任士佳, 陳梅芳, 劉再群, 周際海

(安徽師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 安徽省重要生物資源與利用重點實驗室 生物環(huán)境與生態(tài)安全省級重點實驗室, 蕪湖 241000)

5-羥色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)，因其最先是從人的血清素中發(fā)現(xiàn)的，具有緊縮血管的功能，故又稱血清素(serotonin)。5-HT是一種吲哚衍生物，分子式為C10H12N2O。現(xiàn)已證實，5-HT作為一種“經(jīng)典”的神經(jīng)遞質(zhì)，普遍分布于脊椎動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，參與介導(dǎo)各類活動諸如學(xué)習(xí)、記憶、痛覺傳導(dǎo)、睡眠、攝食、行為等的調(diào)節(jié)。另有研究表明，5-HT在變色龍種群間的信息交流過程中也發(fā)揮作用[1]。目前，在各類爬行動物如暹羅鱷[2]、尼羅鱷[3]、日本水龜[4]、平原巨蜥[5]、毒蝰[6]的中樞神經(jīng)系統(tǒng)已有一些關(guān)于5-HT分布的報道。有學(xué)者認(rèn)為暹羅鱷小腦內(nèi)5-HT含量及濃度并不高，但幼體要高于成體[2]。在尼羅鱷小腦內(nèi)可見小腦深核的5-HT免疫陽性[3]。在日本水龜?shù)男∧X，5-HT能纖維可見于顆粒層，但未見于分子層，且小腦核周圍也可見一些5-HT能纖維[4]。在平原巨蜥小腦核旁側(cè)可見5-HT免疫陽性神經(jīng)細(xì)胞，分子層、顆粒層以及小腦核附近也可見5-HT免疫陽性神經(jīng)纖維[5]。在毒蝰小腦皮質(zhì)的顆粒層有大量的5-HT能纖維[6]。

多巴胺(dopamine, DA)也是一種“經(jīng)典”的神經(jīng)遞質(zhì)，分子式為C8H11O2N。在之前的很長一段時間，人們一直以為多巴胺在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中僅僅是作為NE的前體物質(zhì)發(fā)揮作用，直到1975年瑞典科學(xué)家Carlsson確定DA在腦內(nèi)還扮演了信息傳遞者的角色，人們才意識到DA在神經(jīng)信號傳導(dǎo)過程中也發(fā)揮著重要作用?，F(xiàn)已證明，DA在運動控制、聯(lián)系學(xué)習(xí)、覺醒、執(zhí)行能力等方面都發(fā)揮了重要的作用。人腦DA的缺乏與一些神經(jīng)精神疾病，如精神分裂癥、帕金森癥等精神疾病的病發(fā)有著非常密切的干系[7]。目前對于DA在爬行動物如紅耳龜[8]、彩龜[9]、球蟒[10]、大壁虎[11]的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的分布已有一些相關(guān)研究。尚未見DA在鱷類動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的相關(guān)報道。

揚子鱷(Alligatorsinensis)屬爬行綱鱷目短吻鱷科短吻鱷屬，是中國特有的一種珍稀淡水鱷，為國家一級保護(hù)動物，野生種群數(shù)量較少，主要分布于長江流域。它們體型較大、結(jié)構(gòu)較進(jìn)步，被譽為爬行動物中的“活化石”?，F(xiàn)在，對揚子鱷的研究主要集中在揚子鱷的消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和運動系統(tǒng)的組織學(xué)研究以及揚子鱷胚胎學(xué)、生態(tài)學(xué)、人工飼養(yǎng)和繁殖、保護(hù)和利用等方面[12],但關(guān)于揚子鱷中樞神經(jīng)系統(tǒng)的研究并不是很多。對于揚子鱷小腦的報道，僅見于劉再群等[13]對初孵揚子鱷小腦皮質(zhì)生長抑素的免疫組化研究。

本文運用Nissl染色方法研究了初孵揚子鱷小腦的組織學(xué)結(jié)構(gòu)，運用免疫組織化學(xué)方法研究了5-HT和DA在初孵揚子鱷小腦的表達(dá)和定位情況，以期為日后更深層的研究提供一些理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

