禤金彩 劉紅全 何秀苗 陳博文 成鑫花 廖秋妮 陳艷艷 李尚泉 吳家法 龍寒

摘要：【目的】鑒定廣西北部灣近海產(chǎn)胞外多糖（EPS）的海洋細(xì)菌種類多樣性，并測(cè)定其EPS生物學(xué)活性，為后續(xù)研究EPS活性及其開發(fā)利用打下基礎(chǔ)?！痉椒ā坎捎灭ひ罕壬?、乙醇沉法和苯酚硫酸法初篩產(chǎn)EPS細(xì)菌，通過16S rDNA序列鑒定細(xì)菌種屬并進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，以1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）測(cè)定EPS的抗氧化活性?！窘Y(jié)果】從廣西北部灣近海海水、沙粒和紅樹林泥土中共分離出205株產(chǎn)EPS細(xì)菌，結(jié)合分離株的菌落特征和形態(tài)觀察結(jié)果可將所分離獲得的細(xì)菌歸為28種細(xì)菌。對(duì)28株代表細(xì)菌株進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示分屬于2個(gè)綱（芽孢桿菌綱和γ-變形菌綱）、4個(gè)目（芽孢桿菌目、假單胞菌目、弧菌目和腸桿菌目）、4個(gè)科（芽孢桿菌科、莫拉菌科、弧菌科和腸桿菌科）、6個(gè)屬（芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、弧菌屬、發(fā)光桿菌屬、變形桿菌屬和不動(dòng)桿菌屬）、15個(gè)種;優(yōu)勢(shì)菌屬為芽孢桿菌屬，占所鑒定菌株的71.43%，其次為葡萄球菌屬、弧菌屬、發(fā)光桿菌屬、變形桿菌屬和不動(dòng)桿菌屬。EPS活性檢測(cè)結(jié)果顯示，不同種屬細(xì)菌所產(chǎn)EPS均具有一定的DPPH清除作用，但不同菌株間差異明顯，清除率為9.43%～71.10%?！窘Y(jié)論】從廣西北部灣近海地區(qū)共分離鑒定出2綱4目4科6屬15種產(chǎn)EPS的海洋細(xì)菌，以芽孢桿菌屬為主，存在種類多樣性，且各類細(xì)菌分泌產(chǎn)生的EPS均具有一定抗氧化活性。

關(guān)鍵詞： 海洋細(xì)菌;胞外多糖;16S rDNA;多樣性;抗氧化活性;廣西北部灣

中圖分類號(hào)： S917.1? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2019）10-2335-08

Diversities and antioxidant activities of exopolysaccharide-producing marine bacteria isolated from

Beibu Gulf Coast in Guangxi

CHEN Bo-wen 1， CHENG Xin-hua1， LIAO Qiu-ni1， CHEN Yan-yan1， LI Shang-quan1， WU Jia-fa1，? LONG Han1， XUAN Jin-cai1， LIU Hong-quan1， HE Xiu-miao1，2*

（1 School of Marine Sciences and Biotechnology， Guangxi University for Nationalities/Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of Utilization of Microbial and Botanical Resources， Nanning? 530006， China; 2Guangxi University for Nationalities/Guangxi Key Laboratory Cultivation Base for Polysaccharide Materials and Modifications， Nanning? 530006， China）

Abstract：【Objective】The present study identified the diversity of exopolysaccharide-producing marine bacterial species isolated from Beibu Gulf area of Guangxi and determined the biological activities of exopolysaccharide（EPS）， which would provide references for further study of its activity and development. 【Method】The EPS-producing bacteria were screened by using mucilage colorimetry， ethanol precipitation and phenol sulfuric acid. The bacterial species were identified by 16S rDNA sequence， as well as their genetic evolution analysis. Finally， the antioxidant activities of bacterial EPS was determined by 1，1-diphenyl-2-trinitrophenyl hydrazine（DPPH） method. 【Result】As a result， 205 strains of EPS-producing bacteria were isolated from the seawater， sea mud and sand samples of Beibu Gulf in Guangxi. Based on the colony characteristics and morphological observation， all the bacteria isolated were classified into 28 strains. The 28 representative strains were selected and further identified by 16S rDNA sequencing， and the results showed that 28 strains belonged to 2 classes （Bacilli and γ-Proteobacteria）， 4 orders（Bacillales， Pseudomonadales， Vibrionales and? Enterobacteriales）， 4 families （Bacillaceae， Moraxellaceae， Vibrionaceae and Enterobacteriaceae）， 6 genera （Bacillus， Staphylococcus， Acinetobacter， Vibrios， Photobacterium and Proteus）， and 15 species. The dominant genus was Bacillus， accounting for 71.43% of the identified strains， followed by Staphylococcus， Vibrios， Photobacterium， and finally Proteus and Acinetobacter. The antioxidant activity test results showed that， the EPS from different species of identified bacteria showed a certain DPPH scavenging effects， however， the effect varied greatly among different strains， and the scaven-ging rates varied between 9.43%-71.10%. 【Conclusion】Fifteen species of EPS-producing marine bacteria， which belong to 6 genera， 4 families， 4 orders， 2 classes， are isolated and identified from mangrove soil samples in Beibu Gulf of Guangxi. The dominant genus is Bacillus. And species diversity? exists among the EPS-producing marine bacteria. The EPS secreted by these identified bacterial strains has certain antioxidant activity.

