蘋果白絹病防治藥劑的篩選及使用方法

高常燕 李棟 李保華 張俊麗 董向麗

摘要 白絹病是蘋果苗期和幼樹期的重要病害，可導(dǎo)致死樹和死苗。為了篩選有效的殺菌劑，提供有效的病害防控技術(shù)，通過花盆土壤施藥、撒施藥土等方法測試了9種殺菌劑和生石灰對白絹病菌的抑制效果。結(jié)果表明，95%甲基立枯磷 TC和99%噁霉靈TC兩種藥劑能有效抑制白絹病菌的生長和菌核的形成，抑制率在80%以上;25 g/L咯菌腈FSC和45%抑菌脲SC對白絹病菌的生長和菌核形成也有抑制效果，但其抑制率不足50%。9種殺菌劑都不能殺死菌核中的病菌。生石灰能有效抑制白絹病菌生長擴(kuò)展，其抑菌范圍超過5 cm，但不能抑制病菌形成菌核。將生石灰撒于根圍或土表，或混入育苗基質(zhì)、鋸末或土壤中，可預(yù)防蘋果苗期和幼樹期的白絹病。甲基立枯磷和噁霉靈可用于苗木消毒、澆施、地面噴霧或隨滴灌使用。

關(guān)鍵詞 蘋果白絹病; 藥劑篩選; 防治方法

中圖分類號： S 436.611.1+9

文獻(xiàn)標(biāo)識碼： B

DOI： 10.16688/j.zwbh.2018114

蘋果白絹?。╯outhern blight of apple tree）是蘋果樹的重要病害，苗木和幼樹受害嚴(yán)重[1]。受害樹體葉片變黃，新生葉片小，葉緣卷曲，節(jié)間縮短，最終枝干失水皺縮，繼而整株死亡[23]。病部菌絲層產(chǎn)生褐色油菜籽狀菌核[4]。白絹病菌為無孢菌目的齊整小核菌Sclerotium rolfsii Sacc[5]，有性態(tài)是擔(dān)子菌門的羅耳阿太菌Athelia rolfsii，自然條件下不常見[6]。菌絲白色，有絹絲般光澤，羽毛狀，呈放射狀擴(kuò)展;菌核初為白色，后至淡黃色，成熟菌核為深褐色，油菜籽狀，大小不等，一般在0.5～3 mm之間[68]。除危害蘋果外，白絹病菌還危害柑橘、油桐、油茶、核桃等多種木本植物，以及花生、甘薯、大蔥、辣椒等多種農(nóng)作物[6，914]。

近年來，隨蘋果矮砧密植栽培模式的大面積推廣和苗木的頻繁調(diào)運(yùn)，白絹病的危害逐年加重，部分蘋果園和苗圃每年因白絹病導(dǎo)致死樹達(dá)10%以上[15]。白絹病菌寄主范圍廣，菌核能在土壤中長期存活[16]，導(dǎo)致土壤帶菌量大。病菌菌核在土壤中萌發(fā)后很快擴(kuò)展至蘋果樹的根莖部，沿根莖向下擴(kuò)展，并很快環(huán)繞樹體根莖部，形成白色菌絲層，侵入枝干皮層內(nèi)，嚴(yán)重時(shí)造成皮層腐爛。樹體發(fā)病早期不易發(fā)覺[12]，當(dāng)?shù)厣喜砍霈F(xiàn)明顯癥狀時(shí)，樹體已進(jìn)入垂死狀態(tài)，難以救治。

生產(chǎn)上對蘋果樹白絹病的防治以發(fā)病后灌藥治療，或春季根部灌藥預(yù)防為主。例如，在發(fā)病初期，將根莖處土扒開，用50%多菌靈WP灌根[15]，或在早春用2%硫酸銅溶液[2]浸透淺層根部，以抑制土壤中病原菌生長擴(kuò)展。對于花生白絹病，生產(chǎn)上也采用25%咯菌腈FSC進(jìn)行拌種或灌根處理[1718]。由于有關(guān)白絹病的防治藥劑研究報(bào)道很少，藥劑的選擇存在盲目性，上述措施都難以有效控制病害的發(fā)生。