初孵揚子鱷3只，長約15 cm，取自安徽省宣城市揚子鱷繁殖研究中心。乙醚麻醉后迅速從顱腔剝?nèi)≌X組織，腦重約0.24～0.36 g。上述行為均得到了中國林業(yè)部門和安徽師范大學(xué)動物倫理委員會的批準(zhǔn)。用Bouin′s液固定48 h后，常規(guī)脫水、透明，石蠟包埋，萊卡切片機連續(xù)切片(厚約7 μm)，于45 ℃清水展片并固定于含粘片劑的潔凈載玻片上，然后于37 ℃烘箱內(nèi)烘干。

1.2 Nissl染色方法

干燥后的切片每隔5張間距選取一張，將切片放入二甲苯中脫蠟后，100% (I)、100% (II)、95% (I)、95% (II)、80%和70%梯度酒精和蒸餾水復(fù)水，再將切片置于甲苯胺藍(lán)染液中染色10 min，隨后置于0.25%冰乙酸分色3 s，蒸餾水清洗多余液體，放入烘箱中烘干后于二甲苯中透明，最后用中性樹膠進(jìn)行封片。

1.3 免疫組織化學(xué)染色方法

SABC法：切片入二甲苯(I)和二甲苯(II)脫蠟，再分別入100% (I)、100% (II)、95% (I)、95% (II)、80%和70%酒精以及蒸餾水復(fù)水，30% H2O2和蒸餾水1∶ 9混合后滴加于組織上，室溫下放置5～10 min以滅活內(nèi)源性酶，然后用蒸餾水沖洗3次；將切片浸入枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)熱修復(fù)抗原；冷卻至室溫后再用PBS(pH 7.2～7.6)洗2 min×3次；滴加5% BSA封閉液，室溫下封閉20 min，甩去多余的液體(勿洗)；滴加一抗(5-HT, DA；1∶ 100稀釋)，4 ℃冰箱中過夜。次日，PBS連續(xù)沖洗3次，每次2 min；滴加生物素化二抗，37 ℃恒溫箱中放置30 min后取出，PBS連續(xù)洗2 min×3次；再滴加SABC，37 ℃恒溫箱中放置30 min，PBS洗5 min×4次。DAB(取1 mL蒸餾水，往其中各加一滴A、B、C混勻)顯色，室溫下放置5～30 min，顯微鏡下控制反應(yīng)時間，蒸餾水沖洗；蘇木素輕度復(fù)染，切片入梯度酒精脫水，再入二甲苯透明，最后用水溶性封片劑封片。抗兔5-HT多克隆抗體(BA-0121-1)、抗兔DA多克隆抗體(BA-1454)、鏈霉素親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(Streptavidin-Biotin-Peroxidase Complex，SABC)免疫組織化學(xué)試劑盒(SA 1029)，均購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.4 觀察

在Olympus BX61型顯微鏡和Motic BA600-4型全自動掃描顯微鏡下觀察、拍照。

2 結(jié)果

2.1 初孵揚子鱷小腦

初孵揚子鱷中樞神經(jīng)系統(tǒng)長約4.5 cm，從前往后逐次可分成端腦、間腦、中腦、小腦、延髓和脊髓，通常將中腦和延髓合稱為腦干(圖 1)。初孵揚子鱷小腦位于中腦之后，延腦的背前側(cè)(圖 1-A、C)，呈橢圓形，且橫徑大于縱徑,其與腦干共同圍成第四腦室(the fourth ventricle, V4)。

A和a: 背面觀; B和b: 腹面觀; C和c: 側(cè)面觀。 1: 嗅球; 2: 大腦; 3: 中腦; 4: 小腦; 5: 延髓; 6: 脊髓; 7: 漏斗

圖1初孵揚子鱷中樞神經(jīng)系統(tǒng)

