蒙成　梁慶平　黃艷花　吳地　蔣益敏　吳烈

摘要：【目的】研究不同谷物粒培養(yǎng)基配方及其培養(yǎng)條件對玉米小斑病菌產(chǎn)孢量的影響，為玉米小斑病大面積抗病鑒定工作提供保障?！痉椒ā恳杂衩仔“卟【吧途闔X5為試材，探索18種植物組織培養(yǎng)基、9個溫度梯度、9個培養(yǎng)時間段、7種高低溫誘導(dǎo)和5種不同光照等條件對玉米小斑病菌分生孢子產(chǎn)量的影響?！窘Y(jié)果】培養(yǎng)基的成分組合對玉米小斑病菌分生孢子產(chǎn)生起決定性作用，配方為高粱粒100 g+玉米葉15 g+MgSO4 0.2 g+Na3PO4 0.2 g的7號培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最多，為16.8×104 個/g;24 ℃條件下培養(yǎng)產(chǎn)孢量最多;在20和24 ℃黑暗條件下，培養(yǎng)35 d時的產(chǎn)孢量最多;35 ℃高溫、4 ℃低溫誘導(dǎo)對玉米小斑病菌產(chǎn)孢量均有一定的促進作用，但經(jīng)高、低溫誘導(dǎo)后產(chǎn)生的部分分生孢子一端連接1節(jié)分生孢子梗;光暗交替各12 h、光照強度為2000 lx的產(chǎn)孢量最多，為4.6×105個/g。【結(jié)論】高粱粒100 g+玉米葉15 g+MgSO4 0.2 g+Na3PO4 0.2 g為玉米小斑病菌產(chǎn)孢最佳培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基可顯著促進病菌產(chǎn)生分生孢子;在24 ℃、光照強度2000 lx光暗交替各12 h的培養(yǎng)條件下，病菌的產(chǎn)孢量最多;在35 d內(nèi)培養(yǎng)病菌，培養(yǎng)時間與產(chǎn)孢量成正比;35 ℃高溫和4 ℃低溫誘導(dǎo)對產(chǎn)孢量均有一定的促進作用。

關(guān)鍵詞： 玉米;小斑病菌;接種體;產(chǎn)孢技術(shù)

中圖分類號： S432.4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）05-1001-06

Abstract：【Objective】The aim was to investigate the effects of different grain medium formulations and culture conditions on sporulation of Bipolaria maydis， and provide a guarantee for large-scale identification of resistance to southern corn leaf blight. 【Method】The effects of eighteen plant tissue-based media， nine temperature gradients， nine culture times， seven high and lowtemperature inductions and five different light intensities on conidium formation of wild-type strain HX5 of B. maydis were studied. 【Result】Component combinations of media played a decisive role in conidium formation. Medium No.7 containing 100 g sorghum grains + 15 g corn leaves + 0.2 g MgSO4 + 0.2 g Na3PO4 showed the highest sporulation（16.8×104 spore/g）. Under 24 ℃， the sporulation was the highest. Under darkness at 20 and 24 ℃， sporulation reached the peak on day 35. Induction at 35 and 4 ℃ promoted sporulation of B. maydis to a certain extent. However， after high and lowtemperature induction， one end of partial formed conidia connected to a conidial peduncle. Under light-dark 12 h alternation and light intensity of 2000 lx， sporulation was the highest（4.6×105 spore/g）. 【Conclusion】The optimal medium for sporulation of B. maydis is 100 g sorghum grains+15 g corn leaves+0.2 g MgSO4+0.2 g Na3PO4， which can significantly promote the conidium formation of B. maydis. Under 24 ℃， light intensity of 2000 lx and light-dark 12 h alternation， the sporulation is the highest. Within 35 d， the culture time is proportional to sporulation. Induction at 35 and 4 ℃ promote sporulation of B. maydis to a certain extent.

