HPV檢測技術(shù)的研究進(jìn)展

林平

摘要：宮頸癌是常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤。嚴(yán)重危害女性的生命健康。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國每年死于宮頸癌的人數(shù)近5萬之多。宮頸癌及宮頸癌前病變（宮頸CIN）的發(fā)展需要很長的時(shí)間。所以，宮頸癌及癌前病變篩查是預(yù)防宮頸癌的有效措施。高危型人乳頭瘤病毒感染及持續(xù)性人乳頭瘤病毒感染是導(dǎo)致宮頸癌的主要原因，因此，HPV檢測是臨床上篩查宮頸癌及癌前病變的主要手段之一?，F(xiàn)就，近些年HPV檢測方法及研究情況進(jìn)行整理概括作一綜述。

人乳頭瘤病毒（HPV）是一種嗜上皮性病毒，在人類皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞粘膜鱗狀上皮細(xì)胞是其天然宿主，主要通過性傳播感染，長期以來，已知HPV感染可引起人類良性腫瘤和疣。目前已發(fā)現(xiàn)超過200種不同的HPV亞型，根據(jù)其致病性分為高危型和低危型。與宮頸癌有關(guān)的高危型HPV有16，18，31，33，35，39，45，52，56，58，59，68。低危型有6，11，42，43，44。還有HPV6，11，42型與生殖道疣有關(guān)。

近些年來，我國對(duì)宮頸癌越來越重視，其防治方法也在不斷更新發(fā)展，HPV疫苗迅速崛起，只是我國還沒有廣泛普及。目前，宮頸癌的篩查仍是主要預(yù)防，控制宮頸癌的手段，根據(jù)美國婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會(huì)（American College of Obstetricians and Gynecologisists，ACOG）最新的宮頸癌篩查和預(yù)防實(shí)踐指南，強(qiáng)調(diào)以下幾點(diǎn)：

1、宮頸癌篩查應(yīng)從 21 歲開始。HIV 感染女性除外。年輕女性感染 HPV 后幾乎均可通過免疫系統(tǒng)在 1-2 年內(nèi)清除病毒而不發(fā)生病變。過早的篩查可能會(huì)增添患者的焦慮及花費(fèi)，導(dǎo)致過度隨診。

2、21-29 歲女應(yīng)單獨(dú)行細(xì)胞學(xué)檢查，每 3 年篩查 1 次。30-65 歲女性建議每 5 年行細(xì)胞學(xué)和 HPV 聯(lián)合篩查。

3、以前篩查結(jié)果陰性且無 HSIL 及更高級(jí)別病變的女性，65 歲以后停止宮頸癌前篩查。

4、已行子宮全切且以前沒有 HSIL 及更高級(jí)別病變的女性應(yīng)停止宮頸癌篩查。

5、有 HIV 感染、免疫缺陷、子宮內(nèi)己烯雌酚暴露及既往 HSIL或更高級(jí)別病變的女性，可能比常規(guī)篩查指南推薦的需要更頻繁的篩查。

6、對(duì)于細(xì)胞學(xué) ASCUS、HPV 陰性的女性，建議 3 年內(nèi)復(fù)查 TCT檢查及 HPV 篩查。

7、30 歲及以上的細(xì)胞學(xué)陰性，HPV 陽性的女性，12 個(gè)月內(nèi)復(fù)查 TCT 檢查及 HPV 檢測。如果復(fù)查的細(xì)胞學(xué)結(jié)果為 ASCUS 及更高級(jí)別病變，或 HPV 檢測結(jié)果仍陽性，建議行陰道鏡檢查?；蛘咧苯舆M(jìn)行 HPV 基因分型，若 16 型或 18 型陽性，應(yīng)直接進(jìn)行陰道鏡檢查，若 16 型或者 18 型陰性，應(yīng)在 12 個(gè)月后再次進(jìn)行聯(lián)合篩查。

目前HPV的主要檢測方法有：病理學(xué)檢測，分子生物學(xué)檢測，免疫組化法，血清學(xué)檢測，其中病理學(xué)檢測為確診宮頸癌的金標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)就HPV檢測的發(fā)展情況作以綜述。

