隋利強1 黃婷婷1 曹冬英1 吳冬梅1 李 丹2

1.福建中醫(yī)藥大學，福建 福州 350122；2.福州市中醫(yī)院，福建 福州 350001

“三子養(yǎng)親湯”出自明代《韓氏醫(yī)通》，是臨床常用方劑，該方由紫蘇子、芥子、萊菔子組成，用于咳嗽喘逆、痰多胸痞、食少難消，舌苔白膩，脈細滑等癥，常用于治療老年慢性支氣管炎、咳嗽、肺炎等[1-5]。三子養(yǎng)親湯原方用法為方中三藥微炒、搗碎后入湯劑煎服，但實際使用過程中有用生飲片組方使用的情況。方中的白芥子生用辛散力強，善于通絡止痛，炒后能緩和辛散走竄之性，避免耗氣傷陰，長于順氣豁痰。紫蘇子生品多用于腸燥便秘，炒后辛散之性緩和，更宜于風寒喘咳。萊菔子生升熟降，生用能升能散，長于涌吐風痰，炒后緩和了涌吐痰涎的副作用，突出了消食除脹、降氣化痰的作用。前期實驗中觀察到三子養(yǎng)親湯分別以生、炒飲片組方后氣味差異明顯，推測該變化可能與揮發(fā)性成分的變化有關，而三子養(yǎng)親湯揮發(fā)性成分分析未見文獻報道。研究通過比較三子養(yǎng)親湯分別以生、炒飲片組方后煎煮過程的揮發(fā)性成分差異，探討三子養(yǎng)親湯以炒制后的飲片入藥的合理性。

揮發(fā)油的提取常用水蒸氣蒸餾法、微波輔助萃取法以及超臨界流體萃取法等，但上述方法提取時間長，藥材用量也大。固相微萃取法適合于微量化合物的提取，且簡便、快捷，既可以保證樣品的重現(xiàn)性，又減少了樣品的用量[6-9]。本實驗嘗試運用頂空固相微萃取樣品揮發(fā)性成分，通過GC-MS分析，比較生、炒飲片組方的三子養(yǎng)親湯和方中單味藥炮制前后揮發(fā)性成分差異。

1 儀器與材料

1.1 儀器 HZ-HS-502N型電子天平(福州衡之展電子有限公司)、DFY-C-500型萬能高速分碎機(溫嶺市林大機械有限公司)、6890N型氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司)、5973型質譜儀(安捷倫科技有限公司)、SPME手動進樣柄、萃取纖維頭(65 μm PDMS/DVB)。

1.2 材料 萊菔子、芥子和紫蘇子經福建中醫(yī)藥大學車蘇容副教授鑒定，分別為十字花科植物蘿卜RaphanussativusL.的成熟種子、為十字花科植物白芥SinapisalbaL.的干燥成熟種子、紫蘇子為唇形科植物紫蘇Perillafrutescens(L.)Britt.的干燥成熟種子。

2 方法與結果

2.1 炮制品的制備[10]炒萊菔子：取凈萊菔子，置炒制容器內，文火炒至鼓起，質酥脆，斷面淺黃色，有香氣逸出。炒芥子：取凈芥子，置炒制容器內，文火炒至深黃色，有爆鳴聲，斷面淺黃色，有香辣氣。炒紫蘇子：取凈紫蘇子，置炒制容器內，文火炒至顏色加深，有爆鳴聲，斷面淺黃色，有氣。

2.2 揮發(fā)性成分提取 分別精密稱取生、制飲片組方的三子養(yǎng)親湯藥粉2.0 g于100 mL的頂空瓶中，加水20 mL迅速密封，浸泡20 min，將其放置在恒溫水浴的裝置中，將老化過的65 μmPDMS/DVB的固相微萃取插入到密封的頂空瓶中，推出萃取頭，90 ℃下頂空萃取40 min。將固相微萃取的裝置立即插入GC-MS的進樣口，于250 ℃下脫附5 min進行分析。萃取樣品前，萃取頭均應在250 ℃下老化10 min[11]。另外分別精密稱取生、炒萊菔子，生、炒芥子，生、炒紫蘇子粉末各2.0 g于100 mL的頂空瓶中，萃取方法同上。

