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      關(guān)于兩種伊紅染液在HE 染色中的選擇探討

      2020-12-10 04:47:46何璋海
      關(guān)鍵詞:伊紅冰醋酸蘇木

      何璋海

      (中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院,廣東 廣州)

      0 引言

      蘇木精-伊紅染色法,簡稱HE 染色,業(yè)界最常用的一種組織學(xué)染色法,E 代表Eosin,伊紅,作用是顯示細胞漿、肌纖維、膠原纖維、嗜酸性顆粒、紅細胞等組織呈現(xiàn)不同程度的紅色或粉紅色,與胞核染料蘇木精在色澤上形成鮮明的紅藍對比,從而清晰的顯示出組織與細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)[1]。但實際工作中,使用醇溶性伊紅進行染色,胞漿、肌纖維等結(jié)締組織容易出現(xiàn)伊紅過染或者染色不均的現(xiàn)象,主要是由于其分化程度難以掌握,導(dǎo)致核漿對比模糊,而且它揮發(fā)性強,性價比不高,不太符合大批量HE 片的制作。針對存在的問題,我們用改良型水溶性伊紅液和醇溶性伊紅液進行對比染色,報道如下。

      1 材料與方法

      1.1 儀器

      德國Leica 公司的ST5020 全自動HE 染色機。

      1.2 試劑

      改良型Harris`蘇木素、0.5%改良型水溶性伊紅液、0.5%醇溶性伊紅液、1%鹽酸酒精、75%酒精、85%酒精、95%酒精、無水乙醇、苯酚二甲苯混合液[2]、二甲苯。

      1.3 試劑配制

      1.3.1 0.5%改良型水溶性伊紅液

      水溶性伊紅粉末 2.5g,將其溶于500mL 蒸餾水,充分溶解,過濾。臨用前 每440mL 水溶性伊紅液滴加240 微升冰醋酸,充分混勻。

      1.3.2 0.5%醇溶性伊紅液

      醇溶性伊紅粉末2.5g,溶于500mL95%酒精,充分溶解,過濾,臨用前每440mL 醇溶性伊紅液滴加4 滴(約40 微升)冰醋酸。

      1.3.3 改良型Harris`蘇木素

      將蘇木精5g 溶于50mL 無水乙醇,硫酸鋁鉀100g 溶于1000mL 蒸餾水中,煮沸溶解,然后將兩液均勻混合至染液呈淡紅色,繼續(xù)加熱煮沸后取出,待30s 后緩慢加入氧化汞,待染液呈深紫色立即置入冰水中,待冷卻至室溫后過濾[3]。臨用前每440mL 蘇木素添加15mL 冰醋酸,充分混勻。

      1.4 染色方法

      應(yīng)用我科的常規(guī)活檢組織切片分成A、B 兩組,置于70°c烤箱烤片20min,然后分別在全自動染色機上作HE 染色,但是兩種伊紅染液將設(shè)置不同的程序進行染色,如下:

      A 組:(1)二 甲 苯5min×2;(2)95% 酒 精5min×2;(3)85% 酒 精3min×1;(4)75% 酒 精1min×1;(5)自 來 水 洗30s×1;(6)改良型Harris` 蘇木素2min×1;(7)自來水洗5s×1;(8)1%鹽酸酒精3s×1;(9)自來水洗10min×1;(10)0.5%改良型水溶性伊紅50s×1;(11)自來水洗6s×1;(12)75% 酒 精3s×1;(13)85% 酒 精3s×1;(14)95% 酒 精5s×1;(15)苯酚二甲苯5min×2;(16)二甲苯2min×3。

      B 組:(1)二 甲 苯5min×2;(2)95% 酒 精5min×2;(3)85% 酒 精3min×1;(4)75% 酒 精1min×1;(5)自 來 水 洗30s×1;(6)改 良 型Harris` 蘇 木 素2min×1;(7)自 來 水 洗5s×1;(8)1%鹽酸酒精3s×1;(9)自來水洗10min×1;(10)0.5%醇溶性伊紅50s×1;(11)75%酒精3s×1;(12)85%酒精3s×1;(13)95%酒精5s×1;(14)苯酚二甲苯5min×2;(15)二甲苯2min×3。

      程序完成后,取出染片,用中性樹膠封片。

      2 實驗結(jié)果

      2.1 0.5%改良型水溶性伊紅液實驗組

      HE 染色結(jié)果顯示胞漿、肌纖維、膠原纖維及嗜酸性顆粒、紅細胞等組織呈現(xiàn)不同程度的紅色或粉紅色,顏色鮮艷,與藍色的細胞核對比清晰,層次分明。

      2.2 0.5%醇溶性伊紅液實驗組

      HE 染色結(jié)果顯示顏色稍微暗啞,部分染片伊紅著色不均,核漿對比不太清晰。

      圖1 0.5%醇溶性伊紅染色液 腸組織 10X0.25 倍鏡下圖

      圖2 0.5%水溶性伊紅染色液 腸組織 40X0.65 倍鏡下圖

      兩種伊紅染液的優(yōu)缺點對比情況

      3 討論

      通過實驗可以發(fā)現(xiàn)0.5%改良型水溶性伊紅液配制簡便,不易揮發(fā),著色速度快,染色時間容易控制,組織染色均勻,顏色鮮艷。而0.5%醇溶性伊紅液配制繁瑣,易揮發(fā),分化節(jié)點難控制,容易造成組織染色不均及顏色暗啞,這是歸因于染片前面經(jīng)過水洗藍化,水分或多或少帶到醇溶性伊紅這缸染液,隨著染片量的增多,濃度會不斷稀釋,加上后續(xù)的75%酒精、85% 酒精都會對其起到褪色作用,因此醇溶性伊紅液的分化程度會比水溶性伊紅難以掌握,還有它的揮發(fā)性強,每次染片前都需要補液,經(jīng)濟性上也比水溶性伊紅要差。對于制片工作量大的科室來說,尋找一種高效穩(wěn)定、性價比高的伊紅染液實屬必要,而我們對傳統(tǒng)型的水溶性伊紅作出改良配制,同樣可以制作出核漿對比清晰、紅藍色彩艷麗、層次分明的優(yōu)質(zhì)HE 片,縱觀伊紅液的染色原理得知其屬于酸性染料,在水中電離成帶負電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷結(jié)合而使胞質(zhì)染色,所以合理利用冰醋酸來調(diào)節(jié)伊紅液的PH 值更是胞漿染色是否艷麗的關(guān)鍵步驟,量不足,伊紅僅通過滲透或彌散作用,伊紅很難著色,而且與組織結(jié)合不牢固,分化后容易褪色;過量,則使染色體也發(fā)生電離導(dǎo)致其帶正電,造成核漿對比不清,另一方面也會抑制伊紅電離導(dǎo)致沉淀,染色失效[4]。

      總之,控制好添加冰醋酸的量,改善染色程序,同樣可以使廉價、配制簡單的水溶性伊紅做到高效地解決染色不均、核漿對比不清晰等問題,另外,隨著浸染式染色平臺在各家醫(yī)院病理科的推廣使用,因其成本相對低以及試劑開放等特點[5],在保證醫(yī)療質(zhì)量的同時還能提高效益性,特別適用于大批量機染的制作單位。

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