張春梅

[摘要]以“花葉”玉簪的組培苗為試材，研究了不同激素水平、基質(zhì)配方對(duì)“花葉”玉簪組培苗增殖、誘導(dǎo)生根及移栽成活率的影響。結(jié)果表明：1）“花葉”玉簪的最適增殖培養(yǎng)基為MS+3.0 mg/L 6-BA（6-芐基-氨基腺嘌呤）+0.1 mg/L NAA（萘乙酸）+0.4 mg/L ZT（玉米素），培養(yǎng)35 d后，其增殖倍數(shù)為3.0;2）“花葉”玉簪的最適生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L IBA（吲哚丁酸），培養(yǎng)25 d的生根率為86.66%;3）“花葉”玉簪組培苗移栽的最佳基質(zhì)配比是泥炭∶黃土∶珍珠巖=3∶1∶2，移栽兩個(gè)月后成活率為99%，鮮重為1.5 g/株，葉片數(shù)和根數(shù)為17片和13根及葉長(zhǎng)和根長(zhǎng)達(dá)到5.2 cm和10.2 cm。

[關(guān)鍵詞]激素;基質(zhì);“花葉”玉簪;組培苗

[中圖分類號(hào)]S 682.19[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A[文章編號(hào)]1005-0310（2019）03-0067-0

Abstract： In the paper， the effects of different hormones， media formula on the proliferous， root induction and survival rate of transplanting of Hosta undulate have been studied. The results showed that the best medium of tissue-culture seedlings for proliferation of Hosta was MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.4 mg/L ZT， and the proliferation multiples was 3.0 after 35 days; The most suitable rooting medium was 1/2MS+0.5 mg/L IBA and the highest rooting percentage was 86.66% after 25 days. Meanwhile， taking the quality of plantlets and economy into account，

Vpeat∶Vloess∶

Vperlite=3∶1∶2 was the optimal substrate for transplanting of tube plantlets of Hosta undulata， the survival rate was 99% after two months of transplanting， and the fresh mass was 1.5 g/plant， the number of leaves and roots was 17 and 13 and the length of leaf and root reached 5.2 cm and 10.2 cm.

Keywords： Hormones; Substrate; Hosta undulata; Tissue culture seeding

0引言

“花葉”玉簪（Hosta undulata），別名波葉玉簪，原產(chǎn)中國和日本，屬多年生宿根草本植物，國內(nèi)多認(rèn)定屬于百合科（Liliaceae），是一種比較流行的居室盆栽觀葉觀花類花卉，或在園林和庭院進(jìn)行露地栽培或盆栽，深受人們喜愛[1]。玉簪除具有較高的觀賞價(jià)值外，全株均可入藥，具有利濕、調(diào)經(jīng)止帶之功效，根入藥清熱消腫、解毒止痛，葉能解毒消腫。近年來，已成為極具開發(fā)前景和藥用價(jià)值的花卉[2]。

玉簪的繁殖方法通常采用種子繁殖、分株繁殖及組織培養(yǎng)繁殖，但玉簪從播種到開花至少需3年時(shí)間，且種子繁殖的后代不能保持親本的優(yōu)良性狀，因此，生產(chǎn)中一般不用其種子進(jìn)行繁殖[3-4]。分株繁殖是玉簪生產(chǎn)中的常用方法，但因其繁殖速度較慢，年增殖系數(shù)為3～4倍[5]，而且實(shí)生苗容易出現(xiàn)退化現(xiàn)象[6]，不能達(dá)到快速繁殖和大面積進(jìn)行種苗推廣應(yīng)用的要求。植物快速繁殖技術(shù)是植物組織培養(yǎng)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用最廣泛、產(chǎn)生經(jīng)濟(jì)效益最大的研究領(lǐng)域，近年來種植苗需求量較大，因此，必須利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行“花葉”玉簪繁殖。此技術(shù)繁殖花卉具有明顯優(yōu)勢(shì)：能高度保持遺傳性狀穩(wěn)定、繁殖系數(shù)高、生產(chǎn)周期很短、生產(chǎn)過程中占地面積小等，該技術(shù)在花卉植物生產(chǎn)中受到越來越多的重視。因此，本試驗(yàn)在前人的研究基礎(chǔ)上，對(duì)“花葉”玉簪增殖的激素配比、生根培養(yǎng)基與移栽的基質(zhì)配方進(jìn)行了優(yōu)化研究，篩選出合理高效的玉簪增殖激素配比、生根培養(yǎng)基和移栽基質(zhì)，并完善了移栽后的管理技術(shù)，為我國玉簪的組培工廠化育苗提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)地點(diǎn)、時(shí)間及材料