本試驗(yàn)測試了9種藥劑和生石灰對白絹病菌的抑菌和殺菌效果，研究了不同施藥方法對蘋果白絹病的防治效果，旨在為蘋果樹白絹病的防治提供藥劑和防控方法。

1 材料與方法

1.1 供試病菌及殺菌劑

2016年8月從山東省沂源縣的一個(gè)果園選擇感染白絹病的蘋果幼樹，連根拔起，從根莖部挑取菌絲轉(zhuǎn)入馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基中，25℃下培養(yǎng)2 d，用直徑0.8 mm的毛細(xì)管從菌落邊緣挑取單菌絲，獲得純培養(yǎng)菌種，在4℃冷藏柜中保存。使用前將保存菌種轉(zhuǎn)接到PDA中，25℃下活化培養(yǎng)2 d，從菌落邊緣打取菌餅，用于接種。

取適量大麥粒洗凈，在清水中浸泡2 h，分裝到250 mL的三角瓶中，每瓶70 g，加入12%的蜂蜜水12.5 mL，2%的蛋白胨水溶液12.5 mL，121℃滅菌1 h備用。打取12個(gè)直徑5 mm白絹病菌菌餅，均勻地混入大麥粒中，25℃下培養(yǎng)，培養(yǎng)期間每隔2 d搖瓶1次，使病菌能更充分地接觸大麥粒;2周后獲得染有白絹病菌的大麥粒。

選取生產(chǎn)上常見的9種殺菌劑和生石灰作為供試藥劑，測試濃度為廠家推薦濃度（表1）。

1.2 9種殺菌劑對菌絲生長和菌核形成的抑制效果

將草炭土與田土按體積比1∶1混合，制成培養(yǎng)基質(zhì)，裝入口徑15 cm，高13 cm的花盆中，每盆1 L左右，壓平壓實(shí)。以清水為對照，每種藥劑2盆，全部試驗(yàn)共20盆。將藥劑配成相應(yīng)濃度（表1）的藥液，每盆澆施500 mL藥液，使藥液浸透盆內(nèi)基質(zhì)。每盆均勻放置6個(gè)帶菌大麥粒，將大麥粒壓入基質(zhì)內(nèi)，一半露在表面。將花盆放入塑料袋中密封，保持袋內(nèi)相對濕度在95%以上，轉(zhuǎn)入25℃的恒溫箱中培養(yǎng)。24 h 后檢查能夠萌發(fā)出菌絲的大麥粒的數(shù)量，5 d后測量大麥粒周圍所形成的菌落直徑，并記錄大麥粒上及菌落內(nèi)產(chǎn)生的菌核數(shù)量。當(dāng)帶菌大麥粒上或菌落內(nèi)菌絲集結(jié)形成質(zhì)密的白色球狀菌絲組織時(shí)，記為1個(gè)菌核。全部試驗(yàn)在不同的時(shí)間重復(fù)3次。殺菌劑對菌絲生長和對菌核形成的抑制率按如下方法計(jì)算：

菌絲生長抑制率=（對照組菌落平均直徑-處理組菌落平均直徑）/對照組菌落平均直徑×100%;

菌核形成抑制率=（對照組菌核平均數(shù)量-處理組菌核平均數(shù)量）/對照組菌核平均數(shù)量×100%。

1.3 9種殺菌劑對病菌的致死效果

將草炭土和田土按體積比1∶1混合，裝入口徑15 cm，高13 cm的花盆中，每盆1 L左右。將100個(gè)帶菌大麥粒均勻混于基質(zhì)中。將9種藥劑按照廠家推薦濃度（表1）配制成藥液，每個(gè)花盆澆施500 mL，每種藥劑處理3盆。以清水為對照，室外自然條件下放置。分別于1、2、3和4周時(shí)從每個(gè)花盆中取出10個(gè)大麥粒，用清水充分清洗，然后轉(zhuǎn)入PDA培養(yǎng)基上25℃條件下培養(yǎng)，24 h和72 h后檢查大麥粒上有無白絹病菌菌絲長出，若有菌絲長出，表明大麥粒中的菌絲仍然存活，并依此計(jì)算殺菌劑對白絹病菌的致死效果。

殺菌率=（對照組產(chǎn)生菌絲的大麥粒數(shù)平均值-處理組產(chǎn)生菌絲的大麥粒數(shù)平均值）/對照組產(chǎn)生菌絲的大麥粒數(shù)平均值×100%。

