物miRNA與靶mRNA具有高度的序列互補(bǔ)性，通過促進(jìn)靶mRNA的降解或翻譯抑制來負(fù)調(diào)控基因的表達(dá)實現(xiàn)調(diào)控功能，其自身不能直接調(diào)控植物的生長發(fā)育，所以闡明miRNA功能的關(guān)鍵步驟是識別miRNA靶基因。miRNA靶基因的鑒定是miRNA生物學(xué)功能研究的關(guān)鍵和難點，目前最常用的研究技術(shù)是計算機(jī)輔助預(yù)測和試驗驗證。植物miRNA作用的靶基因預(yù)測的常用生物信息學(xué)資源有BLAST［44］、psRNATarget［45］、miRdeepFinder、C-mii［46］、CleaveLand等。然而，經(jīng)由生物信息學(xué)預(yù)測的靶基因存在一定的假陽性，研究人員一般還會采用一些生物學(xué)實驗來驗證miRNA是否可以靶向切割或抑制靶基因的表達(dá)［47］。驗證靶基因常用的方法主要有5'RLM-RACE［48］、降解組測序［36，38］、qRT-PCR［32］和構(gòu)建煙草瞬時表達(dá)體系等。實驗驗證方法有多種多樣，很多研究人員都會選擇聯(lián)合使用其中2-3種方法進(jìn)行驗證。

表1 藥用植物miRNA的鑒定情況

4 miRNA調(diào)控藥用植物生長發(fā)育

迄今為止，miRNA已經(jīng)被證明可以調(diào)節(jié)植物和動物的多種生物和代謝過程。在植物中，miRNA控制著各種發(fā)育過程，包括葉片形態(tài)、花器官發(fā)生、腋生分生組織起始等［49］。隨著 miRNA 研究的不斷深入以及相關(guān)技術(shù)的不斷完善，研究者們已從多種藥用植物中鑒定出大量的保守的和新的miRNA，并研究了其在藥用植物的生長發(fā)育階段的作用。

植物 miRNA 大多是通過調(diào)控編碼參與發(fā)育調(diào)控與細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)而調(diào)控植物的生長發(fā)育過程。Singh等［46］研究表明薄荷科植物精油生物合成的基因調(diào)控系統(tǒng)可能受miR156、miR414和miR5021的調(diào)控，此外，3種miRNA候選物（miR156、miR5021和miR5015b）也被觀察到通過調(diào)控MYB、bHLH和WDR 等轉(zhuǎn)錄因子參與毛狀體發(fā)育。Wei等［40］對不同年齡段（一年、兩年和三年）的三七根中的miRNA進(jìn)行差異表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)miRNA可以靶向與三七根生長發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，同時還調(diào)控皂苷成分的合成。Ding 等［32］采用深度測序從沙棘種子中鑒定出來137個已知miRNA和264個新的miRNA，研究發(fā)現(xiàn)miRNA通過靶向轉(zhuǎn)錄因子ARF2和調(diào)節(jié)因子CNR、MED調(diào)控種子大小，同時miRNA通過靶向轉(zhuǎn)錄因子HLH等調(diào)控脂肪酸生物合成。He等［33］通過對卷丹進(jìn)行高通量測序鑒定出來17個miRNA家族的38個保守miRNA和44個新的miRNA，經(jīng)由軟件和實驗預(yù)測保守miRNA的靶基因以轉(zhuǎn)錄因子為主，新型miRNA的靶基因主要預(yù)測為蛋白編碼基因。Li等［44］對4年生人參的根、莖、葉和花的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行了全測序，推測人參miR172以轉(zhuǎn)錄因子APETALA2（AP2）為靶點，該轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控開花時間和花形態(tài)方面發(fā)揮重要作用；MYB轉(zhuǎn)錄因子可能是人參中miR5021的靶基因，在發(fā)育過程和防御反應(yīng)中發(fā)揮調(diào)控作用。Samad等［50］使用計算方法描述了非模型植物小型蓼中新的miRNA的鑒定和特征，推測Pmi-nov_6的靶基因是編碼F-box蛋白、組氨酸脫氫酶和WEB蛋白家族的三個mRNA，從而參與調(diào)控蛋白質(zhì)降解、組氨酸的生物和葉綠體運動，進(jìn)而調(diào)控植物發(fā)育。

絕大多數(shù)miRNA具有高度保守性和組織特異性，也即miRNA在各個物種間具有高度的進(jìn)化保守性且在同一物種不同組織中表達(dá)有不同類型的miRNA。Axtell等［51］發(fā)現(xiàn) miR168 在裸子植物、被子植物和蕨類植物中均可被檢測到，而其它 miRNA如 miR165 /166和miR170 /171等也能在多種植物中表達(dá)。Xu 等［35］采用芯片微陣列分析技術(shù)鑒定半夏中的 miRNA，分析其在半夏葉、莖、塊莖 3 個組織器官中的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，葉片中miRNA319的表達(dá)水平明顯低于莖和塊莖，對葉片形態(tài)發(fā)生可能有一定的促進(jìn)作用；在塊莖中，miRNA319的表達(dá)水平是莖和葉中表達(dá)水平的近10倍，而miRNA171的表達(dá)量明顯低于莖和葉，說明miRNA319和miRNA171在塊莖中也發(fā)揮著重要作用。Wang 等［52］也采用芯片微陣列分析技術(shù)從掌葉半夏中鑒定miRNA，研究結(jié)果表明所鑒定的miRNA都具有保守性，且經(jīng)qRTPCR實驗顯示，所鑒定的miRNA于掌葉半夏的不同組織中的表達(dá)量各有不同，根據(jù)有關(guān)研究推測miR166 調(diào)控的靶基因可能葉發(fā)育有關(guān)，miR156調(diào)控的靶基因與花的發(fā)育相關(guān)，以及miR319、miR167和miR164等調(diào)控的靶基因均與掌葉半夏的生長發(fā)育相關(guān)。

