雞滑液囊支原體分離鑒定及臨床治療

摘要：研究主要結(jié)合一個養(yǎng)殖場的實際發(fā)病情況，分析了雞滑液囊支原體的形態(tài)培養(yǎng)特征、生化鑒定、生長抑制試驗，并對分離得到的滑液囊支原體進(jìn)行了藥敏試驗，根據(jù)藥敏試驗，選擇高敏抗生素進(jìn)行臨床治療，取得了很好的治療效果。通過本次研究表明，發(fā)病養(yǎng)殖場確診為滑液囊支原體感染，分離得到的致病原對泰樂菌素、恩諾沙星藥物敏感，通過選擇敏感藥物進(jìn)行對癥治療，起到很好治療效果。

關(guān)鍵詞：雞滑液囊支原體;分離鑒定;臨床治療

中圖分類號：S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.19.007

0 引言

雞滑液囊支原體是危害雞健康生長的常見致病原，該種致病原不具備細(xì)胞壁，是一種單細(xì)胞核的微生物，外觀呈球形或卵圓形，任何年齡和品種的雞均可以感染該種致病原，其中對3～16周齡的雞造成的危害最嚴(yán)重，呈現(xiàn)急性感染，隨著雞日齡的升高，逐步呈現(xiàn)慢性持續(xù)性感染，會嚴(yán)重影響到雞的正常生長和正常生產(chǎn)。臨床上該種疾病主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫脹、滑葉囊炎，病理學(xué)變化可以發(fā)現(xiàn)患病黏膜表面會附著大量粘液和滲出物，滲出顏色呈灰白色。近年，很多地區(qū)的雞養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大，使該種疾病的發(fā)病率呈現(xiàn)逐步提升的趨勢，造成的損失日趨嚴(yán)重，因此要加強防控。

1 材料與方法

1.1 養(yǎng)殖場發(fā)病情況

2018年2-5月，某養(yǎng)殖場出現(xiàn)疑似發(fā)病情況，結(jié)合具體臨床表現(xiàn)獸醫(yī)初步判定為雞滑液囊支原體病。整個養(yǎng)殖場發(fā)病率相對較高，患病及主要表現(xiàn)為精神狀態(tài)較差，采食欲望不高，大多數(shù)患病雞出現(xiàn)關(guān)節(jié)發(fā)炎癥狀不能正常行走，臥地不起，它表現(xiàn)為跗關(guān)節(jié)、趾關(guān)節(jié)腫大，解剖發(fā)現(xiàn)病死雞滑液囊膜上附著大量黃白色的粘稠樣干酪物質(zhì)。病死雞的氣管中也存在大量黃色粘液性或白色干酪樣滲出物，氣囊囊膜顯著增厚，肝臟、腎臟、脾臟等器官表現(xiàn)為充血腫大和典型的器官病變，初步判定為是雞滑液囊支原體。

1.2 儀器設(shè)備

致病原分離選擇的儀器設(shè)備主要包括超凈工作臺、-p溫振蕩培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、支原體液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、葡萄糖、精氨酸、尿素、四氮唑生化培養(yǎng)管，雞滑液囊支原體標(biāo)準(zhǔn)陽性血清濾紙片、恩諾沙星、泰樂菌素、太妙菌素、氟苯尼考、土霉素、林可霉素、卡那霉素。

1.3 方法

第一，病料采集。在無菌條件下收集病死及關(guān)節(jié)腔中的內(nèi)容物，采集到的內(nèi)容物放置到消毒過的試管中，密封后帶回實驗室進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定;第二，致病原分離培養(yǎng)。將采集到的病料先接種到支原體液體培養(yǎng)基上，放置在37℃溫度條件下持續(xù)培養(yǎng)，直到液體培養(yǎng)基的顏色變成橘黃色為止。將培養(yǎng)物收集起來進(jìn)行過濾，再次接種到液體培養(yǎng)基上進(jìn)行代代培養(yǎng)，收集第2代菌液進(jìn)行病原菌鑒定。將分離得到的菌液制成涂片選擇使用姬姆薩充分染色觀察致病原形態(tài)。選擇上述得到的菌液0.1mL，接種到2種液體培養(yǎng)基上，一種含有輔酶a，一種不含輔酶a，相同的培養(yǎng)條件下，持續(xù)培養(yǎng)一段時間后，觀察培養(yǎng)基的變化。再將液體培養(yǎng)機中的內(nèi)容物分別轉(zhuǎn)移到含有和不含有輔酶a的固體培養(yǎng)基上，5%的二氧化碳濃度下持續(xù)培養(yǎng)3～5d，觀察致病菌菌落形態(tài)，后將致病菌菌落放置在低倍顯微鏡下觀察。選擇使用葡萄糖、精氨酸、尿素、四氮唑生化培養(yǎng)管，將分離得到的致病原接種到上述幾種生化培養(yǎng)管中，溫度控制為37℃，持續(xù)培養(yǎng)一段時間后，觀察致病菌的生化特性;第三，紅細(xì)胞吸附試驗。取少量添加輔酶a的培養(yǎng)基液體，制作成涂片后，充分固定，然后滴加1%的雞紅細(xì)胞懸濁液，37℃作用30min后，選擇PBS緩沖稀釋液對涂片進(jìn)行充分沖洗，連續(xù)沖洗3次，然后放置在顯微鏡下觀察紅細(xì)胞形態(tài);第四，致病原堅定。將添加有輔酶a的液體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到含有青霉素和醋酸鉈的支原體液體培養(yǎng)基上，傳代培養(yǎng)10次，將培養(yǎng)液體轉(zhuǎn)移到支原體固體培養(yǎng)基，持續(xù)培養(yǎng)一段時間后觀察培養(yǎng)基菌落形態(tài);第五，血清學(xué)分析。將分離得到致病菌菌，均勻的涂布在固體培養(yǎng)基上，然后選擇使用雞滑液囊支原體標(biāo)準(zhǔn)陽性血清濾紙片放置在培養(yǎng)基上[1]，37℃培養(yǎng)一段時間后，觀察到抑菌圈大小如果直徑在2mm以上，表示致病原抑制生長陽性反應(yīng);最后，藥敏試驗。選擇使用常規(guī)紙片法進(jìn)行藥敏試驗，明確高敏抗生素和低敏抗生素。

