李曉英 方文△ 楊梅 游云 楊玉濤 葛正行 尹超 夏志鴻 張航

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，貴州 貴陽 550001；2.貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550001；3.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，貴州 貴陽 550001；4.蘭州市第一人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000)

目前肺癌的5年生存率約為15%，是全球最常見的癌癥相關(guān)致死疾病之一，非小細(xì)胞肺癌作為肺癌最常見的一種類型，約占所有肺癌發(fā)病率的80%[1-2]，積極探索尋找針對(duì)非小細(xì)胞肺癌的腫瘤標(biāo)志物及治療作用靶點(diǎn)成為主要研究方向。黑色素瘤相關(guān)抗原MAGE-D4(Melanoma-associated antigen D4)作為MAGE家族中較新發(fā)現(xiàn)的一種新成員，目前其已在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及腦膜瘤等部分腫瘤中發(fā)現(xiàn)處于高表達(dá)狀態(tài)，同時(shí)由于已發(fā)現(xiàn)MAGE基因能編碼部分抗原肽而激活免疫細(xì)胞使其殺傷腫瘤細(xì)胞，故MAGE部分成員成為理想的腫瘤治療靶點(diǎn)[3]。本次試驗(yàn)希望通過對(duì)非小細(xì)胞肺癌中MAGE-D4的表達(dá)情況的研究能初步闡述非小細(xì)胞肺癌與MAGE-D4的發(fā)病關(guān)系，為MAGE-D4可能作為臨床治療的靶點(diǎn)提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 30例非小細(xì)胞肺癌及其癌旁組織收集自貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，且所有病例均已由病理科專業(yè)醫(yī)師確診為非小細(xì)胞肺癌，并獲得患者的知情同意及院倫理委員會(huì)同意。

1.2主要儀器及試劑 普朗DNM-9606酶標(biāo)分析儀(北京普朗新技術(shù)有限公司)；Human MAGED4-Ab ELISA試劑盒(武漢江萊生物科技有限公司，批號(hào)：)兔抗MAGE-D4抗體購自美國SANTA CRUZ公司；辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗鼠二抗購自北京中杉生物技術(shù)有限公司；免疫組化其他相關(guān)試劑購自北京中杉生物技術(shù)有限公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3方法 酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(ELISA)，免疫組織化學(xué)技術(shù)，具體測(cè)定方法嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1ELISA檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌及癌旁組織中MAGE-D4的表達(dá)情況 ELISA結(jié)果顯示，非小細(xì)胞肺癌組中MAGE-D4(24.51±8.23) ng/mL的相對(duì)表達(dá)量與癌旁組織(1.33±0.31) ng/mL相比較，其在癌組織的表達(dá)水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見圖1。

2.2免疫組化中非小細(xì)胞肺癌及癌旁組織中MAGE-D4的表達(dá)水平 免疫組化結(jié)果顯示，非小細(xì)胞肺癌中MAGE-D4呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，與癌旁組織相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見圖2。

3 討 論

肺癌作為當(dāng)前全球影響人類健康的最危險(xiǎn)的惡性腫瘤之一，受到了廣泛關(guān)注，且不斷探索在傳統(tǒng)手術(shù)治療的基礎(chǔ)上尋找新的靶向治療藥物，同時(shí)為了響應(yīng)當(dāng)前精準(zhǔn)醫(yī)療的治療思想，尋找能早期發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物同樣具有積極的意義。目前黑色素瘤相關(guān)抗原MAGE-D4有報(bào)道與部分腫瘤的發(fā)生有一定聯(lián)系，但與肺癌的相關(guān)研究甚少，因此本次研究通過檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌中MAGE-D4的表達(dá)情況初步闡明MAGE-D4與非小細(xì)胞肺癌的相互關(guān)系，結(jié)果證實(shí)MAGE-D4確實(shí)與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病有關(guān)。

MAGE是一個(gè)包含有眾多亞基的大家族，其中MAGE-D4最初被命名為MAGE-E1[4]，當(dāng)前對(duì)MAGE-D4的研究更多的局限于mRNA水平，但也有部分報(bào)道其與食管癌、乳腺癌、肝癌及神經(jīng)膠質(zhì)瘤等相關(guān)腫瘤的增殖、遷移相關(guān)[5-7]。此外，據(jù)報(bào)道[8-9]，MAGE-D4的mRNA的比例小于蛋白質(zhì)水平，分析認(rèn)為這可能與mRNA轉(zhuǎn)錄后修飾、蛋白酶體降解等有關(guān)，但這一影響決定了在蛋白水平研究MAGE-D4的表達(dá)比在mRNA水平上研究要更準(zhǔn)確，因此免疫組化及ELISA等蛋白研究技術(shù)也是被更多人所運(yùn)用。研究[10]顯示，在非小細(xì)胞肺癌的鱗狀細(xì)胞癌中的MAGE-D4比腺癌表達(dá)稍高，MAGE-D4總體上是促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌的增殖，但其在遠(yuǎn)期預(yù)后各階段的表達(dá)差異不明顯。這一結(jié)論與本次研究的結(jié)果基本一致，這也進(jìn)一步說明MAGE-D4參與了非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病過程。

由于本次研究只是一項(xiàng)初步的探索與驗(yàn)證，未來還可以在條件允許的情況下增加病例數(shù)量，進(jìn)一步探索完善MAGE-D4在非小細(xì)胞肺癌中的具體功能作用和相作用的生物活性分子，尋找其潛在的分子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，進(jìn)一步完善并報(bào)道MAGE-D4與非小細(xì)胞肺癌的相互關(guān)系。

(本文圖1～2見封三)