Key words： corn; Bipolaria maydis; inoculums; sporulation technology

0 引言

【研究意義】玉米小斑病（Southern corn leaf blight，SCLB）是世界玉米主產(chǎn)區(qū)的重要病害（陳利峰，2002），是我國溫暖潮濕玉米產(chǎn)區(qū)的主要葉部病害（趙聚瑩等，2010），在玉米全生育期均可發(fā)生，發(fā)病高峰期在植株抽雄后。自20世紀60年代以來，隨著我國感病玉米雜交品種的推廣應(yīng)用，玉米小斑病危害日趨嚴重，感病品種在一般發(fā)病年份可減產(chǎn)10%以上，嚴重發(fā)生年份減產(chǎn)20%～30%（龔現(xiàn)麗，2010）。因此，選育抗病自交系和雜交種是防治玉米小斑病最經(jīng)濟有效的措施（李洪連和徐敬友，2001;董懷玉等，2005;艾堂順等，2018）。在選育與利用抗病品種過程中，開展玉米小斑病抗病性鑒定是常規(guī)工作，其常用方法是將培養(yǎng)好的帶菌接種體植入玉米喇叭口中或用病菌孢子懸浮液對玉米植株進行噴霧。因此，進行大田抗病性鑒定接種需要大量的接種體，而獲得帶大量分生孢子的接種體或獲得大量分生孢子是順利開展玉米小斑病抗病性接種鑒定的基礎(chǔ)條件?！厩叭搜芯窟M展】在不同營養(yǎng)及培養(yǎng)環(huán)境條件下，病菌分生孢子產(chǎn)孢效果存在明顯差異。陳穎等（2003）采用燕麥、玉米、查理、彼查、PDA及PDA+宿主葉片、PDA+VB1等7種固體培養(yǎng)基培養(yǎng)玉米小斑病菌C小種，結(jié)果表明，PDA+VB1和PDA+宿主葉片2種培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌株，其菌絲生長速度、產(chǎn)孢量和致病力均顯著高于其他培養(yǎng)基。謝紅輝（2010）研究不同培養(yǎng)溫度、不同培養(yǎng)pH和不同營養(yǎng)條件對玉米小斑病病菌菌絲生長量及產(chǎn)孢量的影響，結(jié)果表明，以PDA+VB1為固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲生長速率及產(chǎn)孢量最大，在30 ℃下培養(yǎng)菌絲生長速率快且產(chǎn)孢量大，在25 ℃下培養(yǎng)病菌孢子萌發(fā)速度最快，病菌菌絲在pH為8的條件下生長速度最快且生長量最大。楊麗敏（2012）采用不同保存方法測定玉米小斑病菌產(chǎn)孢量、菌絲生長速度及對菌株致病力的影響，結(jié)果表明，保存玉米小斑病菌菌株時，用大麥作固體培養(yǎng)基，濕度為10%左右，置于5 ℃冰箱短時間（1個月）或長時間（7個月）保存，菌絲生長速度和產(chǎn)孢量最佳，均優(yōu)于玉米培養(yǎng)基和小麥培養(yǎng)基，且菌株致病力得到較好地保持。代玉立等（2016）以福建省建甌、沙縣和福州地區(qū)的3株玉米小斑病菌菌株為對象，研究溫度、濕度、pH、光照、營養(yǎng)對病菌菌絲生長、產(chǎn)孢量和孢子萌發(fā)的影響，結(jié)果表明，菌絲生長最適溫度和pH為30 ℃和pH 6、產(chǎn)孢最適溫度和pH為25 ℃和pH 6～7、孢子萌發(fā)最適溫度和pH為25～28 ℃和pH 6，光照能顯著抑制病菌產(chǎn)孢，在相對濕度為85%和95%條件下或在水瓊脂培養(yǎng)基表面上，孢子萌發(fā)率分別為50%、88%和90%;葡萄糖、乳糖、甘露醇、可溶性淀粉適宜病菌菌絲生長和產(chǎn)孢，而尿素、硫酸銨、硝酸銨和氯化銨能顯著抑制菌絲生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā);菌絲體的致死溫度為65 ℃ 10 min或60 ℃ 30 min，分生孢子的致死溫度為60 ℃ 10 min或55 ℃ 30 min;3株菌株的產(chǎn)孢特性、菌絲致死溫度和致病力均存在明顯差異。以高粱粒為主料配制成的固體培養(yǎng)基是目前玉米小斑病菌繁殖常用的培養(yǎng)基（王曉鳴等，2010）。馮勝澤等（2017）用高粱粒外的其他固體培養(yǎng)基進行病菌產(chǎn)孢試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)產(chǎn)孢量最大的培養(yǎng)條件為玉米葉葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，碳源為乳糖，培養(yǎng)溫度25 ℃、pH 8、光照強度6000 lx、光照條件光暗交替各12 h;此外，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中添加 KNO3可顯著提高產(chǎn)孢量。楊秀娟等（2018）發(fā)明“一種玉米小斑病菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用”專利，該方法利用馬鈴薯、甘露醇、瓊脂粉和水為固體培養(yǎng)基進行產(chǎn)孢試驗，其病菌產(chǎn)孢量是等量PDA培養(yǎng)基產(chǎn)孢量的1.2～3.6倍?！颈狙芯壳腥朦c】前人開展玉米小斑病接種鑒定時，接種體繁殖通常采用固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，操作過程繁瑣，不能直接用帶病菌的接種體進行接種;同時，開展大面積抗病性鑒定時工作量大，操作過程制備的接種體通常存在污染率高、滋長小昆蟲、制備慢且產(chǎn)孢效果不理想等缺點。目前，利用谷物粒培養(yǎng)基培養(yǎng)玉米小斑病菌及產(chǎn)孢因素的研究報道較少?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以高粱粒、小麥粒和玉米粒為主要材料，以玉米葉、甘露醇（C6H14O6）、碳酸鉀（K2CO2）、硫酸鎂（MgSO4）和磷酸鈉（Na3PO4）等為配料，單因素組配18種培養(yǎng)基為供試培養(yǎng)基，同時對培養(yǎng)時間、溫度、光照、高低溫誘導(dǎo)等影響玉米小斑病菌產(chǎn)孢因素進行探討，明確影響玉米小斑病菌產(chǎn)孢最佳谷物粒培養(yǎng)基配方及其培養(yǎng)方法，為玉米小斑病抗病性鑒定工作的簡化性、時效性、準確性提供保障。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