Figure 1 The central nervous system of the new-hatching Yangtze alligator

橫切面上，可見小腦尾端嵌入腦干上端，圍成第四腦室背部(圖 2-A)。往頭端，小腦在第四腦室背部逐漸變寬(圖 2-B)，兩側(cè)與下面的腦干融合(圖 2-C)。再往頭端，小腦繼續(xù)變寬，且小腦中部嵌入第四腦室(圖 2-D)；背部的小腦與腹部的腦干圍成的第四腦室逐漸變大，第四腦室的正中溝和外側(cè)溝明顯可見(圖 2-E、F)，再繼續(xù)往頭端，小腦與腦干分離，第四腦室逐漸變小且僅被腦干封閉(圖 2-G、H、I)?？v切面上，可見小腦室(圖 2-J)，小腦與腦干形成V4并通過脈絡(luò)叢來封閉V4，封閉不完全(圖 2-J)。

小腦皮質(zhì)表面并不光滑，有皺褶，可見溝回分化(圖 3-A)。在小腦髓質(zhì)內(nèi)，埋藏了兩個小腦核團，分別是外側(cè)小腦核(the nucleus cerebelli lateralis, NCL)(圖 3-B)和內(nèi)側(cè)小腦核(the nucleus cerebelli medialis, NCM)(圖 3-C)。外側(cè)小腦核細(xì)胞分布稀疏且胞體較?。粌?nèi)側(cè)小腦核細(xì)胞分布較密集且胞體較大。還觀察到在小腦皮質(zhì)外有與其相聯(lián)系的血管叢(vascular plexus, VP)(圖3-D)。此外，髓質(zhì)內(nèi)還可見大量的血管(圖 3-E)。

A: 橫切面上小腦尾端嵌入腦干上端，圍成第四腦室(V4)背部; B: 橫切面上小腦在第四腦室背部逐漸變寬; C: 橫切面上小腦兩側(cè)與下面的腦干融合; D: 橫切面上小腦繼續(xù)變寬且小腦中部嵌入第四腦室; E、F: 背部的小腦與腹部的腦干圍成的第四腦室逐漸變大; G-I: 小腦與腦干分離，第四腦室逐漸變小且僅被腦干封閉; J: 縱切面上小腦與腦干形成V4并通過脈絡(luò)叢(CP)來封閉V4(插圖示脈絡(luò)叢)。標(biāo)尺: 500 μm; 插圖標(biāo)尺: 100 μm。VC: 小腦室

圖2初孵揚子鱷小腦(CBe)同腦干(BS)的相對位置

Figure 2 The relative position between the cerebellum (CBe) and brainstem (BS) of the new-hatching Yangtze alligator

2.2 5-HT在初孵揚子鱷小腦的分布

冠狀切面上，小腦皮質(zhì)可明顯分為4層，從外向內(nèi)為外顆粒層(external granular layer, EGL)、分子層(molecular layer, ML)、浦肯野細(xì)胞層(Purkinje cell layer, PCL)和顆粒層(granular layer, GL)(圖 4-A、B、C)。其中浦肯野細(xì)胞可見明顯多細(xì)胞層(圖 4-C)。髓質(zhì)可見小腦核(圖 4-D)。矢狀切面上，可見第四腦室由頂部的小腦和下部的腦干圍成，第四腦室后部由脈絡(luò)叢(choroid plexus, CP)不緊密封閉(圖 5-A)，構(gòu)成第四腦室頂部的小腦皮質(zhì)部位可見明顯的外顆粒層(圖 5-B)，小腦髓質(zhì)內(nèi)部可見小腦室(ventriculus cerebelli, VC)(圖 5-D)。

矢狀切面上A: 小腦皮質(zhì)表面并不光滑(標(biāo)尺: 200 μm); B: 外側(cè)小腦核(標(biāo)尺: 20 μm); C: 內(nèi)側(cè)小腦核(標(biāo)尺: 20 μm); D: 小腦皮質(zhì)外血管叢(VP，標(biāo)尺: 50 μm); E: 小腦髓質(zhì)內(nèi)的血管(箭頭示，標(biāo)尺：50 μm)。GL: 顆粒層; ML: 分子層; PCL: 浦肯野細(xì)胞層

圖3初孵揚子鱷小腦結(jié)構(gòu)