Key words： marine bacteria; exopolysaccharide（EPS）; 16S rDNA ; diversity; antioxidant activity; Beibu Gulf of Guangxi

0 引言

【研究意義】胞外多糖（Exopolysaccharide，EPS）是微生物分泌到細(xì)胞壁外、易與細(xì)菌菌體分離的水溶性多糖化合物，是微生物適應(yīng)環(huán)境的產(chǎn)物，因具有抗腫瘤、抗氧化、抗細(xì)菌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等生物活性及乳化活性、重金屬吸附能力等非生物學(xué)活性（黃曉波和趙良啟，2006;梁寧等，2011）而備受關(guān)注。海洋微生物物種豐富，且很多海洋細(xì)菌都是潛在的EPS生產(chǎn)者。廣西北部灣氣候條件獨(dú)特，尤其是微生物種質(zhì)資源非常豐富，因此，研究分析廣西北部灣海洋產(chǎn)EPS細(xì)菌多樣性及其生物學(xué)活性，對(duì)開發(fā)利用廣西北部灣微生物資源具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】近年來，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)不同近岸海域產(chǎn)EPS微生物進(jìn)行了大量研究。李京寶（2007）從青島近海樣品中篩選到一株產(chǎn)活性EPS的海洋弧菌，并證實(shí)其分泌產(chǎn)生的EPS不僅可抑制生物膜形成，還能破壞已形成的生物膜，對(duì)銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌等常見菌株的生物膜具有良好抑制作用。湯城（2007）從黃海潮間帶分離獲得一株產(chǎn)EPS的枯草芽孢桿菌LN54，并證實(shí)分泌產(chǎn)生的EPS具有良好的體內(nèi)抑瘤活性，且對(duì)小鼠安全無毒，可開發(fā)成一種免疫增強(qiáng)型抗腫瘤藥物。房耀維等（2010）從連云港海域樣品中篩選獲得一株產(chǎn)抗氧化活性較強(qiáng)EPS的細(xì)菌菌株，通過形態(tài)學(xué)、生理生化及16S rRNA分析，鑒定為枯草芽孢桿菌，其分泌的EPS對(duì) ·OH和[O][2] 有較好的清除效果，具有潛在的食品及醫(yī)藥應(yīng)用價(jià)值。此外，Roca等（2016）在馬拉群島近海岸海域分離到一株產(chǎn)黏性EPS的假交替單胞菌，Brian-Jaisson等（2016）在法國土倫灣海域分離出一株產(chǎn)EPS的海洋假交替單胞菌，且證實(shí)所產(chǎn)的EPS具有抗生物膜形成活性。上述研究結(jié)果表明，不同地理環(huán)境的近岸海域具有豐富而多樣的產(chǎn)EPS菌株，且這些EPS具有獨(dú)特的生物活性。在廣西北部灣海域，梁靜娟等（2006）從北部灣紅樹林泥土中分離獲得一株產(chǎn)EPS而具有抗腫瘤活性的芽孢桿菌;陳佳（2015）、龍寒等（2016）在北部灣紅樹林中分離獲得產(chǎn)EPS的芽孢桿菌和弧菌，且證實(shí)這兩株菌株分泌產(chǎn)生的EPS均具有明顯的免疫增強(qiáng)活性和抗腫瘤細(xì)胞生長活性?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】廣西北部灣海域細(xì)菌具有產(chǎn)各種活性EPS的潛能，但目前針對(duì)該海域產(chǎn)EPS細(xì)菌多樣性的研究鮮見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過16S rDNA序列鑒定分析廣西北部灣近海產(chǎn)EPS細(xì)菌的多樣性，更好地利用該海域豐富的微生物資源，篩選分離獲得生物學(xué)活性獨(dú)特的EPS，為后續(xù)研究EPS活性及其開發(fā)利用打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1. 1 樣品采集

