鴿圓環(huán)狀病毒感染診斷與控制

陸雨楠　陳俊紅　陳羽　朱秋陽(yáng)　曹彬彬　陳瑾　戴鼎震

摘要：鴿圓環(huán)病毒感染嚴(yán)重?fù)p害青年鴿的健康，嚴(yán)重?fù)p傷鴿的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，影響賽鴿和肉鴿的培育和飼養(yǎng)。該文針對(duì)鴿圓環(huán)病毒的臨床癥狀和診斷方法開展具體研究，得出相關(guān)結(jié)論和結(jié)果，并提出預(yù)防和控制方法。

關(guān)鍵詞：鴿;鴿圓環(huán)病毒;臨床癥狀;診斷方法;預(yù)防和控制

中圖分類號(hào)：S858.39

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.15.068

基金項(xiàng)目：江蘇省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練重點(diǎn)項(xiàng)目（ 2018135730132）

作者簡(jiǎn)介：陸雨楠（1997-），女，江蘇南通人，碩士研究生，主要從事獸醫(yī)學(xué)研究工作。

通信作者：戴鼎震（1964-），男，江蘇興化人，博士，主要從事預(yù)防獸醫(yī)學(xué)及中獸醫(yī)研究工作。

0引言

鴿圓環(huán)病毒最早被發(fā)現(xiàn)是在1993年的美國(guó)，在其后加拿大、澳大利亞、英國(guó)、法國(guó)、意大利、比利時(shí)和美國(guó)等國(guó)家相繼發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行報(bào)道。浙江省是中國(guó)最早發(fā)現(xiàn)鴿圓環(huán)病毒感染的地方，余旭平等對(duì)此次發(fā)現(xiàn)的鴿圓環(huán)病毒基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析。鴿圓環(huán)狀病毒感染（ pigeon clrcovlrus infection，PCI）是一種以侵害2～12月齡青年鴿為主的傳染性疾病，本身不致死，但由繼發(fā)感染引起的死亡率可高達(dá)100%。該病毒主要引起嚴(yán)重的免疫抑制，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)病毒、細(xì)菌、真菌和寄生蟲等各種病原體應(yīng)答不足，進(jìn)而引起嚴(yán)重的復(fù)發(fā)性感染，并表現(xiàn)出相應(yīng)的臨床癥狀，嚴(yán)重時(shí)可致死亡。

1 鴿圓環(huán)病毒基因組

鴿圓環(huán)病毒（ Pigeon circovlrus，PiCV）結(jié)構(gòu)為球體，沒(méi)有囊膜，直徑為15～18 nm，且二十面體對(duì)稱。PiCV是一種DNA病毒，其基因組為單股負(fù)鏈環(huán)狀，大小為2.0 kb，是目前已知最小的一種無(wú)囊膜、單股負(fù)鏈環(huán)狀DNA病毒。PiCV有5個(gè)主要的開放閱讀框（Open Reading Frame，ORF），分別為V1、C1、C2、5’基因間區(qū)域和3’基因間區(qū)域。編碼復(fù)制相關(guān)的蛋白（ Rep），ORF V1以AGT為起始密碼子，由316個(gè)左右的氨基酸組成，分離株的Rep蛋白氨基酸序列同源性較高，為91.5% ～99. 1%?；パa(bǔ)鏈上的ORF Cl起始密碼子為ATG/ATA，主要用于編碼殼蛋白（ Cap），由270、273或274不等的氨基酸組成，其所分離病毒的Cap蛋白氨基酸序列同源性較分散，為73.0% ～ 99.3%，Cap蛋白抗原性良好。ORF C2與CI-樣在互補(bǔ)鏈上，其主要的功能還未發(fā)現(xiàn)。5’基因間區(qū)域在ORFV1和ORF V2的起始密碼子之間，存在莖環(huán)結(jié)構(gòu)，莖環(huán)的九堿基序列（ TAGTATTAC）是高度保守序列，八堿基序列（ GGAGCCAC）在下游是重復(fù)保守序列。3’基因間區(qū)域在ORF V1和ORF V2終止密碼子之間，長(zhǎng)170 nm。