1.人乳頭瘤病毒感染宮頸的病理學(xué)改變。

鱗狀細(xì)胞浸潤癌：占宮頸癌的75%-80%。

微小浸潤癌肉眼觀察無明顯異常，或類似子宮頸柱狀上皮異位，隨病變發(fā)展，可形成4種類型，即外生型（最常見，常累及陰道），內(nèi)生型，潰瘍型，頸管型。通過顯微鏡檢測根據(jù)病灶大小又分為微小浸潤癌和浸潤癌（根據(jù)癌細(xì)胞的分化程度又分為I級(jí)II級(jí)III級(jí)）。

腺癌：占宮頸癌的20%-25%。巨檢發(fā)現(xiàn)腺癌通常來自子宮頸管內(nèi)，浸潤管壁，或自子宮頸管內(nèi)向子宮頸外口突出生長，常可侵犯宮旁組織，病灶向子宮頸管內(nèi)生長時(shí)子宮頸外觀正常，但因子宮頸管膨大，形如桶狀。顯微鏡觀察主要有2種組織學(xué)類型。黏液腺癌和惡性腺瘤。

腺鱗癌：占宮頸癌的3%-5%。癌組織中含有腺癌和鱗癌兩種成分。

2.分子生物學(xué)技術(shù)檢測人乳頭瘤病毒技術(shù)。

2.1 檢測樣本及檢測項(xiàng)目

一般為宮頸上皮組織，如用于細(xì)胞學(xué)檢測的宮頸刮片或者刷取宮頸上皮細(xì)胞的拭子。還有在陰道鏡下取的活檢組織。近些年來有研究證實(shí)，宮頸口處的上皮細(xì)胞會(huì)進(jìn)入尿液，因此，尿液也可用作檢測生殖道HPV感染的樣本。檢測前處理工作繁雜，樣本的量必須足夠多。目前的分子生物學(xué)技術(shù)可以檢測（1）HPV的不同亞型，不同亞型致病性不同，而且高危型HPV病毒感染需要進(jìn)行陰道鏡進(jìn)一步診斷，低危型則不需要，HPV分型檢測是很有必要的可以避免醫(yī)療資源的過度浪費(fèi)。（2） HPV DNA檢測，目前還沒有普及應(yīng)用，可能原因是其檢測的特異性相對(duì)較低，假陽性相對(duì)較高，另外有些患者感染HPV后，病毒活性沒有引起惡變，而是一段時(shí)間后自行消失了。（3）HPV的mRNA檢測，主要是指檢測HPV病毒中E6和E7蛋白的表達(dá)，HPV E6/E7蛋白是惡化的宮頸上皮細(xì)胞的主要分子，有研究顯示E6、E7mRNA的水平越高，疾病的惡化程度也越高。因此HPV mRNA的檢測結(jié)果是早期診斷宮頸癌的有力參考。（4）HPV病毒含量檢測，即檢測出HPV病毒的含量，這項(xiàng)檢測在清除病毒的治療起著重要作用，可以幫助我們直觀的觀察治療預(yù)后效果。

2.2臨床上常用的檢測方法。

2.2.1分子雜交技術(shù)，包括原位核酸雜交法和雜交捕獲法。其中原位核酸雜交法有定位準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，可以在細(xì)胞水平上探討HPV感染。但該方法敏感度低，需要大量純化樣本。區(qū)分不了HPV的型別。捕獲雜交法利用化學(xué)發(fā)光放大抗體捕獲的信號(hào)，可以檢測高危型HPV病毒和低危型HPV病毒。但是無法區(qū)分單獨(dú)的HPV亞型。

2.2.2 PCR檢測方法，這種方法特異性，敏感性較好。包括實(shí)時(shí)定量PCR法，特異性PCR法，通用引物PCR法，DNA基因芯片技術(shù)，導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)等。PCR檢測方法是目前最好的HPV檢測方法，簡單易行，樣本來源不受限，還可有效的進(jìn)行HPV分型。但會(huì)發(fā)生樣品間的交叉反應(yīng)，導(dǎo)致假陽性。