2.3 GC-MS分析

2.3.1 GC-MS條件 DB-5MS石英彈性毛細管柱(30 m×0. 25 mm×0. 25 μm)，載氣為He，進樣口溫度250 ℃，不采用分流進樣，程序升溫：50 ℃的溫度保持1 min，再以2.5 ℃/min的速率升溫至210 ℃，保持5 min；柱流量1 mL/min，解析5 min。電離方式EI；電子能量70 Ev；離子源230 ℃；接口230 ℃；溶劑延遲時間為3.0 min；質量掃描范圍m/z 30～550。

2.3.2 GC-MS分析 按2.2.1項下方法分析收集的樣品的揮發(fā)性成分，通過GC-MS分析，各樣品揮發(fā)性成分總離子流圖(如圖1所示)。結合NIST Version1.7質譜數(shù)據(jù)庫檢索進行定性分析，將相似度在85%以上的化合物用峰面積的歸一法計算得其相對百分含量(見表1)。

表1 生、炒品飲片組方的三子養(yǎng)親湯及單味藥生、炒飲片揮發(fā)性成分測定結果

編號化合物相對含量分數(shù)/%生飲片組方 炒飲片組方萊菔子炒萊菔子芥子炒芥子蘇子炒蘇子1異硫氰酸環(huán)丙酯2.809---0.226-0.1212異硫氰酸烯丙酯80.09610.6490.238-88.90836.9107.7610.5663庚醛---0.423----4苯甲醛--0.489-----52-庚酮-------0.12262,5-二甲基吡嗪-------0.12071-乙酰環(huán)己烯-0.283-----0.1648(Z)-2-庚烯醛-3.147------92-庚烯醛-----1.794--105-甲基呋喃醛-------3.16011二甲基三硫0.1303.07612.4785.6420.0500.6900.226-122-正戊基呋喃-------3.337133-丁烯基異硫氰酸酯0.933---1.532---14(E)-2-庚烯醛---6.523----156-甲基-5-庚烯基-2-醇 --1.445-----16(E,E)-2,4-庚二烯醛-5.897-4.515-1.0180.8483.68617正辛醛-2.670-7.3110.1362.4061.142-18間異丙基甲苯0.052----0.162--19鄰異丙基甲苯-0.3600.701-----20對異丙基甲苯---0.086--0.1060.33521右旋萜二烯0.417-6.641-0.1081.3681.224-22雙戊烯-1.937-----0.80323芐醇--0.860-----243-辛烯-2-酮-0.512-0.4950.0220.5860.1923.904252-羥基苯甲醛-----0.041--26苯乙醛0.0620.6681.1190.223-0.2510.910-27反-2-辛烯醛-1.984-------28萜品烯--1.481-----292-庚炔---0.106----305-乙基-2-糠醛-------0.31131γ-己內酯------0.091-322-辛烯醛---5.360-1.1150.437-33異硫氰酸戊酯--2.675-----34甲酸辛酯-----1.900--

表1 生、炒品飲片組方的三子養(yǎng)親湯及單味藥生、炒飲片揮發(fā)性成分測定結果

續(xù)表1 表1 生、炒品飲片組方的三子養(yǎng)親湯及單味藥生、炒飲片揮發(fā)性成分測定結果

表1 生、炒品飲片組方的三子養(yǎng)親湯及單味藥生、炒飲片揮發(fā)性成分測定結果

通過GC-MS分析，三子養(yǎng)親湯及單味藥中揮發(fā)性成分主要為烷烴類、酯類、酮類等，其中異硫氰酸酯類成分為主要的揮發(fā)性成分在生芥子和生飲片組方中分別占到揮發(fā)性成分的88.9和80.1%。三子養(yǎng)親湯分別以生、炒飲片組方后，共檢測到揮發(fā)性成分60種，生飲片組方獨有的成分13種，炒制飲片組方獨有成分30種，兩者共有成分16種。生、炒萊菔子共檢測到揮發(fā)性成分73種，生萊菔子獨有的成分20種，炒萊菔子獨有成分35種，兩者共有成分19種。生、炒芥子共檢測到揮發(fā)性成分69種，生芥子獨有的成分13種，炒芥子獨有成分29種，兩者共有成分23種。生、炒紫蘇子共檢測到揮發(fā)性成分67種，生紫蘇子獨有的成分22種，炒紫蘇子獨有成分21種，兩者共有成分24種。