2 結(jié)果

2.1 病原鑒定結(jié)果

第一，致病菌形態(tài)。致病原涂片染色鏡檢，可以發(fā)現(xiàn)姬姆薩能將致病原染成藍(lán)色，外觀成球形或圓形。分離得到的致病菌接種到含有輔酶a的液體支原體培養(yǎng)基24～48h后，培養(yǎng)液變渾濁，顏色變成橘紅色。而不含有輔酶a的液體支原體培養(yǎng)極少，致病原不能很好生產(chǎn)，培養(yǎng)基形態(tài)沒有發(fā)生變化[2]。第二，將分離得到的致病原接種到含有輔酶a的固體培養(yǎng)基上，接種3d后，在低倍顯微鏡下能看到煎蛋狀的菌落。在不含有輔酶a的固體支原體培養(yǎng)基上不生長致病原;第三，生化和凝集試驗。生化試驗結(jié)果顯示該種致病菌能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，能還原四氮唑，不分解靜氨酸尿素。分離得到的致病菌能凝集1%的雞紅細(xì)胞;第四，菌體形態(tài)。連續(xù)傳代培養(yǎng)10次后，菌體形態(tài)沒有發(fā)生變化，分離結(jié)果表明均體為L型陰性;第五，生長抑制試驗。本次選擇的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，在致病菌菌落周圍能形成大于2mm的抑菌圈，由此可以表明，陽性血清能抑制分離得到的致病菌生長。

2.2 臨床治療

結(jié)合藥敏試驗，選擇高敏抗生素進(jìn)行對癥治療。本次研究結(jié)果表明，恩諾沙星、泰樂菌素、林可霉素對分離得到的致病菌較敏感，可以選擇上述3種藥物交替使用。在雞群的飲用水中添加98%的酒石酸泰樂菌素粉劑，每升水添加0.25g，連續(xù)使用1周。同時對臨床癥狀較嚴(yán)重的患病雞肌肉注射20%的恩諾沙星注射液，使用劑量為0.1mL/kg體重，1次/d，連續(xù)使用5d為1個療程。綜合采用上述手段治療，1周后養(yǎng)殖場的發(fā)病情況得到有效改善，治愈率高達(dá)98%[3]。養(yǎng)殖場的病情控制后，按照隨機原則采集患病雞的新鮮血液，進(jìn)行血清凝集試驗，檢測出隱性帶菌雞后立即淘汰處理，逐步凈化雞群，直到連續(xù)3次檢測不出帶菌雞表示凈化完全。

3 討論與結(jié)論

在進(jìn)行病情診斷中，一定要明確具體的臨床表現(xiàn)和病理變化，然后根據(jù)具體的臟器病變情況對病情做出初步判斷。有條件的地區(qū)，針對上述疾病，應(yīng)該立即采集病料，進(jìn)行嚴(yán)格的實驗室診斷。在病料采集中，應(yīng)該采集典型的病變臟器組織，通過病原學(xué)分離、菌體形態(tài)培養(yǎng)、生化鑒定、紅細(xì)胞凝集和生長抑制試驗，證明是雞滑液囊支原體感染。該種疾病傳播流行具有一定的季節(jié)性，在每年1-4月發(fā)病率最高，發(fā)病雞群主要集中在60日齡左右，通常呈急性感染，慢性感染或持續(xù)性感染。目前雞滑液囊支原體治療主要采用抗菌藥物治療為主，一旦出現(xiàn)發(fā)病情況，應(yīng)該立即采用抗菌藥物進(jìn)行治療。但由于雞滑液囊支原體很容易產(chǎn)生耐藥性，在藥物防治中，如果沒有提前做好藥敏試驗，選擇的藥物針對性不強，使致病原的耐用性逐步增加，錯過最佳治療時期，導(dǎo)致治療效果變差，治療周期變長。因此在藥物治療前，應(yīng)在分離致病原的基礎(chǔ)上，進(jìn)行嚴(yán)格的藥敏試驗，選擇高敏抗生素進(jìn)行對癥治療，這樣才能提高治療效果，降低發(fā)病率。

參考文獻(xiàn)

[1]王昆，宮曉煒，陳啟偉，等.禽滑液囊支原體診斷與防控技術(shù)研究進(jìn)展[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2018（9）：31-34，245.

[2]馬爽，郭莉莉，宋新宇，等.雞滑液囊支原體感染的流行病學(xué)調(diào)查與分析[J].中國家禽，2016，38（23）：68-71.

[3]劉軼秋，薛青紅，張媛，等.恩諾沙星及其他抗菌藥對雞滑液囊支原體的體外聯(lián)合抑菌試驗[J].中國家禽，2013，35（22）：13-16.

作者簡介：陳興龍（1983-），男，山東平陰人，本科，助理獸醫(yī)師，研究方向：畜禽疾病預(yù)防與治療。