2流行病學(xué)

PiCV通常感染1歲以下的青年鴿，成年鴿感染現(xiàn)象并不明顯，且主要侵害鴿的免疫系統(tǒng)。目前，世界各地有關(guān)于PiCV傳播的報(bào)道和相關(guān)的研究資料較少，已有的研究報(bào)道和發(fā)表的相關(guān)文章表明經(jīng)口攝入病原可能是引起PiCV的主要途徑，同樣也有證據(jù)表明禽類的蛋也可以做為PiCV傳播的1種途徑。對(duì)鴿圓環(huán)病毒的傳播方式研究結(jié)果表明，除通過(guò)繁育垂直傳播，如禽蛋，還可以水平傳播，如排泄。

圓環(huán)病毒感染多發(fā)生于包括鴿在內(nèi)的禽鳥類，且青年和幼齡禽鳥較多（金絲雀、鵝、鸚鵡鵡、南方黑背鷗、梅花雀、鴕鳥）。鸚鵡喙羽病是鳥類感染圓環(huán)病毒感染后研究最全面的。

3臨床癥狀

從臨床試驗(yàn)分析，圓環(huán)病毒病感染的發(fā)病率高，但死亡率低，圓環(huán)病毒主要侵害免疫器官，本身不致死，其總體死亡率取決于繼發(fā)感染的輕重情況，實(shí)際死亡率為1% ～100%。

鴿圓環(huán)病毒感染沒(méi)有非常明顯的具有特征性臨床癥狀，其臨床癥狀與其發(fā)生的繼發(fā)感染有直接關(guān)系，通常臨床癥狀表現(xiàn)為精神委頓、呼吸困難、食欲減退、體重減輕、腹瀉等消耗性癥狀。其臨床典型癥狀包括眼砂變淡，可視黏膜如喙、口、咽等處黏膜，顏色蒼白，有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)羽毛漸進(jìn)性營(yíng)養(yǎng)不良而大量脫落禿毛和喙變形。因此，臨床癥狀和繼發(fā)感染的病原比較相關(guān)。

4病理變化

法氏囊萎縮是感染圓環(huán)病毒的禽類，在解剖時(shí)唯一常見、肉眼可見的病變，但不是所有感染禽類都有發(fā)生，其他肉眼病變和繼發(fā)感染有直接聯(lián)系。組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)免疫相關(guān)器官衰竭和淋巴細(xì)胞壞死，如法氏囊、肝臟等，禽類的免疫器官以法氏囊為主，法氏囊萎縮是最明顯的病變。慢性腸炎、壞死性喉氣管炎、慢性支氣管炎、壞死性腸炎、纖維素性肺泡炎、肝炎等病變也可在感染鴿身上觀察到，主要與繼發(fā)感染相關(guān)。5診斷

（1） DNA探針原位雜交法：相較于其他方法，原位雜交法是最準(zhǔn)確的診斷方法。其PiCV檢出率可高達(dá)8g%，運(yùn)用常規(guī)的組織學(xué)方法檢測(cè)，檢出率為66%。同時(shí)對(duì)于常規(guī)鏡檢不明顯的，鴿的非免疫相關(guān)器官組織，如肺臟、腎臟、大小腸、胰臟、嗉囊等組織器官中同樣能檢測(cè)出PiCV。對(duì)于自然感染的病鴿也可用此方法在多種組織（如法氏囊、脾、胸腺、腎和肝）中檢測(cè)出PiCV。多數(shù)PiCV感染是呈亞臨床型，與免疫抑制的程度有關(guān)，因此從臨床與病理學(xué)正常的鴿中也可檢測(cè)到圓環(huán)病毒的存在。在成年鴿身上有時(shí)也可檢測(cè)到PiCV，因?yàn)镻iCV會(huì)大量消耗T細(xì)胞和B細(xì)胞群，進(jìn)而嚴(yán)重阻礙宿主對(duì)病毒感染的應(yīng)答反應(yīng)，導(dǎo)致病程延長(zhǎng)。