Figure 3 The cerebellar structure of the new-hatching Yangtze alligator

A: 小腦皮質(zhì)分層(標(biāo)尺: 100 μm); B: 外顆粒層 (EGL，標(biāo)尺: 30 μm); C: 浦肯野細(xì)胞(PCL，標(biāo)尺: 20 μm); D: 顆粒層(GL，標(biāo)尺: 20 μm); E: 顆粒層與髓質(zhì)(MD)的邊界(標(biāo)尺: 20 μm); F: 髓質(zhì)核團(CN，標(biāo)尺: 50 μm)。ML: 分子層

圖4冠狀切面上5-HT在初孵揚子鱷小腦的分布

Figure 4 The distribution of the 5-HT in the cerebellum of the new-hatching Yangtze alligator in transversesections

A: 初孵揚子鱷小腦縱切(標(biāo)尺: 300 μm); B: 外顆粒層(EGL，標(biāo)尺: 20 μm); C: 浦肯野細(xì)胞(PCL，標(biāo)尺: 20 μm); E: 小腦室(VC，標(biāo)尺: 30 μm); E: 脈絡(luò)叢(CP，標(biāo)尺: 80 μm)。ML: 分子層; GL: 顆粒層

圖5矢狀切面上5-HT在初孵揚子鱷小腦(CBe)的分布

Figure 5 The distribution of the 5-HT in the cerebellum (CBe) of the new-hatching Yangtze alligator in sagittal sections

冠狀切面上，外顆粒層細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)為5-HT陽性(圖 4-B)；浦肯野細(xì)胞顯示細(xì)胞質(zhì)5-HT陽性，細(xì)胞核5-HT陰性(圖 4-C)；分子層和顆粒層均顯示5-HT神經(jīng)纖維陽性且陽性較強(圖 4-B、C、D)。髓質(zhì)內(nèi)側(cè)核團細(xì)胞體5-HT陽性(圖 4-F)。矢狀切面上，可見外顆粒層細(xì)胞5-HT陽性明顯(圖 5-B)；分子層和顆粒層神經(jīng)纖維5-HT陽性(圖 5-C)；小腦室的室管膜細(xì)胞呈5-HT陰性(圖 5-D)；脈絡(luò)叢細(xì)胞呈5-HT淺陽性(圖 5-E)。

2.3 DA在初孵揚子鱷小腦的分布

冠狀切面上，小腦皮質(zhì)可明顯分為4層，從外向內(nèi)為外顆粒層(external granular layer, EGL)、分子層(molecular layer, ML)、浦肯野細(xì)胞層(Purkinje cell layer, PCL)和顆粒層(granular layer, GL)，見圖 6-A、B、C。其中浦肯野細(xì)胞可見明顯多細(xì)胞層(圖 6-C)。小腦髓質(zhì)和皮質(zhì)較易區(qū)分(圖 6-E)，髓質(zhì)可見小腦核(圖 6-F)。矢狀切面上，可見第四腦室由頂部的小腦和下部的腦干圍成，第四腦室后部由脈絡(luò)叢(choroid plexus, CP)不緊密封閉(圖 7-A)，構(gòu)成第四腦室頂部的小腦皮質(zhì)部位可見明顯的外顆粒層(圖 7-B)，小腦髓質(zhì)內(nèi)部可見小腦室(ventriculus cerebelli, VC)，見圖 7-D。

A: 小腦皮質(zhì)分層(標(biāo)尺: 100 μm); B: 外顆粒層(EGL，標(biāo)尺: 30 μm); C: 浦肯野細(xì)胞層(PCL，標(biāo)尺: 20 μm); D: 小腦皮質(zhì)與髓質(zhì)(MD)的邊界(標(biāo)尺: 50 μm); E: 髓質(zhì)核團(CN，標(biāo)尺: 30 μm); J: 第四腦室(V4)腦脊液物質(zhì)(標(biāo)尺: 20 μm)。ML: 分子層; GL: 顆粒層

圖6冠狀切面上DA在初孵揚子鱷小腦的分布

Figure 6 The distribution of the DA in the cerebellum of the new-hatching Yangtze alligator in transversesections