1. 1. 1 供試菌株 玉米小斑病菌野生型菌株HX5采集于廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學院作物研究所玉米試驗地感病病株并分離獲得，采用常規(guī)方法進行病原菌分離與培養(yǎng)，用單細胞進行純化，參照柯赫氏法則進行病菌驗證，最終獲得純化菌株（方中達，1998）。

1. 1. 2 供試培養(yǎng)基 以玉米粒、小麥粒和高粱粒為主料，以玉米葉、C6H14O6、K2CO2、MgSO4、Na3PO4等為配料，單因素組配18種培養(yǎng)基為供試培養(yǎng)基（表1）。制作方法步驟：（1）挑選大小一致、無病蟲的玉米粒、小麥粒和高粱粒。（2）玉米粒浸泡12～15 h，大火煮沸溫火熬制1 h，水洗瀝干備用;小麥粒浸泡20 min，大火煮沸再溫火煮15 min，水洗瀝干備用;高粱粒大火煮沸再溫火煮25 min，水洗瀝干備用;新鮮玉米葉切成約1 cm2大小備用。（3）按配方稱取原料并混勻，濕度以培養(yǎng)基濕潤手握無滴水為度。（4）用300 mL三角瓶分裝配好的培養(yǎng)基，每瓶定量分裝100 g。（5）將制作好的培養(yǎng)瓶121 Pa高壓滅菌45 min。

1. 2 不同培養(yǎng)條件對產(chǎn)孢量的影響

1. 2. 1 培養(yǎng)基對產(chǎn)孢量的影響 供試培養(yǎng)基為單因素組配的18種培養(yǎng)基，每種培養(yǎng)基配方為一個處理，3次重復(fù)。供試菌種在培養(yǎng)皿（直徑9 cm）中的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）上繁殖，待菌絲長滿培養(yǎng)皿后，用鑷子把帶菌絲的培養(yǎng)基割成小粒，每皿菌種平均分別接種到2份供試培養(yǎng)基上（下同）。接種并搖均后的培養(yǎng)瓶置于全黑暗、24 ℃恒溫人工氣候箱中培養(yǎng)11 d，測定產(chǎn)孢量。

1. 2. 2 培養(yǎng)溫度對產(chǎn)孢量的影響 供試培養(yǎng)基為7號培養(yǎng)基（高粱粒100 g+玉米葉15 g+MgSO4 0.2 g+Na3PO4 0.2 g），設(shè)9個溫度梯度（12、16、20、24、26、28、32、36和40 ℃），黑暗培養(yǎng)11 d（劉靜等，2014），3次重復(fù)。設(shè)A、B兩個因素：A因素為接種后帶培養(yǎng)基瓶直接分別放入各溫度培養(yǎng)11 d后測定產(chǎn)孢量;B因素為接種后帶培養(yǎng)基瓶放入26 ℃全黑暗下培養(yǎng)5 d，菌絲長滿培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)入各溫度中繼續(xù)培養(yǎng)，6 d后測定產(chǎn)孢量。

