響應(yīng)面法的脂肪酶富集金槍魚(yú)油中二十二碳六烯酸甘油酯工藝優(yōu)化的研究

陳 瑩 Cheong LingZhi 趙家和 陳潔妙 乙叢敏 叢艷霞 李 曄 蘆晨陽(yáng) 周 君 蘇秀榕

(寧波大學(xué)食品與藥學(xué)學(xué)院1，寧波 315800)(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所2，武漢 430062)

金槍魚(yú)主要以生魚(yú)片、壽司、罐裝食品等方式被消費(fèi)，未被利用的副產(chǎn)物高達(dá)35%～40%，金槍魚(yú)油則是其中主要的副產(chǎn)物之一，如何對(duì)其進(jìn)行有效的綜合利用是當(dāng)前亟待解決的重要問(wèn)題之一[1-3]。研究發(fā)現(xiàn)，金槍魚(yú)油中含有一定量的ω-3系列脂肪酸——二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid, C22H32O2，DHA) ， DHA作為細(xì)胞膜形成的主要成分，在嬰幼兒的大腦和視力發(fā)育方面有著重要影響[4-8]。懷孕期間ω-3脂肪酸的缺乏與嬰兒的視覺(jué)和行為缺陷有關(guān)，這些缺陷無(wú)法通過(guò)產(chǎn)后補(bǔ)充來(lái)逆轉(zhuǎn)[4]。除此之外，ω-3脂肪酸還可以幫助降低早產(chǎn)率和或增加妊娠期[9-11]；在抗炎、提高機(jī)體免疫功能、抑制癌癥的產(chǎn)生與轉(zhuǎn)移方面也具有明顯的效果[12, 13]。

雖然人體中能夠通過(guò)α-亞麻酸合成DHA，但是合成速度緩慢，因此需要從食物中額外補(bǔ)充[4]。與游離脂肪酸和乙酯形式相比，?；视突蛄字问降纳攀矰HA不僅在氧化穩(wěn)定性方面表現(xiàn)更加優(yōu)異，也更加有利于人體內(nèi)的消化吸收[14, 15]。然而，由于?；视托问降奶烊唤饦岕~(yú)油中DHA的含量?jī)H20%左右[16]，難以滿足人們的需要，因此，選擇一種合適的方法富集金槍魚(yú)油中的DHA將具有重要意義。脂肪酶選擇性催化水解富集?；视托问降腄HA在實(shí)驗(yàn)和企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中都取得了不錯(cuò)的效果，這是由于ω-3多不飽和脂肪酸中的順式雙鍵的空間位阻和彎曲，使甲基基團(tuán)接近酯鍵，脂肪酶不能進(jìn)入和水解ω-3多不飽和脂肪酸的酯鍵[17]，在水解過(guò)程中產(chǎn)生的游離飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸可以通過(guò)皂化或分子蒸餾除去，從而產(chǎn)生富含ω-3 PUFA的酰基甘油餾分(包括甘油一酯，甘油二酯，甘油三酯)。酶法提取與傳統(tǒng)方法如分子蒸餾、尿素包合法等相比具有多種優(yōu)點(diǎn)，主要體現(xiàn)在酶催化反應(yīng)條件溫和，降低了DHA聚合、氧化等風(fēng)險(xiǎn)[18-25]；對(duì)底物選擇性高，減少了能源消耗，是一種重要的綠色可持續(xù)的富集方法[20, 21]。目前，脂肪酶水解富集ω-3脂肪酸也面臨一些瓶頸，主要包括反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)(>24 h)，富集水平(<40%)和?；视彤a(chǎn)率較低(<50%)[26, 27]。例如，Mbatia等人[26]使用Thermomyceslanuginosus脂肪酶反應(yīng)24 h，僅將尼羅河鱸魚(yú)內(nèi)臟油中的EPA和DHA濃度從12%提高到35%。因此，在尋找高選擇性脂肪酶，優(yōu)化和改造水解過(guò)程以獲得高產(chǎn)率的富含ω-3 PUFA的?；视图?jí)分方面，需要做更多的工作。

本研究利用皺褶假絲酵母脂肪酶選擇性水解法提高金槍魚(yú)油中DHA的含量，皺褶假絲酵母脂肪酶富集DHA的能力主要?dú)w因于脂肪酸選擇性，據(jù)報(bào)道，皺褶假絲酵母脂肪酶由用于識(shí)別底物鏈的L形隧道組成，該隧道非常適合油酸的空間要求，由于這個(gè)原因，皺褶假絲酵母脂肪酶對(duì)于廣泛的脂肪酸鏈長(zhǎng)度是非特異性的，但對(duì)長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸呈現(xiàn)低活性[28]。這保證了皺褶假絲酵母脂肪酶能夠有效富集?；视椭械腄HA。通過(guò)系統(tǒng)研究水解反應(yīng)條件(水油質(zhì)量比、脂肪酶添加量、水解溫度和時(shí)間)，獲得富集DHA甘油酯的最優(yōu)工藝，為實(shí)現(xiàn)DHA甘油酯產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