3.免疫組化法檢測人乳頭瘤病毒

免疫組化方法，通過病變部位的病毒抗原與抗HPV病毒的抗體結(jié)合。此方法特異性很高，還可以明確病變部分，在篩查宮頸癌及癌前病變中有一定的參考價(jià)值。但是檢出率低，不能區(qū)分HPV的型別，敏感度較差。

4.血清抗體法檢測人乳頭瘤病毒

HPV血清抗體檢測法，雖然感染HPV后血清中會(huì)有反映，但這種檢測方法發(fā)展緩慢，因此準(zhǔn)確性不高，無法知道具體感染時(shí)間，也無法區(qū)分HPV型別。隨著不斷研究，發(fā)現(xiàn)HPV血清檢測在宮頸癌的治療和預(yù)后隨訪中有一定的參考價(jià)值。

近些年，關(guān)于HPV檢測研究迅速，在篩查宮頸癌及宮頸癌前病變中占有越來越重要的位置，但其也存在一定的弊端，高危型HPV感染及持續(xù)性HPV感染是宮頸癌及癌前病變的誘因，但并不是絕對(duì)條件，并且還有很多人對(duì)HPV感染和宮頸癌的關(guān)系了解不深，沒有定期篩查的意識(shí)，使得HPV檢測無法大規(guī)模開展，此外，HPV檢測技術(shù)的改進(jìn)方向應(yīng)該是提高靈敏度和特異性，可以分型檢測，成為宮頸癌篩查中不可缺少的手段。

參考文獻(xiàn)：

[1]吳文湘，劉朝暉.62種人乳頭瘤病毒臨床檢測技術(shù)點(diǎn)評(píng)[J].中國計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科.2016，8（9）.1-3.

[2]王振煥.HPV檢測，TCT篩查，陰道鏡及病理檢查在宮頸癌患者病變前篩查中的臨床意義[J].臨床研究.2018. 4.152.

[3]李燕菊.陰道鏡下活檢組織檢查以及HPV檢測在宮頸病變檢測中的應(yīng)用價(jià)值[J].健康之路.2018，17（8）.273.

[4]高耀云，王紹文.高危型HPV檢測及TCT檢查在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值分析[J].中國繼續(xù)教育.2018，9（27）.26-27.

[5]張文竹.TCT，HPV檢測在宮頸癌前病變中的篩查價(jià)值[D].吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院.2017.

[6]沈曉斌，包磊，詹瑩.HPV檢測在宮頸癌前病變篩查策略中的作用探討[J].中國婦幼健康研究.2018，28（10）. 1345-1348.

[7]隋龍，叢青.婦科腫瘤篩查[J].中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志.2016，32（5）.395-398.

[8]李紅成，葉芳.人乳頭瘤檢測的臨床意義研究進(jìn)展[R].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2016（6）.

[9]黃蓉，沈佐君.高危型人乳頭瘤病毒分子生物學(xué)檢測的研究進(jìn)展[J].臨床輸血與檢驗(yàn).2013，（15）.88-91.

[10]張博，張穎.液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPV mRNA檢測對(duì)宮頸癌的診斷價(jià)值[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué).2016，24.118-122.

[11]王晴.HPV分型定量檢測對(duì)宮頸病變的預(yù)測價(jià)值[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展.2018，27（5）.351-354.

[12]魏媛.HPV分型檢測，Aptima HPV檢測和Cobas4800HPV檢測在診斷宮頸病變中的應(yīng)用效果對(duì)比[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢.2018，16（15）.1-2.

[13]王延.TCT陽性病例與其HPV相關(guān)性及HPV分型在ASC-US在臨床處理中的價(jià)值[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志.2016，32（22）.3735-3737.

[14]應(yīng)晟，陳志勇.人乳頭瘤病毒DNA檢測在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值探討[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志.2018，28（20）.2513-2518.