1. 2. 3 培養(yǎng)時間對產(chǎn)孢量的影響 供試培養(yǎng)基為7號培養(yǎng)基，接種處理后的培養(yǎng)瓶分別置于20和24 ℃黑暗條件培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，依次于第5、7、9、11、15、20、25、30和35 d 9個培養(yǎng)時間段測定產(chǎn)孢量，3次重復(fù)。

1. 2. 4 高、低溫誘導(dǎo)對產(chǎn)孢量的影響 供試培養(yǎng)基為7號培養(yǎng)基，把接種后的培養(yǎng)基瓶放入26 ℃全黑暗下培養(yǎng)5 d，菌絲長滿培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)入各高、低溫進行誘導(dǎo)處理，處理結(jié)束后置于24 ℃黑暗條件，誘導(dǎo)時間加繼續(xù)培養(yǎng)共11 d，測定產(chǎn)孢量。設(shè)7個處理：4 ℃ 12 h、4 ℃ 24 h、4 ℃ 48 h、35 ℃ 12 h、35 ℃ 24 h、35 ℃ 48 h和對照（26 ℃全黑暗下培養(yǎng)5 d后直接轉(zhuǎn)入24 ℃黑暗培養(yǎng)6 d）（張立杰等，2015），3次重復(fù)。

1. 2. 5 光照對產(chǎn)孢量的影響 供試培養(yǎng)基為7號培養(yǎng)基，設(shè)5種不同光照處理，分別為：24 h光照（光照強度3000 lx）、12 h光照（3種不同光照強度梯度1500、2000和3000 lx ）12 h黑暗和24 h黑暗，病菌在不同光照處理下24 ℃恒溫培養(yǎng)11 d（馮勝澤等，2017）。

1. 3 產(chǎn)孢量測定方法

各處理隨機取帶病菌接種體2 g，置于50 mL的燒杯中，加無菌水10 mL，為確保帶病菌接種體所產(chǎn)生的分生孢子脫落水里，用堅固勺子連續(xù)攪拌約100次，紗布過濾即得到玉米小斑病菌孢子懸浮液，用血球計數(shù)法測定孢子懸浮液濃度，計算產(chǎn)孢量，每個培養(yǎng)瓶取樣3次，每個樣本讀數(shù)3次，取平均值進行比較。

1. 4 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)用Excel 2007和DPS 7.55進行整理與分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 培養(yǎng)基對玉米小斑病菌產(chǎn)孢量的影響

由圖1可知，除17、16和5號培養(yǎng)基產(chǎn)胞量低于1號培養(yǎng)基（CK）外，其余培養(yǎng)基的產(chǎn)胞量均顯著高于CK（P<0.05，下同），其中，7號培養(yǎng)基（高粱粒100 g+玉米葉15 g+MgSO4 0.2 g+Na3PO4 0.2 g）的產(chǎn)孢量最多，為16.8×104個/g;9號培養(yǎng)基（玉米粒100 g+玉米葉15 g+MgSO4 0.2 g+ Na3PO4 0.2 g）次之，產(chǎn)孢量為10.8×104個/g;其后依次為13、11、14、2、6、3、4、8、15、18、12和10號培養(yǎng)基;常用高粱粒培養(yǎng)基（CK）的產(chǎn)孢量為6.8×103個/g，17號培養(yǎng)基的產(chǎn)孢量與CK相當，差異不顯著（P>0.05，下同），而16和5號培養(yǎng)基的產(chǎn)孢量顯著少于CK，分別為2.2×103和5.4×102個/g?？梢姡衩仔“卟【?號培養(yǎng)基上培養(yǎng)產(chǎn)孢量最多。