于廣西北部灣欽州（東經(jīng)108°60′～108°76′，北緯21°61′～21°83′）、防城港（東經(jīng)108°06′～108°18′，北緯21°52′～21°53′）、北海（東經(jīng)109°12′～109°28′，北緯21°25′～21°35′）等近海地區(qū)，以無菌采樣器采集海水、海沙、紅樹林根際泥土等樣品分別裝入50 mL的無菌離心管中，并放置在4 ℃保溫箱內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室處理。

1. 2 試驗(yàn)材料

微生物裂解液和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）購自康為世紀(jì)生物科技有限公司，其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純?cè)噭?6S rDNA擴(kuò)增引物GM5F/907R（GM5F：5'-CCTACGGGAGGCAGCA G-3';907R：5'-CCGTCAATTCCTTTGAGTTT-3'）參照Clarke等（2004）的方法合成，委托生工生物工程（上海）股份有限公司設(shè)計(jì)，預(yù)期擴(kuò)增目的片段長度為590 bp。LB固體培養(yǎng)基（g/L）：酵母粉5.0 g，氯化鈉5.0 g，蛋白胨10.0 g，瓊脂18.0～20.0 g，蒸餾水500.0 mL，人工海水500.0 mL，pH 7.4～7.6;LB液體培養(yǎng)基（g/L）：酵母粉5.0 g，氯化鈉5.0 g，蛋白胨10.0 g，蒸餾水500.0 mL，人工海水500.0 mL，pH 7.4～7.6;搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L）：蔗糖4.0 g，酵母膏3.0 g，CaCO3 0.1 g，蒸餾水500.0 mL，海水500.0 mL，pH 7.4～7.6。

1. 3 樣品中細(xì)菌篩選及分離純化

按5%比例將采集樣品裝入盛有LB液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，28 ℃下?lián)u床（180 r/min）培養(yǎng)24 h。取上層培養(yǎng)液按10-6～10-9稀釋后，分別涂布在LB固體培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)24 h。根據(jù)黏液比色法，初步挑取具有黏性的單菌落接種到裝有10.0 mL發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，28 ℃下?lián)u床（150 r/min）發(fā)酵培養(yǎng)48 h。取2.0 mL發(fā)酵液，6000 r/min離心10 min，吸取上清液并加入4倍體積的無水乙醇，置于4 ℃冰箱中醇沉8 h后以7000 r/min離心并收集沉淀、干燥沉淀。以去離子水溶解沉淀，利用苯酚硫酸法測(cè)定溶解液OD（490 nm），最終篩選出產(chǎn)EPS的海洋細(xì)菌。

1. 4 16S rDNA序列擴(kuò)增及測(cè)序分析

取分離的菌株種子液50.0 μL加入EP管中，12000 r/min離心5 min后去除上清液，再加入100.0 μL微生物裂解液并置于80 ℃水浴中作用20 min。裂解后以10000 r/min離心，取4.0 μL上清液進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系25.0 μL，包括2×Taq Mix 12.5 μL，DNA模板4.0 μL，上、下游引物各2.0 μL，雙蒸水4.5 μL。擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃ l min，50 ℃ 1.5 min，72 ℃ 3 min，進(jìn)行30個(gè)循環(huán);72 ℃延伸6 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在80 V電壓下，以10.0 g/L瓊脂糖凝膠電泳30 min，通過凝膠成像儀觀察目的條帶。陽性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送至廣州天一輝遠(yuǎn)基因科技有限公司測(cè)序。

測(cè)序結(jié)果先用SeqMan進(jìn)行序列拼接，獲得的序列輸入EzBioCloud網(wǎng)站（www.ezbiocloud.net）上的16S-based ID進(jìn)行序列比對(duì)分析，與模式菌株進(jìn)行比較，對(duì)待測(cè)菌株進(jìn)行分子鑒定;同時(shí)采用MEGA 5.1中的非加權(quán)組平均法（UPGMA），構(gòu)建基于16S rDNA序列相似度的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，根據(jù)Kimura-2-parameter進(jìn)行評(píng)估矩陣分析。