1.4 藥土對白絹病菌生長的抑制和阻隔效果

將草炭土與田土按1∶1比例混合，裝入直徑15 cm的培養(yǎng)皿中，每皿250 mL，澆透水，中央放置2個(gè)帶菌的大麥粒，并緊靠在一起。試驗(yàn)藥劑為95%甲基立枯磷TC、50%福美雙WP、生石灰與硫酸銅混合物、生石灰4種。95%甲基立枯磷TC設(shè)3個(gè)濃度處理：950、4 750和9 500 mg/L，每個(gè)濃度配100 mL藥液;50%福美雙WP設(shè)3個(gè)濃度處理：500、2 500和5 000 mg/L，每個(gè)濃度配100 mL藥液;生石灰與硫酸銅的混合物設(shè)3個(gè)配比，即100 mL水中加入10 g生石灰，配成石灰乳，然后分別加1 g、5 g和10 g硫酸銅，并充分混勻。將100 mL藥液與250 mL土壤混合制成藥土，將藥土撒施于培養(yǎng)皿近邊緣處，藥土距離帶菌大麥粒5～7 cm。生石灰處理則直接將10 g生石灰粉撒于培養(yǎng)皿邊緣。全部試驗(yàn)共設(shè)10個(gè)藥劑處理，以清水為對照，每處理5個(gè)培養(yǎng)皿。將培養(yǎng)皿密封，轉(zhuǎn)入25℃的恒溫箱中保濕培養(yǎng)5 d，測量帶菌大麥粒形成菌落的直徑，記錄每個(gè)帶菌大麥粒周圍菌落內(nèi)形成菌核的數(shù)量，計(jì)算殺菌劑對菌絲生長和對菌核形成的抑制率。全部試驗(yàn)在不同時(shí)間重復(fù)3次。

1.5 盆栽藥效試驗(yàn)

盆栽藥效試驗(yàn)設(shè)置95%甲基立枯磷TC 633 mg/L、99%噁霉靈TC 248 mg/L和生石灰3個(gè)藥劑處理，以清水為對照，接種病菌的位置設(shè)置兩個(gè)，即在基質(zhì)內(nèi)和在基質(zhì)表面。全部試驗(yàn)共8個(gè)處理，每處理設(shè)置1個(gè)50 cm×35 cm×25 cm的育苗穴盤，每個(gè)穴盤內(nèi)扦插12支直徑為0.5～1.0 cm、長度為30 cm的蘋果矮化自根砧品種‘M9T337的枝段。全部試驗(yàn)重復(fù)3次。

將草炭土與田土按1∶1比例混合，裝入育苗盤內(nèi)，壓實(shí)，厚度20 cm。在每個(gè)盤中均勻扦插12枝‘M9T337枝段，枝段與枝段相距10 cm以上。在離枝段3 cm和6 cm處分別擺放2圈帶菌的大麥粒，每圈4粒，作為接種病菌。接種病菌后，再均勻撒入一層基質(zhì)，壓實(shí)，厚度為2 cm，作為病菌在基質(zhì)內(nèi)的處理。以不撒基質(zhì)，病菌直接露在基質(zhì)表面作為病菌在基質(zhì)表面的處理。將甲基立枯磷與噁霉靈按推薦濃度配好后，均勻澆于枝段周圍，形成一個(gè)半徑4.0 cm的施藥圈，藥劑用量為30 mL。生石灰處理將生石灰直接撒施于枝段周圍形成半徑4.0 cm的石灰圈，生石灰用量為2 g。將處理枝段放置在室外（20～30℃），每天噴淋澆水，保持基質(zhì)濕潤，上方遮蓋黑色園藝地布，防止陽光直射。2周后，將全部枝段取出，檢測枝段上有無白絹病菌的菌絲。若有菌絲，表明該枝段已受白絹病菌侵染。藥劑防治效果按如下公式計(jì)算：防治效果=（對照組受侵染枝段數(shù)-處理組受侵染枝段數(shù)）/對照組受侵染枝段數(shù)×100%。

1.6 數(shù)據(jù)分析

以每個(gè)帶菌大麥粒萌發(fā)后生長形成菌落的直徑、菌核的數(shù)量、每個(gè)培養(yǎng)皿中有存活菌絲的大麥粒數(shù)量和受侵染的枝段數(shù)量為基本數(shù)據(jù)單元，采用通用線性模型（GLM）進(jìn)行方差分析，假設(shè)菌落直徑和菌核數(shù)量呈正態(tài)分布，有存活菌絲的大麥粒數(shù)量和受侵染的枝段數(shù)量為二項(xiàng)分布，在GLM模型中選用gaussian和binomial分布函數(shù)。用multcomp模塊中的glht函數(shù)對GLM的預(yù)測值進(jìn)行多重比較，判定殺菌劑對病菌生長、菌核形成的抑制效果和藥劑對白絹病的防治效果。全部的數(shù)據(jù)分析在R統(tǒng)計(jì)軟件中完成。在方差分析之后，以每個(gè)處理的平均值計(jì)算藥劑的抑菌效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 9種殺菌劑對白絹病菌菌絲生長和菌核形成的抑制效果