2. 2 培養(yǎng)溫度對玉米小斑病菌產(chǎn)孢量的影響

由圖2可知，不同培養(yǎng)溫度對玉米小斑病菌產(chǎn)孢量具有明顯影響，過高或過低均不利于玉米小斑病菌分生孢子的產(chǎn)生，其中，A因素多集中于20～26 ℃產(chǎn)孢，24 ℃時產(chǎn)孢量最多，且顯著多于其他溫度處理，≤12 ℃或≥32 ℃均不產(chǎn)孢;B因素在溫度為12～40 ℃下均可產(chǎn)生分生孢子，26 ℃時產(chǎn)孢量顯著高于其他溫度處理，24 ℃時的產(chǎn)孢量次之?？梢?，玉米小斑病菌分生孢子產(chǎn)生的最適宜溫度為24 ℃，最佳方法是將接種后的培養(yǎng)瓶直接置于24 ℃下培養(yǎng)。

2. 3 培養(yǎng)時間對玉米小斑病菌產(chǎn)孢量的影響

從圖3可看出，培養(yǎng)時間對玉米小斑病菌產(chǎn)孢具有明顯影響。玉米小斑病菌在20 ℃黑暗條件下培養(yǎng)11 d開始產(chǎn)孢，在11～35 d內(nèi)，產(chǎn)孢量隨培養(yǎng)時間的延長而顯著增加;在24 ℃黑暗條件培養(yǎng)9 d開始產(chǎn)孢，在9～35 d內(nèi)，產(chǎn)孢量隨培養(yǎng)時間的延長而顯著增加?？梢?，在20和24 ℃黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間與產(chǎn)孢量成正比，該病菌連續(xù)培養(yǎng)35 d產(chǎn)孢量最多。

2. 4 高、低溫誘導(dǎo)對玉米小斑病菌產(chǎn)孢量的影響

由圖4可知，4 ℃冷凍24 h處理的產(chǎn)孢量顯著高于其他處理，為4.2×105個/g;35 ℃熱激24 h處理的效果次之，產(chǎn)孢量為3.5×105個/g;35 ℃熱激48 h和4 ℃冷凍12 h處理的產(chǎn)孢量與35 ℃熱激24 h處理的產(chǎn)孢量相當，差異不顯著;4 ℃冷凍48 h和35 ℃熱激12 h處理的產(chǎn)孢量與對照差異不顯著。試驗還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)高、低溫誘導(dǎo)后產(chǎn)生的部分分生孢子一端有連接1節(jié)分生孢子?，F(xiàn)象。

2. 5 光照對玉米小斑病菌產(chǎn)孢量的影響

從圖5可看出，適量光照對玉米小斑病菌產(chǎn)孢具有促進作用，過暗或過亮均不利于該病菌產(chǎn)孢。其中，高強度光照即連續(xù)24 h光照最不利于產(chǎn)孢，產(chǎn)孢量僅為1.4×105個/g;連續(xù)24 h黑暗亦不利于產(chǎn)孢，產(chǎn)孢量為1.9×105個/g;12 h光照（光照強度2000 lx）12 h黑暗條件下的產(chǎn)孢量最多，為4.6×105個/g;12 h光照（光照強度1500 lx）12 h黑暗條件下的產(chǎn)孢量次之，為3.3×105個/g;12 h光照（光照強度3000 lx）12 h黑暗條件會抑制病菌分生孢子產(chǎn)孢，產(chǎn)孢量為2.5×105個/g。