（2）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（PCR）：是目前較為常見的檢測(cè)鴿圓環(huán)狀病毒的分子生物學(xué)方法，它的特點(diǎn)是特異性高、快捷。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的目的是對(duì)PiCV擴(kuò)增。通過(guò)溫度變化控制病毒基因的變性和復(fù)性，并針對(duì)PiCV設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP等材料完成對(duì)PiCV擴(kuò)增。對(duì)PCR產(chǎn)物分析，可深入了解鴿圓環(huán)病毒的特異性基因片段，有利于認(rèn)識(shí)鴿圓環(huán)病毒特異性和遺傳特性。對(duì)鴿圓環(huán)病毒全基因序列分析，可掌握鴿圓環(huán)病毒的變異和發(fā)展，深入了解鴿圓環(huán)病毒，對(duì)檢測(cè)病原和疾病預(yù)防有極為重要的意義。

（3）斑點(diǎn)雜交法：將PiCV變性后固定在硝酸纖維素膜上，用已標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交，運(yùn)用放射自顯影技術(shù)進(jìn)行病毒檢測(cè)。斑點(diǎn)雜交法檢測(cè)鴿圓環(huán)病毒非常方便和快捷，已有的研究表明其檢出率為63%。

上述方法中，最為準(zhǔn)確的診斷方法為原位雜交法。由于病毒可從臨床上表現(xiàn)正常的鴿分離到，許多感染可能呈亞臨床表現(xiàn)，因此無(wú)論是PCR檢測(cè)還是斑點(diǎn)雜交法，都必須結(jié)合原位雜交才能進(jìn)行確診。隨著研究技術(shù)和檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，各種檢測(cè)技術(shù)和研究手段使得探索鴿圓環(huán)病毒的特性成為可能。

6結(jié)束語(yǔ)

鴿圓環(huán)病毒病沒(méi)有有效的特異性、針對(duì)性的治療方法，且還未開發(fā)出合適的疫苗進(jìn)行預(yù)防，合理的喂養(yǎng)及嚴(yán)格的飼養(yǎng)管理至關(guān)重要。由于大多數(shù)感染鴿主要死于免疫力低下導(dǎo)致的繼發(fā)感染，因此臨床上診斷和治療必須針對(duì)相應(yīng)的癥狀和繼發(fā)感染的病原進(jìn)行。

參考文獻(xiàn)

[1]余旭平，竺春，鄭新添，等.鴿圓環(huán)病毒浙江株全基因組的克隆及序列分析[J].病毒學(xué)報(bào)，2009，25 （5）：355-361.

[2]張勇.鴿圓環(huán)病毒病防治[J].四川畜牧獸醫(yī)，2016，43（9）：53.

[3]栗文文，袁海霞，徐雅萍，等.鴿圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2011，38（8）：236-238.

[4]孫興臣，熊曉妍，李敏婕，等.一株賽鴿源鴿圓環(huán)病毒全基因克隆與序列分析[J].病毒學(xué)報(bào)，2017，33 （5）：720-727.

[5] Todd D. Avian circovirus diseases： lessons for the study of PMWS[J]. Veterinary Microbiology， 2004. 98（2）：169-174.

[6] Smyth J A， Weston J，Moffett D A. et al. Detection of circovirus infection in pigeons by in situ hybridization using cloned DNA probes. [J]. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation， 2001. 13（ 6）： 475-482.

[7] Abadie J，Nguyen F，Groizeleau C，et al.Pigeon circovirus infection： pathological observations and suggested pathogenesis.[J]. Avian pathology： journal of the W.V.P.A. 2001，30（2）：149-158.