帶菌的大麥粒在用殺菌劑處理的基質(zhì)中培養(yǎng)1 d后，除633 mg/L的95%甲基立枯磷TC和248 mg/L的 99%噁霉靈TC兩個(gè)藥劑濃度處理外，其他處理中，約79.0%的帶菌大麥粒能萌發(fā)長出明顯的菌絲。在25℃下培養(yǎng)5 d后，藥劑處理的帶菌大麥粒所形成菌落的直徑最大為7.0 cm（硫酸銅），單個(gè)大麥粒所形成菌落內(nèi)產(chǎn)生菌核的數(shù)量最多可達(dá)44粒（硫酸銅）。在未施藥的清水處理基質(zhì)中，36個(gè)大麥粒所形成菌落直徑的平均值為（3.21±1.37）cm，每個(gè)菌落所形成菌核數(shù)量平均值為（9.97±6.05）粒（表2）。

在633 mg/L的95%甲基立枯磷TC和248 mg/L的99%噁霉靈TC處理的基質(zhì)中，白絹病菌菌落直徑分別為（0.31±0.40）和（0.56±0.59）cm，顯著小于清水處理和其他7種藥劑處理的菌落直徑，每個(gè)菌落內(nèi)所形成菌核數(shù)量分別為（0.06±0.23）和（0.69±4.17）粒，也顯著少于清水處理和其他藥劑處理中每個(gè)菌落所形成的菌核數(shù)量（表2），說明95%甲基立枯磷TC和99%噁霉靈TC能顯著抑制白絹病菌菌絲生長和菌核的形成。在50 mg/L的25 g/L咯菌腈FSC和1 500 mg/L的45%異菌脲SC處理的基質(zhì)中，白絹病菌菌落的直徑顯著小于清水處理基質(zhì)中菌落的直徑，每個(gè)菌落形成的菌核數(shù)量與清水處理中的菌核數(shù)量無顯著差異，說明這兩種藥劑對菌絲生長有顯著的抑制作用，但不能抑制菌核的形成。在250 g/L吡唑醚菌酯EC和50%福美雙WP處理的基質(zhì)中，菌落直徑和每個(gè)菌落形成菌核數(shù)量都與對照無顯著差異，表明其對菌絲生長和菌核形成均無抑制作用。在800 mg/L的80%多菌靈WP、250 mg/L的50%乙烯菌核利WG和760 mg/L硫酸銅處理基質(zhì)中，菌落生長的直徑分別為（4.05±1.39）、（4.01±1.23）和（4.56±1.31）cm，顯著大于清水處理中形成菌落的直徑;每個(gè)菌落所形成的菌核數(shù)量分別為（7.72±6.03）、（9.64±7.61）和（8.92±1015）粒，與對照無顯著差異（表2），說明這三種殺菌劑對菌核形成無作用，且能夠促進(jìn)菌絲生長。

2.2 9種殺菌劑對病菌的致死效果

將帶菌大麥粒從殺菌劑處理過的基質(zhì)中取出，接種到PDA上培養(yǎng)24 h后，絕大部分大麥都能萌發(fā)長出典型的白絹病菌的菌絲。只有633 mg/L的95%甲基立枯磷TC和250 mg/L的250 g/L吡唑醚菌酯EC兩種藥劑處理的基質(zhì)中有少量大麥粒沒有萌發(fā)產(chǎn)生菌絲，與清水對照存在顯著差異（P<0.05）。其他7種藥劑處理基質(zhì)中大麥粒攜帶的病菌存活率都接近100%，與清水處理沒有顯著差異。培養(yǎng)72 h后，所有藥劑處理基質(zhì)中的大麥粒均長出白絹病菌的菌絲，大麥粒中的病菌存活率達(dá)100%，與對照無差異。這表明，95%甲基立枯磷TC和250 g/L吡唑醚菌酯EC兩種藥劑也只是對大麥粒表面或淺層的病菌有殺滅效果，而不能殺滅大麥粒內(nèi)部的菌絲（表3）。

2.3 藥土對白絹病菌生長的抑制和阻隔效果

在撒施生石灰，以及生石灰與硫酸銅的混合物配制藥土的處理中，白絹病菌不能在基質(zhì)中生長，沒有形成明顯的菌落或僅形成微小菌落，但病菌能在大麥粒上生長，形成大量菌核，且其數(shù)量顯著高于對照所形成的菌核數(shù)量（P<0.01）（表4）。

