劉婷婷 陳 婷 李鳳玲 黃 鑫

（南京市畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京 210012）

疫苗免疫接種是防控禽流感的主要措施和手段，現(xiàn)階段用于預(yù)防禽流感的疫苗主要是重組禽流感病毒（H5+H7）滅活疫苗，本研究主要是圍繞H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株二價(jià)滅活苗開展的。通過對比不同蛋雞場的免疫程序?qū)﹂_產(chǎn)蛋雞雞群免疫抗體水平的影響，為產(chǎn)蛋雞制定合理的免疫方案提供科學(xué)的依據(jù)。

1 研究材料與方法

1.1 試驗(yàn)雞群

選擇規(guī)模蛋雞場的開產(chǎn)蛋雞雞群為研究對象，對不同免疫程序的蛋雞場開展禽流感相關(guān)免疫抗體的監(jiān)測。

1.2 試驗(yàn)疫苗

疫苗種類為重組禽流感病毒二價(jià)（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）滅活疫苗，生產(chǎn)廠家為乾元浩生物股份有限公司鄭州生物藥廠和青島易邦生物工程有限公司。

1.3 試劑

禽流感病毒H5亞型Re-8株病毒血凝抑制試驗(yàn)抗原（批號2018005）、禽流感病毒H7亞型病毒血凝抑制試驗(yàn)抗原（批號2018006）、陰性血清和陽性血清，均購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.4 1%紅細(xì)胞懸液的配置

采集3只SPF公雞的血液與等體積的阿氏液混合，用pH7.2、0.01mol/L PBS液洗滌3次，每次均以1000r/min離心10min，洗滌后用PBS配成體積分?jǐn)?shù)為1%紅細(xì)胞懸液，4℃保存。

1.5 雞群篩選

采樣前對規(guī)模蛋雞場的免疫情況進(jìn)行摸底調(diào)查，了解開產(chǎn)前的禽流感疫苗免疫情況、開產(chǎn)后的免疫程序、疫苗種類、生產(chǎn)廠家、接種劑量、注射部位及日常抗體監(jiān)測報(bào)告等，選取其中禽流感疫苗免疫程序符合研究要求的12個(gè)規(guī)模蛋雞場。

1.6 血清樣本的采集

對符合研究條件的12家規(guī)模蛋雞場分別在它們的免疫間隔時(shí)間臨近期滿時(shí)，進(jìn)行開產(chǎn)蛋雞雞群的隨機(jī)采樣，每場采集20份，共240份血樣，備以進(jìn)行H5N1Re-8和H7N9免疫抗體水平的檢測。

1.7 檢測方法

血凝抑制試驗(yàn)使用一次性96孔V型微量反應(yīng)板，檢測方法按照國家標(biāo)準(zhǔn)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）進(jìn)行。檢測項(xiàng)目為H5N1Re-8抗體和H7N9抗體，檢測過程中分別設(shè)陽性對照、陰性對照，并對配置的4單位病毒進(jìn)行回歸試驗(yàn)。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)按照≥4log2為合格。

2 研究內(nèi)容和結(jié)果

2.1 不同免疫免疫間隔時(shí)間對禽流感免疫抗體水平的影響

選擇使用乾元浩（鄭州）疫苗但是免疫間隔時(shí)間各不相同的5家規(guī)模蛋雞場，分別在它們的免疫間隔時(shí)間臨近期滿時(shí)對它們的開產(chǎn)蛋雞雞群開展隨機(jī)抽樣，然后進(jìn)行H5N1Re-8和H7N9免疫抗體水平檢測，結(jié)果如表1；選擇使用青島易邦疫苗但是免疫間隔時(shí)間各不相同的5家規(guī)模蛋雞場，分別在它們的免疫間隔時(shí)間臨近期滿時(shí)對它們的開產(chǎn)蛋雞雞群開展隨機(jī)抽樣，然后進(jìn)行H5N1Re-8和H7N9免疫抗體水平檢測，結(jié)果如表2。

表1 乾元浩（鄭州）疫苗不同間隔時(shí)間免疫抗體水平的變化

表2 青島易邦疫苗不同間隔時(shí)間免疫抗體水平的變化

2.2 不同疫苗廠家對禽流感免疫抗體水平的影響

選擇使用乾元浩（鄭州）疫苗和青島易邦疫苗的規(guī)模蛋雞場各5家，對同一免疫間隔時(shí)間、相同免疫劑量（肌注0.5ml）的開產(chǎn)蛋雞雞群的H5N1Re-8和H7N9免疫抗體水平逐一進(jìn)行對比，比對結(jié)果見表3。

2.3 不同劑量對禽流感免疫抗體水平的影響

選擇使用乾元浩（鄭州）疫苗但是免疫劑量不同的3個(gè)規(guī)模蛋雞場的開產(chǎn)蛋雞雞群，在免疫間隔時(shí)間相同的前提下，對比它們的H5N1Re-8和H7N9免疫抗體水平，比對結(jié)果見表4。

表3 不同疫苗相同免疫間隔時(shí)間免疫抗體水平的對比

表4 同一種疫苗相同免疫間隔時(shí)間不同免疫劑量抗體水平的變化

3 結(jié)果分析

3.1 不同免疫間隔時(shí)間對禽流感免疫抗體水平的影響分析

由表1和表2可見，使用同一廠家的疫苗，不同的免疫間隔時(shí)間對H5N1Re-8和H7N9免疫抗體水平有較大的影響。免疫間隔達(dá)到4個(gè)月的時(shí)候，免疫抗體水平的范圍和均值都開始呈現(xiàn)明顯的下降趨勢，當(dāng)免疫間隔時(shí)間達(dá)到6個(gè)月的時(shí)候，H5N1Re-8和H7N9免疫抗體水平已降低到不能為雞群提供良好的免疫保護(hù)。由此可見，開產(chǎn)蛋雞的禽流感免疫間隔時(shí)間最好控制在3～4個(gè)月之間，即可以控制規(guī)模蛋雞場的免疫成本，又可以保障開產(chǎn)蛋雞雞群可以一直維持較高的免疫抗體水平。

3.2 不同疫苗廠家對禽流感免疫抗體水平的影響分析

采樣監(jiān)測的規(guī)模蛋雞場最常用的禽流感疫苗主要有乾元浩（鄭州）和青島易邦兩個(gè)疫苗生產(chǎn)廠家。由表3可見，通過對比免疫間隔時(shí)間為40d、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月和6個(gè)月的H5N1Re-8和H7N9免疫抗體水平，兩個(gè)不同生產(chǎn)廠家的禽流感疫苗對免疫抗體水平的影響并不顯著。

3.3 不同劑量對禽流感免疫抗體水平的影響分析

本研究還選取了3個(gè)使用乾元浩（鄭州）疫苗的規(guī)模蛋雞場，進(jìn)行了不同免疫劑量對H5N1Re-8和H7N9免疫抗體水平的影響的研究。由表4可見，在免疫間隔時(shí)間相同的情況下，說明書要求的0.5ml/羽的免疫劑量足以給雞群提供良好的免疫保護(hù)，增加免疫劑量并不能明顯提高免疫效果，甚至可能因?yàn)楫a(chǎn)生免疫抑制而導(dǎo)致免疫抗體水平有所下降。從實(shí)際生產(chǎn)考慮，0.5ml的免疫劑量即經(jīng)濟(jì)又可以保障免疫效果，不需要額外增加免疫劑量。