三子養(yǎng)親湯以生、炒飲片組方后揮發(fā)性成分差異明顯，尤其是異硫氰酸環(huán)丙酯、異硫氰酸烯丙酯等異硫氰酸酯類成分相對含量明顯降低。如三子養(yǎng)親湯生、炒飲片組方的異硫氰酸烯丙酯含量分別為80.1% 和10.6%，生、炒芥子異硫氰酸烯丙酯含量分別為88.9% 和36.9%。萊菔子、紫蘇子炮制前后的異硫氰酸酯類物質也存在同樣的變化趨勢。異硫氰酸酯類物質系由硫代葡萄糖苷酶解產生的次生產物，具有抗癌、抑制微生物生長等藥理活性，但過量對胃產生刺激或致嘔作用，炒制可殺酶保苷，抑制硫代葡萄糖苷類成分酶解，部分地消除了對胃腸道刺激和致嘔的副作用[12]。

3 討論

α-側柏酮為炒制飲片組方的三子養(yǎng)親湯特有成分，相對含量為24.6%，生飲片組方未檢測到該成分。側柏酮能增強脾細胞和胸腺細胞增殖、增強細胞因子(如白介素-2、干擾素-γ) 的作用，具有一定的抗腫瘤能力[13]。故推測三子養(yǎng)親湯以炒制飲片組方在一定程度上增強患者免疫能力，起到扶正祛邪的作用。

三子養(yǎng)親湯生、炒飲片組方所檢測到的揮發(fā)性成分與方中單味藥生、炒飲片的揮發(fā)性成分大部分相同，但也有部分化合物存在差異。如炒制飲片組方合煎過程檢測到的β-律草烯、2-丁基-2-辛烯醛、2,5-二甲基-3-乙基吡嗪、反-2-辛烯醛、2-庚烯醛等成分在三藥單煎過程中未檢測到，生飲片組方合煎過程檢測到的異硫氰酸苯乙酯、二十四烷、4-仲丁基-2,6-二叔丁基苯酚等成分在三藥單煎過程中未檢測到。炒萊菔子中的4-仲丁基苯酚、4-甲基十三烷、反式-2-癸烯醛、正戊基2-呋喃酮、二十八烷等成分、炒芥子中的薄荷酮等成分，在炒品飲片組方的三子養(yǎng)親湯中也未檢測到，推測三子養(yǎng)親湯單煎與合煎的化學成分存在差異。

對三子養(yǎng)親湯分別用生、炒飲片組方后的揮發(fā)性成分進行了比較分析，結果顯示，生、炒飲片組方的三子養(yǎng)親湯揮發(fā)性成分差異明顯，方中藥物單煎與合煎后揮發(fā)性成分也存在差異，但單煎與合煎的差異成分與藥效相關性有待于進一步研究。由于本次實驗所用毛細管內部涂層和萃取纖維頭的選擇性，所測化合物數(shù)量和種類只能檢測大部分三子養(yǎng)親湯及單味藥的揮發(fā)性成分，少數(shù)化合物在該萃取條件和檢測條件下無法測得。該結果可為三子養(yǎng)親湯的進一步研究，尤其是單煎與合煎的差異分析提供參考。后期實驗可結合LC-MS等方法對生、炒飲片組方的三子養(yǎng)親湯中的成分變化做進一步相對全面的分析，另外，可結合藥效學實驗和藥效成分分析結果對三子養(yǎng)親湯單煎與合煎差異性進行更深入的探討。

目前，臨床中藥配方顆粒應用較為廣泛，配方顆粒有其自身優(yōu)勢，如攜帶、服用方便等，但是對于某些單煎與合煎存在差異的方劑如三子養(yǎng)親湯則應該按傳統(tǒng)用法合煎服用或制備復方的配方顆粒。