1. 5 DPPH清除能力測(cè)定

將7.9 mg DPPH溶于100.0 mL無水乙醇，混勻，待用。分別向1.0 mL DPPH乙醇溶液中加入1.0 mL不同濃度的EPS樣品，常溫下避光靜置30 min;另取1.0 mL DPPH乙醇溶液和1.0 mL蒸餾水作為對(duì)照組，以1.0 mL乙醇和1.0 mL不同濃度的EPS樣品作為空白組;收集上清液并在517 nm處測(cè)定其吸光值（A），每個(gè)樣品3次重復(fù)，并依據(jù)下列公式計(jì)算EPS的DPPH清除率。

清除率（%）=[1-（Ai-Aj/A0）]×100

式中，Ai為試驗(yàn)組OD，Aj為空白組OD，A0為對(duì)照組OD。

2 結(jié)果與分析

2. 1 細(xì)菌篩選結(jié)果

通過菌落黏性和苯酚硫酸法，從廣西北部灣近海地區(qū)海水、沙子和紅樹林泥土樣品中共篩選出205株產(chǎn)EPS海洋細(xì)菌。依據(jù)菌落顏色（圖1）進(jìn)行分類，分離菌株主要以乳白色為主，其中，乳白色菌株122株，乳黃色菌株30株，淺黃色菌株11株，中間橙外透明菌株1株，白色菌株18株，橙黃菌株18株，中間黃色外白色菌株2株，橙紅色菌株3株。根據(jù)細(xì)菌形態(tài)（圖2）進(jìn)行分類，分離菌株以桿狀菌株為主，其中，桿狀菌株65株，長桿狀菌株36株，點(diǎn)狀菌株32株，短桿狀菌株45株，球狀菌株19株，弧狀菌株27株。此外，分離菌株中革蘭氏染色陽性菌株156株、陰性菌株49株。結(jié)合分離株的菌落特征和形態(tài)觀察結(jié)果，可將所分離獲得的細(xì)菌歸為28種細(xì)菌，并從中選出28株作為代表株進(jìn)行后續(xù)分子鑒定。

2. 2 分離菌株16S rDNA序列擴(kuò)增結(jié)果

以引物GM5F/907R對(duì)獲得的28株代表菌株進(jìn)行16S rDNA序列PCR擴(kuò)增及電泳檢測(cè)，結(jié)果顯示，所有代表菌株均擴(kuò)增獲得590 bp的目的條帶（圖3），與預(yù)期結(jié)果相符。

2. 3 基于16S rDNA序列的細(xì)菌分類結(jié)果

分離菌株16S rDNA序列在EzBioCloud網(wǎng)站上進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如表1所示，28株代表菌株分屬于芽孢桿菌綱（22株）和γ-變形桿菌綱（6株）兩大綱。在芽孢桿菌綱中，20株隸屬于芽孢桿菌目/芽孢桿菌科/芽孢桿菌屬，2株隸屬于葡萄球菌屬;γ-變形桿菌綱中，1株隸屬于假單胞菌目/莫拉菌科/不動(dòng)桿菌屬，2株隸屬于弧菌目/弧菌科/弧菌屬，2株隸屬于弧菌科/發(fā)光桿菌屬，1株隸屬于腸桿菌目/腸桿菌科/變形桿菌屬?？梢姡瑑?yōu)勢(shì)菌屬為芽孢桿菌屬，占所鑒定菌株的71.43%，其次為葡萄球菌屬、弧菌屬、發(fā)光桿菌屬、變形桿菌屬和不動(dòng)桿菌屬。

在獲得所有代表菌株的綱目科屬分類后，將代表菌株的16S rDNA序列與模式菌株的相應(yīng)序列進(jìn)行進(jìn)一步比對(duì)分析，一般認(rèn)為16S rDNA序列相似度超過99.00%即視為同種，相似度在95.00%～99.00%視為相同屬不同種，相似度低于95.00%的視為不同屬不同種。根據(jù)這一判定標(biāo)準(zhǔn)，28株代表菌株分屬于15個(gè)不同菌種（表1）。其中，CXH-B1210等7株代表菌株與高地芽孢桿菌（41KF2b）的相似度大于99.00%，屬于同一種;TL-2和TL-12株與解淀粉芽孢桿菌（DSM 7）的相似度超過99.00%，為同一種;同理，528233和52852株與枯草芽孢桿菌亞種（NRRL B-23049）屬于同一種;52821等8株代表菌株均屬于蠟狀芽孢桿菌（ATCC 14579）亞種，但只有4株（52821、11-1、52853和A1202株）與蠟狀芽孢桿菌（ATCC 14579）的相似度大于99.00%，屬于同一種;另外4株代表菌株經(jīng)比對(duì)分析，分屬于3個(gè)種;52811株與嗜鹽嗜糖芽孢桿菌（E33）屬于同一種;528091和9.3株與表皮葡萄球菌（ATCC 14990）屬于同一種;Q24株與不動(dòng)桿菌（NIPH 2168）屬于同一種;CXH-B1208和528102株與需鈉弧菌（DSM 759）屬于同一種;B1201和B1211株與發(fā)光桿菌（DSM 22954）屬于同一種;528103株與變形桿菌（08MAS0041）屬于同一種。