A: 初孵揚子鱷小腦縱切(標(biāo)尺: 300 μm); B: 外顆粒層(EGL，標(biāo)尺: 20 μm); C: 浦肯野細(xì)胞(PCL，標(biāo)尺: 20 μm); D: 小腦室(VC，標(biāo)尺: 30 μm); E: 脈絡(luò)叢(CP，標(biāo)尺: 80 μm)。ML: 分子層; GL: 顆粒層

圖7矢狀切面上DA在初孵揚子鱷小腦(CBe)的分布

Figure 7 The distribution of the DA in the cerebellum (CBe) of the new-hatching Yangtze alligator in sagittal sections

冠狀切面上，外顆粒層細(xì)胞有微弱的陽性(圖 6-B)；浦肯野細(xì)胞顯示細(xì)胞質(zhì)DA陽性，細(xì)胞核DA陰性(圖 6-C)；分子層和顆粒層均顯示DA神經(jīng)纖維陽性(圖 6-B、C、D)。髓質(zhì)內(nèi)有較多DA免疫陽性纖維分布密集(圖 6-D)，髓質(zhì)內(nèi)側(cè)核團細(xì)胞質(zhì)DA陽性，細(xì)胞核陰性(圖 6-E)。第四腦腦室腦脊液物質(zhì)也顯示DA免疫陽性(圖 6-F)。矢狀切面上，可見外顆粒層纖維DA陽性明顯(圖 7-B)；分子層和顆粒層神經(jīng)纖維DA陽性(圖 7-C)；小腦室的室管膜細(xì)胞呈DA陰性(圖 7-D)；脈絡(luò)叢細(xì)胞呈DA強陽性(圖 7-E)。

3 討論

由于爬行動物運動的復(fù)雜性，其小腦較兩棲動物更為發(fā)達(dá)，水生爬行動物的小腦就更加發(fā)達(dá)了；鱷的小腦已有分化成中央蚓部和兩側(cè)小腦鬈的趨向[14]。小腦在保持身體平衡、調(diào)節(jié)肌張力和協(xié)調(diào)肌群運動等方面都有著重要意義。劉再群等[13]曾對初孵揚子鱷小腦的生長抑素的分布進(jìn)行了研究，而本文首次系統(tǒng)闡述了初孵揚子鱷小腦的組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征以及5-羥色胺和多巴胺在初孵揚子鱷小腦的分布情況。

3.1 小腦皮質(zhì)分層

在爬行綱動物中，Larsell[15]曾研究了鱷目部分動物的小腦，他認(rèn)為鱷類的小腦皮質(zhì)可劃分成典型的3層，即分子層、浦肯野細(xì)胞層和顆粒層。報道表明其他一些爬行動物如紅耳龜[16]、中國石龍子[17]、尼羅鱷[18]的小腦皮質(zhì)同樣可分為3層。成年揚子鱷的小腦皮質(zhì)同樣可分3層，并不存在外顆粒層[12]。但是，本研究結(jié)果顯示初孵揚子鱷小腦皮質(zhì)可分為4層，從外向內(nèi)依次是外顆粒層、分子層、浦肯野細(xì)胞層和顆粒層。對小鼠小腦皮質(zhì)的發(fā)生的研究表明，在小腦的組織生成過程中，來自原始神經(jīng)上皮的一些神經(jīng)前體細(xì)胞(也稱成神經(jīng)細(xì)胞)會遷移到小腦的表面形成外顆粒層，在這層內(nèi)側(cè)的那些已經(jīng)停止增殖的成神經(jīng)細(xì)胞則發(fā)展成小腦皮質(zhì)顆粒細(xì)胞的前身，它們隨后遷移回到正在發(fā)生的白質(zhì)中發(fā)展成內(nèi)顆粒層[19]。我們推測，初孵時期的揚子鱷的小腦皮質(zhì)確可分為4層，但伴隨著小腦發(fā)育成熟，小腦皮質(zhì)的外顆粒層會逐漸消退。本實驗觀測到的正是初孵揚子鱷小腦外顆粒層殘余，它們會隨著小腦的發(fā)育成熟而逐漸退化直至消失。