金槍魚(yú)油；皺褶假絲酵母脂肪酶；37種脂肪酸甲酯混標(biāo)；GF254薄層色譜硅膠；甲醇(95%)、乙醇、甲醇、氯仿、氫氧化鉀、酚酞、一水硫酸氫鈉、乙醚、正己烷、甲酸、碘均為分析純或色譜純。

1.2 儀器與設(shè)備

RO15多點(diǎn)磁力攪拌器；3A-401WP24恒溫水浴鍋；TDL5M離心機(jī)；EL204電子天平；Agilent7890A氣相色譜儀；M7-80EI質(zhì)譜儀。

1.3 方法

1.3.1 DHA甘油酯富集工藝

皺褶假絲酵母脂肪酶促魚(yú)油水解→水解產(chǎn)物皂化脫酸→薄層層析定性分析→酸價(jià)測(cè)定→DHA含量測(cè)定

1.3.1.1 皺褶假絲酵母脂肪酶水解反應(yīng)

按照水油質(zhì)量比例(2∶1、1∶2、1∶7、1∶15、1∶47)稱(chēng)取一定量魚(yú)油置入50 mL錐形瓶中，稱(chēng)取一定量皺褶假絲酵母脂肪酶(1%、3%、5%、7%)溶解在去離子水中，再將酶液轉(zhuǎn)移入錐形瓶(水油總質(zhì)量20 g)，充分混合均勻。將上述錐形瓶密封，置于一定溫度(30、40、50、60 ℃)的恒溫多點(diǎn)磁力攪拌器(轉(zhuǎn)速300 r/min)反應(yīng)一定的時(shí)間(0.5、1、2、4、6、10 h)。反應(yīng)結(jié)束后，將上述混合溶液95 ℃水浴10 min使脂肪酶滅活,然后在4 000 r/min條件下離心10 min,分離油相和水相。

1.3.1.2 水解產(chǎn)物皂化脫酸

根據(jù)前人方法進(jìn)行皂化過(guò)程以除去水解的游離脂肪酸[29]。取200 μL酶解后的油樣，加入2 mL去離子水、2 mL無(wú)水乙醇(溶解油樣，加速皂化過(guò)程)，1 mL 0.5 mol/L的氫氧化鉀-乙醇(皂化以除去游離脂肪酸)，混合均勻完成對(duì)油樣的脫酸皂化。然后用正己烷萃取溶液中的甘油酯成分。簡(jiǎn)而言之，向上述溶液中加入4 mL正己烷混合均勻，在3 000r/min條件下離心10 min。離心后，上層為含有甘油酯成分的正己烷，下層為脂肪酸鉀、乙醇等皂化液。取上清液至離心管中備用，下層再加入4 mL正己烷用相同方式萃取一次，合并兩次萃取得到的含有甘油酯的正己烷溶液。將上述正己烷溶液氮吹至恒重則得到富含DHA甘油酯的油樣。

1.3.1.3 薄層層析定性分析

取25 μL氮吹后的油樣溶解到100 μL的氯仿-甲醇(2∶1)中，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊2.0 cm。在層析缸中加入展開(kāi)劑，展開(kāi)劑為乙醚-正己烷-甲酸(60∶40∶1)。將載有樣品的薄層板置入層析缸中，上行展開(kāi)，自然晾干后，置碘蒸氣中顯色至斑點(diǎn)完全顯現(xiàn)。最后根據(jù)薄層層析結(jié)果判斷水解下來(lái)的脂肪酸和甘油酯是否分離。

1.3.1.4 酸價(jià)測(cè)定

參照GB 5009.229—2016《食品中酸價(jià)的測(cè)定》[30]進(jìn)行水解產(chǎn)物酸價(jià)的測(cè)定。將含有0.5 mL酚酞指示劑的50 mL乙醇溶液置入錐形瓶中，用0.1 mol/L的氫氧化鉀溶液滴定至溶液變色，并保持溶液15 s不褪色，即為終點(diǎn)。然后將中和后的乙醇溶液轉(zhuǎn)移至裝有一定量魚(yú)油樣品的錐形瓶中，充分混勻。用氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，滴定過(guò)程中要充分搖動(dòng)。至溶液顏色發(fā)生變化，并且保持15 s不褪色，即為滴定終點(diǎn)[25]。酸價(jià)計(jì)算公式：