2. 4 分離菌株的遺傳進(jìn)化分析結(jié)果

代表菌株的16S rDNA序列與模式菌株的相應(yīng)序列通過MEGA 5.1進(jìn)行序列分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，結(jié)果顯示28株代表菌株可分為兩大分支，分屬于兩個(gè)綱（圖4），且在遺傳距離為0.022處又進(jìn)一步被分為6個(gè)小分支，即分別與6個(gè)不同屬（弧菌屬、發(fā)光桿菌屬、變形桿菌屬、不動(dòng)桿菌屬、葡萄球菌屬和芽孢桿菌屬）聚類。在芽孢桿菌屬中，CXH-B1210等7株代表菌株與高地芽孢桿菌（41KF2b）同屬于一個(gè)分支，TL-2和TL-12株與解淀粉芽孢桿菌（DSM 7）同屬于一個(gè)分支，528233和52852株與枯草芽孢桿菌亞種（NRRL B-23049）屬于一個(gè)分支，52821等8株代表菌株與蠟狀芽孢桿菌（ATCC 14579）同屬于一個(gè)分支，遺傳進(jìn)化樹中的分支情況與細(xì)菌分類和序列相似度比對(duì)分析結(jié)果一致。

2. 5 分離菌株EPS對(duì)DPPH的清除能力結(jié)果

各分離菌株EPS對(duì)DPPH的清除能力測(cè)定結(jié)果如表2所示，2株高地芽孢桿菌（CXH-B1210和6.3株）EPS對(duì)DPPH的清除能力為57.78%～64.72%，3株蠟狀芽孢桿菌EPS對(duì)DPPH的清除能力為27.29%～63.33%，枯草芽孢桿菌亞種528233株EPS的DPPH清除能力為55.93%，嗜鹽嗜糖芽孢桿菌（52811株）EPS的DPPH清除能力為34.37%，2株需鈉弧菌（CXH-B1208和528102株）EPS的DPPH清除能力分別為65.00%和71.10%，表皮葡萄球菌（528091株）EPS的DPPH清除能力為9.43%，變形桿菌（528103株）EPS的DPPH清除能力為45.15%，發(fā)光桿菌（B1211株）EPS的DPPH清除能力為38.07%。在EPS濃度為20.0 mg/mL時(shí)，需鈉弧菌528102株EPS的DPPH清除能力最高，達(dá)71.10%;在EPS濃度為10.0 mg/mL時(shí)，需鈉弧菌CXH-B1208株的清除能力也最高，達(dá)65.00%，最低的是表皮葡萄球菌528091株。綜上所述，不同種屬、不同菌株EPS的DPPH清除能力差異明顯。

3 討論

特殊的海洋環(huán)境蘊(yùn)藏著豐富的功能性微生物資源，而產(chǎn)EPS海洋細(xì)菌的篩選及EPS活性分析已成為當(dāng)前海洋微生物資源利用的一個(gè)重要研究內(nèi)容。本研究從廣西北部灣欽州、北海防城港等近岸海水、沙粒和紅樹林根際泥土等樣品中共分離出205株產(chǎn)EPS的海洋細(xì)菌，經(jīng)過初步分類及代表株的16S rDNA序列測(cè)定分析，發(fā)現(xiàn)分離獲得的細(xì)菌分屬于2個(gè)綱、4個(gè)目、4個(gè)科、6個(gè)屬、15個(gè)種，其中以芽孢桿菌綱/芽孢桿菌目/芽孢桿菌屬細(xì)菌為主，其次是葡萄球菌屬、弧菌屬、發(fā)光桿菌屬，最后是變形桿菌屬和不動(dòng)桿菌屬，表明廣西北部灣近岸海域產(chǎn)EPS細(xì)菌以芽孢桿菌為主，并存在種類多樣性。不同種類菌株EPS的DPPH清除率檢測(cè)結(jié)果表明，不同種屬細(xì)菌所產(chǎn)EPS均具有一定的DPPH清除作用，但清除效果在不同菌株間存在明顯差異，此研究結(jié)果為廣西北部灣海洋微生物資源利用，特別是產(chǎn)EPS細(xì)菌的深入研究打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

