成克倫 姜森 成鑫 胡國梅

1 貴州航天醫(yī)院病理科 （貴州 遵義 563000）

2 貴州航天醫(yī)院檢驗(yàn)科 （貴州 遵義 563000）

3 遵義市第一人民醫(yī)院病理科 （貴州 遵義 563002）

內(nèi)容提要： 目的：探討國產(chǎn)派斯杰RS36型自動染色機(jī)在石蠟切片蘇木精-伊紅（Hematoxylin-Eosin，HE）染色和液基細(xì)胞學(xué)（Thinprep Cytologic Test，TCT)巴氏（Papanicolaou）染色中的應(yīng)用及效果，為自動染色技術(shù)的運(yùn)用積累經(jīng)驗(yàn)。方法：參考該機(jī)型提供的全自動染色參考程序，根據(jù)染色效果，經(jīng)過多次調(diào)試，對原程序進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整和改進(jìn)，編寫適用于本科室的新程序。結(jié)果：染色效果有了進(jìn)一步改善，對比度和清潔度提高。結(jié)論：派斯杰RS36型自動染色機(jī)能滿足病理科日常染色工作的需要，適當(dāng)?shù)某绦蚋倪M(jìn)，能提高染色質(zhì)量。

自動染色機(jī)以其穩(wěn)定的染色效果，近年來逐漸在病理科普及。本科室使用的機(jī)型是國產(chǎn)派斯杰RS36型，在染色過程中，根據(jù)國內(nèi)試劑標(biāo)準(zhǔn)和工作環(huán)境，進(jìn)行了適當(dāng)改進(jìn)，摸索出了新的染色程序，效果有所改觀，現(xiàn)將應(yīng)用體會及程序改進(jìn)總結(jié)如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

儀器與設(shè)備：常州派斯杰醫(yī)療設(shè)備有限公司生產(chǎn)的派斯杰RS36型自動染色機(jī)、通風(fēng)柜。

試劑：二甲苯、梯度酒精、無水乙醇、蘇木素染液、1%鹽酸酒精分化液、水溶性伊紅染液、橙黃G、EA50。

1.2 方法

石蠟切片和TCT細(xì)胞涂片，烘烤后放入染色機(jī)，進(jìn)入各自自動染色程序，流程改進(jìn)見表1、表2。常規(guī)HE染色程序耗時30min6s，巴氏染色程序耗時30min1s。

2.結(jié)果

HE和巴氏染色，組織及細(xì)胞色彩鮮艷、均勻，各種顏色著色適度，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)層次分明，對比度好，形態(tài)清晰，結(jié)構(gòu)完整，背景干凈無污染，每批染色結(jié)果穩(wěn)定一致，優(yōu)良率在95%以上。

3.討論

全自動染色機(jī)以自動化的優(yōu)點(diǎn)已在許多病理實(shí)驗(yàn)室普及使用，逐漸替代了手工操作，有以下優(yōu)點(diǎn)[1,2]：①工作效率提高：可同時進(jìn)行多批量染色，運(yùn)行后，不再需要人員操作，提高了工作效率，減輕了勞動強(qiáng)度。②質(zhì)量穩(wěn)定：各步驟由電腦程序控制，在相同的程序下染色結(jié)果較穩(wěn)定，避免了人工染色所造成的不同批次片子的染色差異。同時把病理技術(shù)人員從繁瑣的人工染色中解脫出來，也推動了染色的標(biāo)準(zhǔn)化。派斯杰RS36型自動染色機(jī)具有三排共36個染色缸，26個試劑站點(diǎn)，上載站點(diǎn)2個，下載站點(diǎn)3個，5個水洗站點(diǎn)，3個加熱站點(diǎn)，10套染色程序，每次可染30張玻片，每小時染片量在400～600張左右，可以滿足病理科日常染色工作的需要。在使用過程中做了一些改進(jìn)，對步驟和試劑設(shè)定時間進(jìn)行了適當(dāng)個性化調(diào)整，并增加了2缸空缸停留，2缸循環(huán)運(yùn)行，染色效果有進(jìn)一步改善。

表1. HE自動染色流程

表2. 巴氏自動染色流程

在實(shí)際工作中，體會到要注意以下幾點(diǎn)：①蘇木素、伊紅、橙黃G和EA50主要染液，根據(jù)染色效果的降低適時更換，一般染片量在2000張左右應(yīng)予考慮。②其他試劑根據(jù)有無雜質(zhì)、沉淀、渾濁、污染、清潔度以及整體染色質(zhì)量進(jìn)行更換，一般1個月左右更換1次。③更換試劑時，倒出試劑后要用自來水沖洗試劑缸，擦干凈，涼干后再倒入新的試劑。④至少每周檢查一次試劑量，染色量大時，要隨時觀察，補(bǔ)足蒸發(fā)的試劑量，每次更換做好記錄，尤其是對沒有試劑更換提醒的機(jī)型更要注意。⑤由于環(huán)境溫度或染液濃度降低等因素，有時要對程序進(jìn)行微調(diào)，需要關(guān)機(jī)重新啟程，新程序才生效。有的染色機(jī)采用AAT智慧自適應(yīng)自動變速控制系統(tǒng)，染液濃度下降后，每隔一定時間段，能自動增加某一染液的染色時間[3]。⑥為保證質(zhì)量，每次染色前試染一張。對于小組織或某些實(shí)質(zhì)細(xì)胞致密組織，伊紅染色可能過淡，可編輯單獨(dú)的程序進(jìn)行染色，增加伊紅染色時間或濃度，或用易著色的鹽酸化伊紅溶液[4]。⑦染色機(jī)最好放在通風(fēng)柜內(nèi)，避免染劑揮發(fā)污染室內(nèi)空氣。⑧室溫過低時，開啟加熱功能，以防止脫苯不干凈不利于水化，造成切片染色模糊或局部不著色。二甲苯可用無味環(huán)保透明劑替換，但需適當(dāng)增加脫蠟時間。⑨石蠟切片和TCT細(xì)胞涂片染色時，試劑缸要分開設(shè)置不能混用，避免細(xì)胞涂片上的細(xì)胞脫落污染石蠟切片。

RS36型自動染色機(jī)提起染色架后沒有暫停功能，玻片上殘余試劑易滴入其他試劑缸造成污染，在主要染液蘇木素、伊紅、橙黃G和EA50鄰近缸設(shè)置了2s左右的空缸停留，彌補(bǔ)了這一不足。該機(jī)型染色中不能上下抖缸，可在最后脫水的兩缸無水乙醇中，設(shè)置幾次循環(huán)運(yùn)行，這樣能提高玻片的清潔度。

自動染色機(jī)染色，是一項多步驟、多環(huán)節(jié)的染色技術(shù)，其結(jié)果受若干因素的影響，雖然技術(shù)日趨成熟，仍然需要不斷改進(jìn)、創(chuàng)新，力求高質(zhì)量染色效果，為疾病的正確診斷提供有效的保障[5]。