X=C×(V-V0)×56.11/m

式中：X為試樣的酸價(jià)(以氫氧化鉀計(jì)/mg/g)；V為試樣消耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積/mL；C為氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的實(shí)際濃度/mol/L；V0為乙醇消耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積/mL；m為試樣質(zhì)量/g；56.11為氫氧化鉀的摩爾質(zhì)量/g/mol。

1.3.1.5 DHA含量測(cè)定

將金槍魚(yú)油甘油酯部分的脂肪酸甲基化并根據(jù)AOCS方法Ce-1c 89進(jìn)行分析[31]。簡(jiǎn)而言之，將100 mg油溶解在4 mL正己烷中，通過(guò)向油溶液中加入200 μL 0.5 mol/L氫氧化鈉甲醇溶液進(jìn)行甲基化，然后將混合物在室溫下攪拌2 min。最后，將上層有機(jī)層通過(guò)無(wú)水硫酸鈉柱過(guò)濾并回收到GC小瓶中，用正己烷稀釋10倍后進(jìn)行分析。

色譜柱：DB-WAX聚乙二醇?xì)庀嗝?xì)柱(60.0 m×250 μm×0.25 μm)，升溫程序：50 ℃保持1 min后，以25 ℃/min升至200 ℃，以3 ℃/min升至230 ℃保持15 min，再以3 ℃/min升至250 ℃；載氣(He)流速 1.0 mL/min，壓力 10 kPa，進(jìn)樣量1 μL；不分流模式。

1.3.1.6 甘油酯(包括甘油一酯，甘油二酯和甘油三酯)得率計(jì)算

1.3.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1.3.2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

以DHA富集和甘油酯得率為指標(biāo)，分別選取不同水解參數(shù)進(jìn)行研究，確定最適水油質(zhì)量比、脂肪酶添加量、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。

1.3.2.2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)

在響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取水油質(zhì)量比、脂肪酶添加量、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間4個(gè)因素為自變量，以DHA、ω-3含量和甘油酯得率為響應(yīng)值，根據(jù)box-behnken進(jìn)行響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 金槍魚(yú)油脂肪酸組成

金槍魚(yú)油脂肪酸組成見(jiàn)表1，金槍魚(yú)油中含有36.43%的飽和脂肪酸，24.63%的單不飽和脂肪酸以及38.94%的多不飽和脂肪酸。ω-3脂肪酸占比為30.70%，其中包括24.59%的DHA，5.6%的EPA以及少量的α-亞麻酸(0.51%)；相比于較高含量的ω-3脂肪酸，金槍魚(yú)油中的ω-6脂肪酸含量較低，只有3.09%；在飽和脂肪酸中，十六烷酸的含量最高(22.81%)，其次是十四烷酸(3.95%)；單不飽和脂肪酸中十八碳烯酸和十六碳烯酸的含量最高，分別達(dá)到15.49%和7.34%。

表1 金槍魚(yú)油脂肪酸組成

2.2 脂肪酶水解條件單因素實(shí)驗(yàn)

以DHA、ω-3含量和甘油酯得率為指標(biāo)，分別選取不同水解參數(shù)進(jìn)行研究，確定最適水∶油比、脂肪酶添加量、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。

2.2.1 水油質(zhì)量比對(duì)DHA、ω-3含量和甘油酯得率的影響

固定反應(yīng)溫度為40 ℃，脂肪酶:魚(yú)油比3%，水解時(shí)間為4 h，其他條件保持不變，控制水∶油比2∶1、1∶2、1∶7、1∶15和1∶47，比較水∶油比對(duì)富集效果的影響。水油質(zhì)量比例對(duì)富集效果的影響如圖1所示，在水∶油比1∶2時(shí)， DHA和ω-3含量最高，分別為40.26%和46.84%。DHA和ω-3的含量隨著水油質(zhì)量比例的增大而增大，水油質(zhì)量比達(dá)到1∶2后，甘油酯得率隨著水油質(zhì)量比例的增大而減小，水∶油比為1∶7時(shí)，水解反應(yīng)達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡。綜合考慮甘油酯中DHA的富集量和甘油酯得率，選取1∶7為最優(yōu)水油質(zhì)量比例。

圖1 水油質(zhì)量比例對(duì)富集效果的影響

2.2.2 脂肪酶添加量對(duì)DHA、ω-3含量和甘油酯得率的影響

脂肪酶添加量對(duì)富集效果的影響如圖2所示，脂肪酶的添加量對(duì)DHA和ω-3的富集量沒(méi)有顯著性的影響。當(dāng)酶添加量由魚(yú)油質(zhì)量的1%增加到5%時(shí)，甘油酯中的DHA和ω-3質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別保持在38%～40%和44%～46%。此外，甘油酯得率也不隨脂肪酶的添加量變化而趨于58%～60%，加酶量為5%時(shí)略有上升趨勢(shì)。結(jié)果表明，脂肪酶的添加量在魚(yú)油質(zhì)量的1%～5%范圍，酶量足夠，底物達(dá)到飽和，因此DHA、ω-3含量和甘油酯得率無(wú)明顯變化。當(dāng)酶量超過(guò)5%時(shí)，DHA和ω-3含量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，得率呈現(xiàn)上升狀態(tài)。反應(yīng)體系中加入較高的酶會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)混合物的不當(dāng)混合，從而促進(jìn)傳質(zhì)的限制。從成本角度出發(fā)考慮，脂肪酶價(jià)格昂貴，因此本試驗(yàn)選取1%魚(yú)油質(zhì)量為最優(yōu)加酶量。