3 討論

方中達（1998）認為培養(yǎng)基是影響病菌產(chǎn)孢的最重要因素，促進分生孢子產(chǎn)生的最主要途徑是采用不同培養(yǎng)基或改變培養(yǎng)基成分;劉麗麗等（2014）認為培養(yǎng)基不同會明顯影響多數(shù)茄鏈格孢產(chǎn)孢量。為此，前人開展了大量有關(guān)培養(yǎng)基促進產(chǎn)孢量的研究工作。莊義慶等（2008）研究表明，促進蕉斑鐮刀菌液體搖瓶產(chǎn)孢的最佳培養(yǎng)液為綠豆湯培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液在適宜條件下的產(chǎn)孢量達1×106個/mL;趙紅等（2012）研究發(fā)現(xiàn)，蘋果腐爛病菌在加蜂蜜水和蛋白胨的帶殼大麥上能大量產(chǎn)孢;蘭成忠等（2013）認為胡蘿卜培養(yǎng)基是促進辣椒疫霉菌產(chǎn)生孢子囊數(shù)量最多的培養(yǎng)基。本研究通過18種不同配方的谷物粒培養(yǎng)基對玉米小斑病菌進行產(chǎn)孢誘導(dǎo)篩選，結(jié)果表明，產(chǎn)孢量最多的培養(yǎng)基是配方為高粱粒100 g+玉米葉15 g+MgSO4 0.2 g+Na3PO4 0.2 g的7號培養(yǎng)基，產(chǎn)孢量為16.8×104個/g，其次是配方為玉米粒100 g+玉米葉15 g+MgSO4 0.2 g+Na3PO4 0.2 g的9號培養(yǎng)基，產(chǎn)孢量為10.8×104 個/g，說明7和9號培養(yǎng)基配方適宜玉米小斑病菌產(chǎn)孢。王曉梅等（2007）研究表明，玉米小斑病菌產(chǎn)孢適宜溫度為20～30 ℃，最適溫度為26 ℃，5 ℃以下或35 ℃以上均不能產(chǎn)孢;代玉立等（2016）研究表明，玉米小斑病菌產(chǎn)孢最適溫度為25 ℃。本研究發(fā)現(xiàn)，在12 ℃以下或32 ℃以上時玉米小斑病病原菌菌絲體生長緩慢，不能產(chǎn)孢;16～28 ℃時病原菌菌絲生長速度快，能產(chǎn)孢;20～26 ℃時病原菌產(chǎn)孢量迅速增加，24 ℃下產(chǎn)孢量最多;長菌絲后的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入各溫度中進行繼續(xù)培養(yǎng)均可產(chǎn)孢，26 ℃產(chǎn)孢量最高，24 ℃次之。說明玉米小斑病菌的菌絲生長溫度條件高于分生孢子產(chǎn)生的條件，菌絲一但生成，在較高和較低溫度條件下均能產(chǎn)生分生孢子，可能是玉米小斑病菌能在全世界玉米產(chǎn)區(qū)發(fā)生的重要原因。

本研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)時間對玉米小斑病菌產(chǎn)孢量具有明顯影響，在7號培養(yǎng)基上，病菌在20和24 ℃黑暗條件下的產(chǎn)孢量與培養(yǎng)時間成正比，該病菌連續(xù)培養(yǎng)35 d時產(chǎn)孢量最多。玉米小斑病菌在其余配方的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)時間與產(chǎn)孢量是否也成正比尚有待進一步研究。此外，本研究發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)35 d后容易滋生雜菌，因此未繼續(xù)培養(yǎng)。這是否與培養(yǎng)時間過長或生長環(huán)境等因素有關(guān)，尚有待進一步探究。

本研究發(fā)現(xiàn)35 ℃高溫和4 ℃低溫誘導(dǎo)對玉米小斑病菌產(chǎn)孢量均有一定的促進作用，但經(jīng)過高、低溫誘導(dǎo)后產(chǎn)生的部分分生孢子一端連接1節(jié)分生孢子梗，對分生孢子的活性是否產(chǎn)生影響也有待進一步探究。此外，適量光照對玉米小斑病菌產(chǎn)孢具有促進作用，過暗或過亮均不利于該病菌產(chǎn)孢。7號培養(yǎng)基在12 h光照12 h黑暗交替且光照強度為2000 lx時的產(chǎn)孢量最多，與前人研究認為光照能顯著抑制病菌產(chǎn)孢的結(jié)果（陳利峰，2002）存在差異，需進一步通過試驗驗證。

4 結(jié)論

玉米小斑病菌產(chǎn)孢的最佳組織培養(yǎng)基配方為高粱粒100 g+玉米葉15 g+MgSO4 0.2 g+Na3PO4 0.2 g，該培養(yǎng)基可顯著促進病菌產(chǎn)生分生孢子;該培養(yǎng)基在24 ℃、光照強度2000 lx光暗交替各12 h時產(chǎn)孢量最多;在35 d內(nèi)培養(yǎng)病菌，培養(yǎng)時間與產(chǎn)孢量成正比;35 ℃高溫、4 ℃低溫誘導(dǎo)對病菌產(chǎn)孢量均有一定的促進作用，但誘導(dǎo)后產(chǎn)生的部分分生孢子形態(tài)發(fā)生改變。

參考文獻：

艾堂順 ，田志強，李會敏，鄧策，丁俊強，張學林，劉海富，朱偉嶺，李志敏. 2018. 玉米南方銹病抗病QTL鑒定和效應(yīng)分析[J]. 河南農(nóng)業(yè)大學學報，52（4）：514-518. [Ai T S，Tian Z Q，Li H M，Deng C， Ding J Q，Zhang X L，Liu H F，Zhu W L，Li Z M. 2018. Mapping and effectiveness analysis for resistance genes of southern corn rust in maize[J]. Journal of Henan Agricultural University，52（4）：514-518.]