3.2 浦肯野細(xì)胞層

浦肯野細(xì)胞的胞體呈梨形，所以也可稱之為梨狀神經(jīng)細(xì)胞。浦肯野細(xì)胞層便是由排列整齊的浦肯野細(xì)胞的胞體構(gòu)成。對老鼠小腦內(nèi)浦肯野細(xì)胞的研究表明，浦肯野細(xì)胞可通過控制特定運動的區(qū)域的時相來協(xié)調(diào)多關(guān)節(jié)運動，且與四肢、軀干的協(xié)調(diào)有關(guān)[20]。長久以來，人們一直認(rèn)為在爬行動物的小腦皮質(zhì)中浦肯野細(xì)胞層是由單層胞體組成的[15, 17-18]。然而，我們在此注意到初孵揚子鱷小腦皮質(zhì)的浦肯野細(xì)胞層其實是由多層浦肯野細(xì)胞胞體排列組成的。宋海燕等[21]曾在未發(fā)育成熟的皖西白鵝的小腦皮質(zhì)觀察到部分浦肯野的多層排列且伴隨著小腦皮質(zhì)的發(fā)育成熟多層浦肯野細(xì)胞最終逐漸退化成單層。有學(xué)者認(rèn)為只有那些能夠與其他神經(jīng)細(xì)胞建立正常突觸聯(lián)系的浦肯野細(xì)胞才能夠存活下來，而不能成功建立突觸聯(lián)系的細(xì)胞則會凋亡[22]。所以我們推測，在初孵揚子鱷小腦內(nèi)，可能存在某種化學(xué)物質(zhì)，它調(diào)控著浦肯野細(xì)胞的發(fā)育及突觸聯(lián)系的建立并最終使其成為均一的單細(xì)胞層，而那些沒能夠與其他神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)建突觸聯(lián)系的浦肯野細(xì)胞便會出現(xiàn)凋亡，不能存活下來。

3.3 小腦室

陳壁輝等[12]認(rèn)為成年揚子鱷小腦無空腔腦室，但是，本研究中，我們發(fā)現(xiàn)初孵揚子鱷小腦可見腦室，且小腦室與第四腦室相通。我們推測，揚子鱷的小腦室可能隨著小腦的發(fā)育增大而逐漸與第四腦室融合，不易區(qū)分。

3.4 5-羥色胺在小腦的分布

目前，關(guān)于5-HT免疫陽性神經(jīng)細(xì)胞及纖維在爬行動物小腦的分布，僅有少量報道。有研究表明，幼年暹羅鱷(1個月)小腦內(nèi)5-HT含量及濃度比成年鱷5-HT含量及濃度要高；此外，暹羅鱷小腦內(nèi)的5-HT含量及濃度雖不高，但總體上要高于北美游蛇，可是其中樞神經(jīng)系統(tǒng)其他區(qū)域5-HT含量及濃度低于其他爬行動物[2]。本研究中，我們觀察到初孵揚子鱷小腦的5-HT免疫陽性較強。鑒于小腦是運動也是平衡中樞，而5-HT涉及行為等各種活動的調(diào)控，這提示初孵揚子鱷小腦內(nèi)5-HT可能參與揚子鱷運動的調(diào)節(jié)。在平原巨蜥[5]的小腦內(nèi)，其小腦核側(cè)邊可觀察到5-HT免疫陽性神經(jīng)細(xì)胞，且橫切面上小腦皮質(zhì)可見分子層的免疫陽性纖維，小腦核周邊同樣可見免疫陽性纖維。我們注意到，在初孵揚子鱷小腦髓質(zhì)的小腦核附近可見5-HT免疫陽性神經(jīng)細(xì)胞及纖維。Challet等[6]發(fā)現(xiàn)蝰蛇小腦皮質(zhì)的顆粒層內(nèi)存在大量的5-HT能纖維。本研究中同樣觀察到初孵揚子鱷小腦的顆粒層內(nèi)可見5-HT免疫陽性纖維。這些均提示在爬行綱的不同動物之間，5-HT在小腦的分布有一定的類似之處。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)盡管錦龜小腦皮質(zhì)浦肯野細(xì)胞層表現(xiàn)出對外源5-HT較強的反應(yīng)且小腦皮質(zhì)中可見5-HT能免疫陽性纖維，但是，其小腦內(nèi)5-HT總體含量并不高[23]。我們發(fā)現(xiàn)，初孵揚子鱷小腦的5-HT免疫陽性較強，且不止見于浦肯野層。對彩龜腦干和脊髓5-HT分布的研究表明，小腦核會受到5-HT能神經(jīng)纖維支配，且小腦皮質(zhì)顆粒層可見些許背腹側(cè)行5-HT免疫陽性神經(jīng)纖維，但是小腦皮質(zhì)分子層未見5-HT免疫陽性纖維[24]。在初孵揚子鱷的小腦內(nèi)，觀察到小腦皮質(zhì)分子層和顆粒層均可見5-HT免疫陽性纖維，這表明在不同爬行動物的小腦，5-HT的分布也是存在一定差異的。