本試驗(yàn)于2017年2—6月在上海園藝大地種苗有限公司組培研究室進(jìn)行，材料為前期培養(yǎng)所獲得無病害、生長(zhǎng)健壯的“花葉”玉簪（Hosta undulata）的分化苗。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1不同激素配比對(duì)“花葉”玉簪組培苗增殖的影響以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加蔗糖30 g/L，瓊脂6 g/L，PH值為5.9。采用3因素3水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L9 （33） 方案（見表1），添加不同質(zhì)量濃度的6-BA

（2.0、3.0、4.0 mg/L）、NAA（0.1、0.2、0.3 mg/L）和ZT（0.3、0.4、0.5 mg/L）至MS培養(yǎng)基中，每處理接種10個(gè)外植體，3次重復(fù)，接種7 d觀察組培苗生長(zhǎng)情況，培養(yǎng)35 d后統(tǒng)計(jì)總芽數(shù)、增殖倍數(shù)、苗高及生長(zhǎng)狀況（培養(yǎng)條件白天為24 ℃、夜間為20 ℃左右，光照時(shí)間為13.5 h/d，光照強(qiáng)度為2 000? lx）。

1.2.2不同培養(yǎng)基對(duì)“花葉”玉簪組培苗生根的影響

切取生長(zhǎng)健壯的組培苗接種于添加不同質(zhì)量濃度生長(zhǎng)素NAA（0.1、0.5、1.0 mg/L）、IBA（0.1、0.5、1.0 mg/L） 的1/2 MS培養(yǎng)基上（大量元素減半，其他元素保持不變），每處理接種10個(gè)外植體，3次重復(fù)，培養(yǎng)25 d后統(tǒng)計(jì)生根情況，即接種苗數(shù)、生根株數(shù)、生根率、平均根長(zhǎng)、生長(zhǎng)狀況（培養(yǎng)條件白天24 ℃、夜間20 ℃左右，光照時(shí)間為13.5 h/d，光照強(qiáng)度為2 000? lx）。

1.2.3不同移栽基質(zhì)配方對(duì)“花葉”玉簪組培苗移栽成活率及生長(zhǎng)狀況的影響

1.2.3.1試驗(yàn)材料及設(shè)計(jì)

所選材料為前期所獲得的苗高達(dá)4～5 cm、長(zhǎng)勢(shì)均勻一致的健壯生根組培苗，每個(gè)處理36株苗，移栽定植于12孔的育苗盤中，選用泥炭、黃土和珍珠巖3種基質(zhì)，按各成分含量梯度不同設(shè)置8個(gè)處理組合（見表2），每12株（1個(gè)穴盤）為1個(gè)試驗(yàn)小區(qū)，重復(fù)3次。

1.2.3.2移栽前馴化、移栽及栽后管理

將3種基質(zhì)按設(shè)計(jì)的體積比混合均勻后采用百菌清、多菌靈混合消毒液消毒滅菌后，備用。將組培苗在培養(yǎng)室散射光下煉苗3 d，然后打開封口在溫室大棚內(nèi)鍛煉2 d，最后用鑷子將組培苗取出，洗凈根部瓊脂，去除枯黃葉并對(duì)組培苗根系進(jìn)行修剪整理，選取苗高和生根情況一致的苗移栽入裝有基質(zhì)的12孔育苗盤中，每穴定植1苗，定植水澆透。移栽后蓋上透明塑料袋套盒以保濕，生長(zhǎng)溫度控制在20～25 ℃左右，空氣濕度保持在60%～75%之間，光照強(qiáng)度為1 200 lx。移栽2個(gè)月后，統(tǒng)計(jì)成活率及移栽幼苗生長(zhǎng)情況（鮮重、葉片數(shù)、葉長(zhǎng)、根數(shù)和根長(zhǎng)）。