5 miRNA調(diào)控藥用植物次生代謝產(chǎn)物生物合成

次生代謝產(chǎn)物是由次生代謝產(chǎn)生的一類細(xì)胞生命活動或植物生長發(fā)育正常運行的非必需的小分子有機(jī)化合物，其產(chǎn)生和分布通常有種屬、器官、組織以及生長發(fā)育時期的特異性。次生代謝產(chǎn)物是植物在長期演化過程中與生物和非生物因素相互作用的結(jié)果，在植物生長發(fā)育和生理學(xué)過程中起著重要作用［53］。藥用植物發(fā)揮藥用療效主要是通過其有效成分，而這些有效成分主要是植物中的次生代謝產(chǎn)物，包括黃酮類、生物堿、糖苷和萜類等。藥用植物中有效成分往往具有重要的生理活性，含量卻又大多較為低下，嚴(yán)重限制了藥物的臨床使用，影響藥用植物的藥用價值。miRNA的生物學(xué)功能之一是調(diào)控植物次生代謝產(chǎn)物的生物合成。關(guān)于藥用植物中miRNA的鑒定有很多報道，但迄今為止，只有少數(shù)研究報道了通過miRNA調(diào)控藥用植物次生代謝產(chǎn)物的生物合成。

生物堿是一類通常存在于植物體中（也有少數(shù)存于動物體中）的含氮有機(jī)化合物，具有抗菌、抗炎、抗癌等功效。罌粟是一種重要的藥用植物，可合成芐基異喹啉生物堿（BIAs）作為次生代謝產(chǎn)物。Boke等［42］研 究 發(fā) 現(xiàn)，pso-miR13、pso-miR2161、psomiR408等miRNA參與了BIAs的生物合成，預(yù)測pso-miR13、pso-miR2161和psomiR408分別靶向編碼7-OMT，4-OMT和網(wǎng)狀氧化酶樣蛋白的基因，這些蛋白都參與生物堿的合成。煙草是研究生物堿生物合成的模式植物。尼古丁是一種煙草特有生物堿，是生物制藥、生物農(nóng)藥和生物化工的重要原料。Li等［54］首先研究了miRNA的潛在作用在尼古丁生物合成途徑的調(diào)控，預(yù)測miRX17、miRX27、miRX20和 miRX19分 別 靶 向 QPT1、QPT2、CYP82E4和PMT2基因，這些基因都參與尼古丁生物合成途徑。紫杉醇是一種從裸子植物紅豆杉的樹皮分離提純的天然次生代謝產(chǎn)物，是一種具有抗癌活性的二萜生物堿類化合物。Hao等［38］高通量測序和降解組分析鑒定紅豆杉miRNA及其靶基因發(fā)現(xiàn)，miR164和miR171分別通過靶向調(diào)控紫杉烷13α-羥基化酶基因和紫杉烷2α-O-苯甲酰轉(zhuǎn)移酶基因，調(diào)控紫杉醇生物合成。

萜類化合物是由甲戊二羥酸衍生、且分子骨架以異戊二烯單元為基本結(jié)構(gòu)單元的化合物及其衍生物，具有祛痰、驅(qū)蟲、鎮(zhèn)痛等功效。青蒿被廣泛用于治療瘧疾，青蒿中相對較低的青蒿素（有過氧基團(tuán)的倍半萜內(nèi)酯的一種無色晶狀體）含量是其大規(guī)模生產(chǎn)的限制因素。為更好地了解青蒿中miRNA對青蒿素合成的影響，Pérez-Quintero等［55］研究預(yù)測miR390將靶向參與毛狀體發(fā)育的基因，毛狀體是青蒿素合成的位點，可能成為旨在增加青蒿素含量的遺傳轉(zhuǎn)化候選基因。Fan等［37］通過對蒼耳腺毛狀體和幼葉的miRNA分析，揭示了miRNA在調(diào)節(jié)萜類生物合成中的作用，推測miR7539、miR5021和miR1134可能通過靶向上游萜類通路基因參與調(diào)節(jié)萜類生物合成。