3.5 多巴胺在小腦的分布

目前未見DA在爬行動物小腦分布的相關(guān)報道。但是，在其他脊椎動物中已有一些小腦的DA免疫陽性神經(jīng)細(xì)胞及纖維的分布的報道。歐洲鰻魚的小腦內(nèi)僅包含稀疏的DA免疫陽性神經(jīng)分布，小腦幾乎不接受DA能神經(jīng)纖維的支配，DA能纖維稀疏的分布于小腦體側(cè)邊隆起的顆粒層內(nèi)的顆粒細(xì)胞，在小腦聯(lián)合處也可見一些DA能纖維，這些纖維會形成一纖維束到達(dá)第四腦室上方的浦肯野細(xì)胞[25]。但是在本研究中，我們觀察到浦肯野細(xì)胞及髓質(zhì)內(nèi)側(cè)核團細(xì)胞均呈DA免疫陽性，分子層和顆粒層可見大量DA神經(jīng)纖維陽性且髓質(zhì)內(nèi)也有較多DA免疫陽性纖維分布細(xì)胞質(zhì)DA陽性，第四腦腦室腦脊液物質(zhì)也顯示DA免疫陽性。考慮到小腦有維持平衡、協(xié)調(diào)運動的作用，揚子鱷是一種冬眠動物，推測DA在揚子鱷打洞等活動中發(fā)揮著重要的作用。對湖蛙和蠑螈小腦的DA的免疫組化分布的研究表明湖蛙和蠑螈小腦的腹側(cè)顆粒層區(qū)域可見少量的DA免疫陽性纖維[26]。本研究中，我們不僅在初孵揚子鱷的小腦皮質(zhì)的顆粒層觀察到DA免疫陽性纖維，還在小腦其他各部分均觀察到DA免疫陽性。DA在運動控制、執(zhí)行能力等方面都發(fā)揮了重要的作用，推測揚子鱷小腦DA的廣泛分布可能與其運動的復(fù)雜性有著密切的關(guān)系。在鳥綱動物中，灰斑鳩的小腦腳腹側(cè)可見DA免疫陽性纖維[27]。本研究中我們同樣觀察到在初孵揚子鱷的小腦內(nèi)有豐富的DA免疫陽性分布。這提示DA在不同動物小腦的分布有一定的連續(xù)性。在哺乳綱動物中，對大鼠小腦內(nèi)DA能神經(jīng)分布的研究結(jié)果顯示整個大鼠小腦均可見DA能神經(jīng)纖維分布，其中在小腦皮質(zhì)的分子層分布最多，但是，未見免疫陽性神經(jīng)細(xì)胞；免疫陽性神經(jīng)纖維較細(xì)[28]。在此，我們在初孵揚子鱷的整個小腦均觀察到DA免疫陽性纖維且在顆粒層和髓質(zhì)區(qū)域分布較為密集，同時，還觀察到浦肯野細(xì)胞也會表達(dá)DA免疫陽性。此外，還觀察到第四腦室腦脊液物質(zhì)和脈絡(luò)叢細(xì)胞也呈DA免疫陽性，推測DA在揚子鱷幼體能產(chǎn)生一定的生理功能。