2結(jié)果與分析

2.1不同激素配比對(duì)“花葉”玉簪組培苗增殖的影響

“花葉”玉簪不定芽接種12～14 d后，基部腋芽開始萌動(dòng)而產(chǎn)生突起。由表3可知，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)腋芽不同程度增長(zhǎng)，30～35 d后腋芽大小及增殖倍數(shù)存在差異。“花葉”玉簪在添加質(zhì)量濃度為3.0 mg/L的6-BA、0.1 mg/L的NAA和較高質(zhì)量濃度（0.4 mg/L和0.5 mg/L）ZT培養(yǎng)基中的芽增殖總數(shù)較多，即處理4和處理5的芽增殖較多，分別為30個(gè)和28個(gè)，且與其他處理差異顯著，植株長(zhǎng)勢(shì)良好，最高增殖倍數(shù)為3.0。6-BA的質(zhì)量濃度過高時(shí)，“花葉”玉簪的生長(zhǎng)狀況較差，苗高降低，葉片顏色較淡，添加低質(zhì)量濃度6-BA處理的苗高呈上升趨勢(shì)，植株生長(zhǎng)健壯，葉片濃綠。結(jié)果表明，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加低質(zhì)量濃度6-BA有利于組培苗生長(zhǎng)。

2.2不同培養(yǎng)基配方對(duì)“花葉”玉簪組培苗生根的影響

由表4看出，一定質(zhì)量濃度的IBA對(duì)“花葉”玉簪生根有明顯影響，1/2MS培養(yǎng)基添加不同質(zhì)量濃度的IBA和NAA均能促進(jìn)“花葉”玉簪組培苗生根。IBA質(zhì)量濃度為0.5 mg/L，培養(yǎng)25 d的生根率最高，為86.66%，與其他處理的生根率差異顯著;根長(zhǎng)1.5 cm左右，植株生長(zhǎng)健壯，葉片濃綠。添加NAA的生根效果較差，添加高質(zhì)量濃度NAA的培養(yǎng)基中，植株幾乎不生根，且組培苗長(zhǎng)勢(shì)差，葉片發(fā)黃，質(zhì)量濃度為0.1 mg/L NAA 的玉簪生根率僅為20.00%，根粗短。

2.3移栽基質(zhì)配方對(duì)玉簪苗移栽成活率及生長(zhǎng)狀況的影響

通過比較分析表5中幼苗在不同基質(zhì)中移栽成活率和鮮重，組培苗移栽60 d后，只在處理1、2和5中發(fā)現(xiàn)了死亡植株，在其他處理中移栽成活率均為99%;處理8中幼苗的鮮重最大，明顯優(yōu)于其他處理，泥炭對(duì)花葉玉簪移栽成活率有顯著促進(jìn)作用，黃土則顯著降低其移栽成活率;對(duì)幼苗在不同基質(zhì)中葉片數(shù)和葉長(zhǎng)比較分析發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)對(duì)葉片數(shù)和葉長(zhǎng)均有影響。處理8中幼苗生長(zhǎng)情況明顯優(yōu)于其他處理，前者葉片數(shù)和葉長(zhǎng)分別不少于17.34片和4.84 cm;對(duì)幼苗在不同基質(zhì)中根數(shù)和根長(zhǎng)比較分析發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)對(duì)幼苗根數(shù)和根長(zhǎng)的影響較為明顯。在根數(shù)方面，處理8的平均根數(shù)為13.11，與處理2差異顯著;在根長(zhǎng)方面，處理1、3和8顯著大于處理2、5和7。見表6所示。

3討論與結(jié)論

近年來，玉簪屬植物的組織培養(yǎng)研究主要圍繞尋找組織培養(yǎng)最佳條件、降低生產(chǎn)成本和縮短生產(chǎn)周期等方面。

3.1不同激素配比對(duì)“花葉”玉簪組培苗增殖的影響

在植物組織培養(yǎng)過程中，因種類、組合及使用濃度的差別，激素會(huì)發(fā)揮不同效應(yīng)。有學(xué)者認(rèn)為，6-BA促進(jìn)分化、芽形成及誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生，抑制根發(fā)育及衰老，6-BA 與NAA 配合使用，能有效促進(jìn)芽增殖與根誘導(dǎo)[7]。ZT的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞分裂，延緩組織衰老，增加蛋白質(zhì)合成，抑制頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)側(cè)芽生長(zhǎng)[8]，但關(guān)于激素的最適劑量，并不統(tǒng)一。本試驗(yàn)結(jié)果表明，最適合“花葉”玉簪增殖的培養(yǎng)基為MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.4 mg/L ZT，培養(yǎng)35 d的增殖倍數(shù)為3.0，苗生長(zhǎng)良好，葉色濃綠，這與王春婷等（2006）[3]的研究結(jié)果不一致。品種為“法蘭西”與“甜心”的玉簪增殖芽分化效果最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L[9]，可能是由于不同基因型的培養(yǎng)材料在增殖過程中所需的激素濃度不同。本試驗(yàn)說明培養(yǎng)基中添加一定比例的6-BA、ZT和NAA，能有效促進(jìn)“花葉”玉簪不定芽的分化。培養(yǎng)基內(nèi)添加一定量的NAA，啟動(dòng)率會(huì)隨著6-BA質(zhì)量濃度的增加而升高，這與胡相偉[10]的觀點(diǎn)一致。除6-BA、NAA 外，2，4-D、KT也具有刺激植物生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞分裂的作用，但目前未見有用在玉簪組織培養(yǎng)中的報(bào)道[10]。