陳利峰. 2002. 農(nóng)業(yè)植物病理學[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社：189. [Chen L F. 2002. Agricultural Phytopathology[M]. Beijing： China Agriculture Industry Press：189.]

陳穎，郝麗梅，王立安. 2003. 不同培養(yǎng)基對玉米小斑病菌生長繁殖及致病力的影響[J]. 河北師范大學學報（自然科學版），27（2）：192-194. [Chen Y，Hao L M，Wang L A. 2003. Effects of different media on the growth reproduction

and pathogenicity of Bipolaris maydis race C[J]. Journal of

Hebei Normal University（Natural Science Edition），27（2）：

192-194.]

代玉立，甘林，阮宏椿，廖蕾，石妞妞，杜宜新，陳福如，楊秀娟. 2016. 福建省玉米小斑病菌的生物學特性研究[J]. 中國農(nóng)學通報，32（31）：131-137. [Dai Y L，Gan L，Ruan H C，Liao L，Shi N N，Du Y X，Chen F R，Yang X J. 2016. Biological characteristics of Bipolaris maydis in Fujian Province[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin，32（31）：131-137.]

董懷玉，姜鈺，王麗娟，徐秀德. 2005. 玉米種質(zhì)資源抗灰斑病鑒定與評價[J]. 植物遺傳資源學報，6（4）：441-443. [Dong H Y，Jiang Y，Wang L J，Xu X D. 2005. Evaluation on maize germplasm resources for resistanceto gray leaf spot[J]. Journal on Plant Genetic Resources，6（4）：441-443.]

方中達. 1998. 植病研究法[M]. 第3版. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社. [Fang Z D. 1998. Plant Disease Study[M]. The 3rd Edition. Beijing： China Agriculture Press.]

馮勝澤，劉星晨，王海祥，趙潔，趙立卿，鄭亞男，鞏校東，韓建民，谷守芹，董金皋. 2017. 玉米大斑病菌分生孢子形成的影響因素及GATA轉(zhuǎn)錄因子家族的表達分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學，50（7）：1234-1241. [Feng S Z，Liu X C，Wang H X，Zhao J，Zhao L Q，Zheng Y N，Gong X D，Han J M，Gu S Q，Dong J G. 2017. Influencing factors of conidiospore and expression analysis of GATA transcription factor gene family in Setosphaeria turcica[J]. Scientia Agricultura Sinica，50（7）：1234-1241.]

龔現(xiàn)麗. 2010. 夏玉米小斑病的發(fā)生與防治[J]. 河南農(nóng)業(yè)，（17）：19. [Gong X L. 2010. Occurrence and prevention of small spot disease in summer maize[J]. Agriculture of Henan，（17）：19.]

蘭成忠，劉裴清，李本金，陳慶河，翁啟勇. 2013. 辣椒疫霉菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基及誘導(dǎo)方法篩選[J]. 熱帶作物學報，34（9）：1776-1780. [Lan C Z，Liu P Q，Li B J，Chen Q H，Weng Q Y. 2013. Screening of medium and induction method for sporangia production of Phytophthora capsici[J]. Chinese Journal of Tropical Crops，34（9）：1776-1780.]

李洪連，徐敬友. 2001. 農(nóng)業(yè)植物病理學實驗實習指導(dǎo)[M]. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社. [Li H L，Xu J Y. 2001. Agricultural Plant Pathology Experiment Practice Guidance[M]. Beijing： China Agriculture Press.]

劉靜，李國華，周明，許麗月，肖春云. 2014. 橡膠樹白粉菌分生孢子萌發(fā)條件及存活時間的研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學報，27（1）：151-155. [Lui J，Li G H，Zhou M，Xu L Y，Xiao C Y. 2014. Study on conditions of conidial germination and survival time of Oidium heveae[J]. Southwest China Jour-nal of Agricultural Sciences，27（1）：151-155.]