6 miRNA與藥用植物逆境脅迫

植物在不同的逆境脅迫下誘導(dǎo)特異 miRNA的表達(dá)，并證實了某些 miRNA在植物遭受逆境脅迫時而做出適應(yīng)性調(diào)整的過程中起著重要的調(diào)控作用［56］。許多研究表明，miRNA參與多種非生物脅迫和生物 脅 迫。 例 如，miR398，OsmiR399、miR395等miRNA參與植物對營養(yǎng)脅迫的應(yīng)答過程［57］。我國藥用植物資源豐富，但隨著研究的不斷深入，其需求也在不斷增加。野生藥用植物產(chǎn)量普遍較低，易受外界環(huán)境的影響。因此，研究藥用植物中參與逆境脅迫相關(guān)的miRNA也具有重要的意義。到目前為止，研究者們已經(jīng)使用了不同的生物技術(shù)和鑒定方法來研究參與藥用植物逆境脅迫的miRNA，并取得了一些進(jìn)展。

Nadiya等［34］通過深度測序鑒定了可能參與豆蔻野生基因型防御應(yīng)答、脅迫和植物生長特性的miRNA，差異表達(dá)分析顯示，鑒定出的miRNA大部分在栽培品種中高表達(dá)，而miR169在野生豆蔻中的低表達(dá)和miR529的高表達(dá)證明了野生基因型比栽培品種具有更強(qiáng)的抗旱性和花發(fā)育能力。Wang等［52］對掌葉半夏中的miRNA研究發(fā)現(xiàn)，miR397在葉片組織中的表達(dá)水平幾乎是莖部的8倍，其作用的靶基因與氧化脅迫、干旱脅迫、冷脅迫、營養(yǎng)脅迫、銅脅迫等各種脅迫響應(yīng)有關(guān)。Wu 等［58］對5年生人參的葉、莖、花和根進(jìn)行高通量測序，鑒定出了33個miRNA家族的73個保守miRNA和9個miRNA家族的28個非保守miRNA，并對其中一些miRNA進(jìn)行了預(yù)測與實驗驗證，分析發(fā)現(xiàn)非保守miRNA中 miR6138、miR6135e、miR6135i、miR6140a、miR6143-3p與高溫脅迫有關(guān)，而miR6136b、miR6135k、miR6139、miR6140d、miR6140則 與 高溫脅迫和干旱脅迫都有關(guān)。此后另一研究小組［44］對4年生人參的根、莖、葉和花的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行了測序分析發(fā)現(xiàn)，在新確認(rèn)的14條miRNA中miR1128、miR5658、miR5021 靶向鋅指蛋白，參與氧化脅迫和其他非生物脅迫應(yīng)答。

7 總結(jié)與展望

中國是藥用植物資源最豐富的國家之一，對藥用植物的發(fā)現(xiàn)、使用和栽培有著悠久的歷史。然而隨著需求量的增加，野生藥用資源已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不足以提供所需，且野生資源易受環(huán)境的影響。miRNA是一種重要的調(diào)控因子，植物miRNA幾乎調(diào)控所有的生物學(xué)和代謝過程，包括生長發(fā)育、細(xì)胞維持和分化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及對逆境脅迫的響應(yīng)。近年來，植物miRNA的研究報告呈爆炸式增長，大批量的miRNA已從藥用植物中被鑒定出來。預(yù)測了大量miRNA靶基因，其中一些靶基因得到了實驗驗證。這些初步工作將為今后該領(lǐng)域的研究奠定基礎(chǔ)。目前大多數(shù)miRNA的功能尚不清楚，在miRNA的鑒定和功能的確認(rèn)之間存在很大的差距。對miRNA介導(dǎo)基因調(diào)控的研究可能會為改善藥用植物的性狀提供新的策略，如提高藥用植物產(chǎn)量、質(zhì)量或抵抗各種環(huán)境脅迫。隨著新的植物育種技術(shù)的發(fā)展，加上對整個基因組的結(jié)構(gòu)和功能的更深層次的研究，將促進(jìn)未來培育藥用植物新的重要性狀的技術(shù)進(jìn)一步發(fā)展。

藥用植物可產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物，用于植物醫(yī)學(xué)。然而這些次生代謝產(chǎn)物在藥用植物中產(chǎn)出量極低，且次生代謝物質(zhì)的產(chǎn)生是發(fā)育程度、組織分化及外界刺激因素通過影響生物合成基因表達(dá)而控制［59］。因此，研究人員尋找一種方法來增加藥用植物中次生代謝產(chǎn)物的含量成為當(dāng)務(wù)之急。到目前為止，已有少數(shù)研究報道了通過miRNA調(diào)控藥用植物次生代謝產(chǎn)物生物合成［60］。對于許多藥用植物來說，獲得足夠的次生代謝物產(chǎn)量通常是一項困難的任務(wù)。因此，我們需要一個有效的程序來操縱藥用植物，以改變次生代謝產(chǎn)物水平。從這個意義上說，已經(jīng)有文獻(xiàn)證實miRNA在藥用植物次生代謝物的產(chǎn)生中起關(guān)鍵作用［61］。盡管有許多關(guān)于鑒定可能的miRNA作為各種藥用植物次生代謝物生物合成途徑中涉及的調(diào)節(jié)因子的研究，我們?nèi)孕枰钊氲亓私馑鼈冊谥参锎紊x物生產(chǎn)中的調(diào)節(jié)作用。