對(duì)于廣西北部灣近岸海域產(chǎn)EPS細(xì)菌收集與分離，王松柏（2005）在北部灣紅樹林泥樣中篩選獲得具有抗腫瘤活性的產(chǎn)EPS海洋細(xì)菌，并鑒定該產(chǎn)EPS細(xì)菌屬于芽孢桿菌屬;馬波（2006）在北部灣潿洲島附近海水樣品中也篩選獲得EPS產(chǎn)量較高的海洋細(xì)菌，并鑒定為芽孢桿菌屬;陳佳（2015）、龍寒等（2016）在北部灣欽州近海海水、紅樹林泥樣中利用苯胺藍(lán)培養(yǎng)基篩選出具有免疫調(diào)節(jié)活性的產(chǎn)EPS細(xì)菌，鑒定證實(shí)該分離菌株隸屬于弧菌屬和芽孢桿菌屬。結(jié)合上述報(bào)道的研究結(jié)果及本研究結(jié)果，進(jìn)一步證實(shí)廣西北部灣近岸海域產(chǎn)EPS細(xì)菌存在種屬多樣性，且以各類芽孢桿菌為主。本研究結(jié)果初步探究了廣西北部灣近岸海域功能性微生物的多樣性，但該海域是否還存在其他種類的產(chǎn)EPS細(xì)菌，有待于擴(kuò)大樣品采集范圍和分季節(jié)采樣等進(jìn)行深入分離鑒定。此外，對(duì)于其他海域，如威海近海（劉天華等，2011）、山東榮成海域（張曉飛，2012）、天津入?？冢畈ǖ龋?017）和黃海沉積物（曹若冰，2018）的產(chǎn)EPS分離菌株也是以芽孢桿菌屬細(xì)菌為主，與本研究結(jié)果一致。各地分離菌株均以芽孢桿菌屬細(xì)菌為優(yōu)勢(shì)菌株，可能與該菌屬細(xì)菌對(duì)外界因子的極強(qiáng)抵抗力有關(guān)。

目前，關(guān)于海洋細(xì)菌EPS活性研究已有較多報(bào)道，包括抗氧化活性和免疫調(diào)節(jié)活性等。有研究表明，植物茶葉多糖的抗氧化能力與多糖中的糖醛酸具有一定線性關(guān)系（申明月等，2007），但在細(xì)菌EPS方面，Sun等（2015）、El-Newary等（2017）發(fā)現(xiàn)極樂桿菌屬、芽孢桿菌屬細(xì)菌含有醛糖酸的EPS對(duì)DPPH清除率表現(xiàn)不一，分別為55.40%和99.30%;Guo等（2010）、Ye等（2012）、張曲（2013）發(fā)現(xiàn)嗜冷桿菌屬、愛德華氏屬和假單胞菌屬海洋菌株無醛糖酸EPS對(duì)DPPH的清除率均超過50.00%。因此，細(xì)菌EPS抗氧化能力是否與醛糖酸有關(guān)還有待進(jìn)一步研究。本研究獲得的分離菌株產(chǎn)EPS均具有一定DPPH清除能力，但不同種屬菌株EPS的DPPH清除能力各不相同，清除率為9.43%～71.10%，與前人的研究結(jié)果（Guo et al.，2010;Ye et al.，2012;張曲，2013;Sun et al.，2015;El-Newary et al.，2017）相似，表明不同海洋屬細(xì)菌EPS的DPPH清除能力有差異，因此今后需對(duì)產(chǎn)EPS清除能力強(qiáng)、抗氧化能力高的分離菌株開展擴(kuò)大篩選研究，并對(duì)此類細(xì)菌產(chǎn)EPS的其他生物學(xué)活性進(jìn)行深入探究，為獲得具有高產(chǎn)EPS并具高抗氧化能力的海洋微生物菌株提供參考依據(jù)。

4 結(jié)論

從廣西北部灣近海地區(qū)共分離鑒定出2綱4目4科6屬15種產(chǎn)EPS的海洋細(xì)菌，以芽孢桿菌屬為主，存在種類多樣性，且各類細(xì)菌產(chǎn)的EPS均具有一定抗氧化活性。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）