3.2不同培養(yǎng)基配方對(duì)“花葉”玉簪組培苗生根的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著NAA的質(zhì)量濃度增大，“花葉”玉簪組培苗幾乎不生根，且生長(zhǎng)狀況變差，葉片發(fā)黃，質(zhì)量濃度為0.1 mg/L NAA 的玉簪生根率僅為20.00%，根粗短，說明NAA不適合“花葉”玉簪組培苗生根，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加低質(zhì)量濃度IBA根多而粗，淡黃色，植株生長(zhǎng)健壯，可作為生根壯苗培養(yǎng)基，最適宜生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L IBA，培養(yǎng)25 d的生根率為86.66%，植株生長(zhǎng)健壯，葉色濃綠。與周青等（2005）的研究結(jié)果一致[7]，與馮慧等（2006）[5]、郝硯英等（2006）[11]和陳必勝等（2007）[12]研究得出IBA和NAA均能誘導(dǎo)玉簪生根的結(jié)果有一定差異，可能與品種不同有關(guān)。

3.3移栽基質(zhì)配方對(duì)“花葉”玉簪苗移栽成活率及生長(zhǎng)狀況的影響

組培苗移栽是整個(gè)組培生產(chǎn)中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，移栽基質(zhì)為幼苗提供水、氣、肥等根系環(huán)境，基質(zhì)性狀的優(yōu)劣直接影響組培苗的移栽成活率和后期生長(zhǎng)，移栽基質(zhì)的篩選是確保瓶苗移栽成活和幼苗生長(zhǎng)的重要因素之一。玉簪喜陰濕環(huán)境，要求土層深厚、肥沃濕潤且排水良好的沙質(zhì)土壤[13]，富含腐殖質(zhì)的泥炭能夠促進(jìn)玉簪移栽成活以及后期玉簪根系和地上部分的生長(zhǎng)[14]，而在基質(zhì)中添加適量的珍珠巖能夠在一定程度上改善土壤保水能力及通氣條件[15]，同時(shí)，珍珠巖保肥能力不足則不利于后期葉片和根系的生長(zhǎng)，而黃土透氣性差，根系易腐爛，嚴(yán)重影響移栽成活和葉片的生長(zhǎng)，但吸水性和保水性強(qiáng)，有利于后期根的生長(zhǎng)[16]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，最適宜玉簪組培苗移栽的基質(zhì)為泥炭∶黃土∶珍珠巖=3∶1∶2，這可能與基質(zhì)的化學(xué)成分及理化性質(zhì)不同有關(guān)。珍珠巖有利于移栽成活，但不利于后期葉片和根系的生長(zhǎng)，泥炭促進(jìn)玉簪移栽成活和生長(zhǎng)，而黃土嚴(yán)重影響移栽生根成活和葉片的生長(zhǎng)，但有利于后期根的生長(zhǎng)。由本試驗(yàn)結(jié)果得出，花葉玉簪移栽基質(zhì)的透氣性與保水性是移栽成活率較高的關(guān)鍵因素。

綜上所述，“花葉”玉簪的最適增殖培養(yǎng)基為MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.4 mg/L ZT，培養(yǎng)35 d后，其增殖倍數(shù)為3.0;“花葉”玉簪的最適生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L IBA，培養(yǎng)25 d的生根率為86.66%;“花葉”玉簪組培苗移栽的最佳基質(zhì)配比是泥炭∶黃土∶珍珠巖=3∶1∶2，移栽兩個(gè)月后成活率為99%，鮮重為1.5 g/株，葉片數(shù)和根數(shù)為17片和13根及葉長(zhǎng)和根長(zhǎng)達(dá)到5.2 cm和10.2 cm。

玉簪品種繁多，在同時(shí)進(jìn)行的其他品種玉簪的組織培養(yǎng)研究中，發(fā)現(xiàn)激素影響和培養(yǎng)基種類還有較大差異，有待進(jìn)一步的對(duì)比研究。

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（責(zé)任編輯李亞青）