劉麗麗，朱杰華，崔亞婧，楊志輝，徐進，路文雅. 2014. 培養(yǎng)條件對茄鏈格孢產(chǎn)孢的影響[J]. 菌物學報，33（3）： 659-667. [Lui L L，Zhu J H，Cui Y J，Yang Z H，Xu J，Lu W Y. 2014. Effects of culture conditions on sporulation of Alternorio soloni[J]. Mycosystema，33（3）： 659-667.]

王曉梅，呂平香，李莉莉，見德寶，楊信東. 2007. 玉米小斑病重要流行環(huán)節(jié)的初步定量研究Ⅱ病斑產(chǎn)孢、孢子飛散、殺菌劑篩選[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學學報，29（2）：128-132. [Wang X M，Lü P X，Li L L，Jian D B，Yang X D. 2007. ?Preliminary quantitative studies on important epidemic links of

Bipolaris maydis Ⅱ. lesion spomlation，spore dispersion

and fungicide screening[J]. Journal of Jilin Agricultural U-

niversity，29（2）：128-132.]

王曉鳴，石潔，晉齊鳴，李曉，孫世賢. 2010. 玉米病蟲害田間手冊：病蟲害鑒別與抗性鑒定[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)科技出版社. [Wang X M，Shi J，Jin Q M，Li X，Sun S X. 2010. Field Manual of Maize Diseases and Insect Pests： Identification of Pests and Diseases and Identification of Resistance[M]. Beijing： China Agricultural Science and Technology Press.]

謝紅輝. 2010. 玉米小斑病菌生物學特性研究[J]. 廣西熱帶農(nóng)業(yè)，（6）：1-4. [Xie H H. 2010. Study on the biological cha-racteristics of Bipolaris maydis[J]. Guangxi Tropical Agriculture，（6）：1-4.]

楊麗敏. 2012. 影響玉米小斑病抗性鑒定的因子分析及病菌生物學特性研究[D]. 合肥：安微農(nóng)業(yè)大學. [Yang L M. 2012. Impact factor of resistance identification to slb and the biological characteristics of pathogenic fungi[D]. Hefei：Anhui Agricultural University.]

楊秀娟，陳福如，甘林，阮宏椿，杜宜新，石妞妞. 2018. 一種玉米小斑病菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用：中國，104962510B[P]. 2018-04-24. [Yang X J，Chen F R，Gan L，Ruan H C，Du Y X，Shi N N. 2018. The invention relates to a spore-producing culture medium of corn-spot bacteria and its preparation method and application：China，104962510B[P]. 2018-04-24.]

張立杰，張慧玲，哈礦武，王建設(shè). 2015. 甜瓜蔓枯病病原菌分離與分生孢子的產(chǎn)孢誘導(dǎo)[J]. 寧夏大學學報（自然科學版），36（4）：382-385. [Zhang L J，Zhang H L，Ha K W，Wang J S. 2015. Isolation and identification of pathogen of didymellabryoniae and spore production induction of condium[J]. Journal of Ningxia University（Natural Science Edition），36（4）：382-385.]

趙紅，王彩霞，陳曉忍，王海艷，李保華. 2012. 蘋果腐爛病菌誘導(dǎo)產(chǎn)孢方法[J]. 中國農(nóng)學通報，28（10）： 151-154.[Zhao H，Wang C X，Chen X R，Wang H Y，Li B H. 2012. Methods of promoting sporulation of Valsa ceratosperma[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin，28（10）：151-154.]

趙聚瑩，屈振剛，賈海民，陳丹，李術(shù)臣. 2010. 不同玉米品種對小斑病強致病力菌的抗病性檢測[J]. 河北農(nóng)業(yè)科學，14（9）：66-67. [Zhao J Y，Qu Z G，Jia H M，Chen D，Li S C. 2010. Detection of resistance of maize varieties to virulent strain of southern leaf blight[J]. Journal of Hebei Agricultural Sciences，14（9）：66-67.]

莊義慶，喬廣行，王源超，何東兵，鄭小波. 2008. 蕉斑鐮刀菌3-26菌株產(chǎn)孢條件研究[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學學報，31（4）：77-81. [Zhuang Y Q，Qiao G X，Wang Y C，He D B，Zheng X B. 2008. Conditions for mass production of Fusarium stoveri isolate 3-26 spore in liquid and solid culture[J]. Journal of Nanjing Agricultural University，31（4）：77-81.]

（責任編輯 麻小燕）