95%甲基立枯磷TC配制的藥土能有效抑制白絹病菌的生長，但不能抑制菌核的形成。95%甲基立枯磷TC 3個(gè)濃度處理中大麥粒所形成菌落的直徑分別為（2.62±2.77）、（2.87±1.95）和（3.33±1.65）cm，顯著小于（P<0.05）清水處理中帶菌大麥粒所形成的菌落直徑（6.96±2.95）cm。帶菌大麥粒在50%福美雙WP配制的藥土中所形成菌落的直徑和菌核數(shù)量與對照都無顯著差異，表明50%福美雙WP配制的藥土既不能抑制白絹病菌的菌絲生長，也不能抑制白絹病菌形成菌核（表4）。

2.4 盆栽藥效試驗(yàn)

在距離扦插枝段3 cm和6 cm的基質(zhì)內(nèi)部和表面接種白絹病菌，經(jīng)2周的培養(yǎng)，對照處理分別有11個(gè)和12枝段受到白絹病菌的侵染，侵染率分別為30.5%和33.3%。澆施95%甲基立枯磷TC（633 mg/L）和99%噁霉靈TC（248 mg/L）處理的枝段沒有受白絹病菌的侵染，防治效果達(dá)100%。在根莖部撒施生石灰的處理，各自有2個(gè)枝段受白絹病菌的侵染，侵染率為5.5%，與對照有顯著差異，防治效果分別為達(dá)81.8%和83.3% （表5）。

3 討論

本試驗(yàn)所測試的9種殺菌劑中，95%甲基立枯磷TC和99%噁霉靈TC兩種藥劑能有效抑制白絹病菌的生長和菌核的形成，抑制率大于80%，在實(shí)際生產(chǎn)中可用于白絹病的防控，但藥劑需直接接觸病菌才能發(fā)揮其應(yīng)有的效果。25 g/L咯菌腈FSC和45%異菌脲SC兩種藥劑雖然對白絹病菌的生長和菌核形成也有一定的抑制效果，但抑制率不足50%。其他5種藥劑不但不能有效抑制白絹病菌的菌絲生長和菌核形成，部分藥劑還能促進(jìn)病菌的生長。

白絹病菌很容易形成菌核，菌核是白絹病菌的主要初侵染菌源，而成熟的菌核具有極強(qiáng)的抗逆能力，在土壤中能長期存活，存活時(shí)間長達(dá)5～6年[15]。本試驗(yàn)所測試的9種殺菌劑都不能有效殺滅大麥粒中的白絹病菌，推測也難以殺死白絹病菌的菌核或菌核內(nèi)的白絹病菌。因此，在生產(chǎn)實(shí)踐中難以通過殺菌劑消滅在土壤中長期存活的菌核。

白絹病菌喜酸性環(huán)境，菌核萌發(fā)和菌絲生長需要pH為4～7的環(huán)境[16]，弱堿性環(huán)境能抑制病菌菌絲生長[17]。生石灰作為一種安全經(jīng)濟(jì)的材料常用來改良土壤，調(diào)節(jié)土壤的酸堿度，用于土壤消毒。本研究發(fā)現(xiàn)，雖然生石灰不能殺滅白絹病菌，而且能促進(jìn)病菌形成大量菌核，卻能有效抑制白絹病菌的菌絲生長，而且能有效抑制5 cm以外的白絹病菌的菌絲生長，能有效防止病菌接近樹體根莖部，其效果優(yōu)于95%甲基立枯磷TC。在實(shí)際生產(chǎn)中可用于處理土壤以預(yù)防白絹病的發(fā)生。生石灰與硫酸銅的混合物也能有效抑制白絹病菌的生長，其抑菌效果不及生石灰，實(shí)際生產(chǎn)中不建議使用。

蘋果白絹病主要發(fā)生在6—8月高溫多雨季節(jié)。對于有白絹病菌或已發(fā)生白絹病的果園或苗圃，于雨季之前，在果園土表或圍繞根莖部撒施生石灰，可有效預(yù)防白絹病菌侵染樹體和苗木;在降雨或澆水后，立即撒施生石灰也能有效預(yù)防白絹病的發(fā)生;在土壤或育苗基質(zhì)中拌施生石灰，雖不能殺菌白絹病菌，但可抑制病菌擴(kuò)散到達(dá)寄主植物，預(yù)防白絹病的發(fā)生。95%甲基立枯磷TC和99%噁霉靈TC對白絹病菌的生長和菌核的形成也有很好的抑制效果，可用于苗木消毒、澆施、地面噴霧或隨滴灌使用。

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（責(zé)任編輯：楊明麗）