圖2 脂肪酶添加量對(duì)富集效果的影響

2.2.3 溫度對(duì)DHA、ω-3含量和甘油酯得率的影響

DHA和ω-3含量在水解溫度為40 ℃時(shí)達(dá)到最高，分別為39.62%和45.93%。DHA和ω-3含量隨著溫度的升高而升高，達(dá)到40 ℃后，DHA和ω-3含量隨著溫度的升高而減少，溫度達(dá)到60℃時(shí)，DHA和ω-3的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別減少至34.36%和42.17%。得率在30%～50 ℃趨于58%～60%，50 ℃之后隨著溫度的升高而增大，60 ℃時(shí)得率達(dá)到66.79%。這與酶的性質(zhì)有關(guān)。低溫抑制酶的活性，酶催化作用受到限制，水解能力減弱，使得水解反應(yīng)不足以充分進(jìn)行，進(jìn)而導(dǎo)致DHA和ω-3含量偏低。在脂肪酶的最適溫度效應(yīng)達(dá)到最高，水解能力達(dá)到最強(qiáng)。隨著溫度的繼續(xù)升高，酶的活性受到限制，水解能力減弱，酸價(jià)降低，得率增高。因此選擇40 ℃為最佳水解溫度。溫度對(duì)富集效果的影響如圖3所示。

圖3 溫度對(duì)富集效果的影響

2.2.4 水解時(shí)間對(duì)DHA、ω-3含量和甘油酯得率的影響

水解時(shí)間對(duì)富集效果的影響如圖4所示，在水油質(zhì)量比例、脂肪酶添加量和溫度一定的條件下，DHA和ω-3含量無(wú)明顯變化，結(jié)果表明水解時(shí)間對(duì)結(jié)果影響不大，皺褶假絲酵母脂肪酶能夠在較短時(shí)間內(nèi)迅速水解脂肪酸組分，延長(zhǎng)水解時(shí)間對(duì)富集效果無(wú)太大貢獻(xiàn)。由圖可知，水解4 h獲得的DHA和ω-3含量稍高，因此選取4 h為最佳水解時(shí)間。

圖4 水解時(shí)間對(duì)富集效果的影響

2.3 Box-Behnken響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，使用design expert8.0.6軟件對(duì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)，對(duì)水油質(zhì)量比例、脂肪酶添加量、溫度和水解時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，以甘油酯中DHA含量及甘油酯得率為響應(yīng)值，設(shè)計(jì)四因素三水平響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，得出最優(yōu)水解條件并進(jìn)行驗(yàn)證分析。金槍魚(yú)油中DHA甘油酯的制備響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素水平表見(jiàn)表2。Box-Behnken設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 金槍魚(yú)油中DHA甘油酯的制備響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素水平表

表3 Box-Behnken設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

DHA回歸模型方差分析表見(jiàn)表4，DHA含量=-4.61+1.27A+1.11C+14.90D-0.01A2-0.09C2-5.04D2。DHA回歸模型的P值小于0.000 1， DHA模型影響顯著，說(shuō)明不同條件下所制備的富含DHA的甘油酯差異顯著。失擬項(xiàng)P值為0.352 7，遠(yuǎn)大于0.05，失擬項(xiàng)不顯著，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)得到的DHA模型選擇合適。各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響主次順序?yàn)镈>D2>A2>C2>A>C，顯然對(duì)DHA含量影響最大的是水油質(zhì)量比例，其次是溫度，最后是時(shí)間。水油質(zhì)量比例對(duì)結(jié)果的影響高度顯著(P<0.000 1)。P值大于0.05，溫度和水解時(shí)間對(duì)DHA含量影響不顯著，這與其他研究有所不同。溫度和水解時(shí)間對(duì)模型影響不顯著，但為維護(hù)模型的層次結(jié)構(gòu)不予以消除。

表4 DHA回歸模型的方差分析表

注：R2=0.883 2; AdjustedR2=0.851 3。

水油質(zhì)量比例與溫度及水解時(shí)間的交互作用對(duì)DHA含量的影響的響應(yīng)面圖如圖5-6所示。由圖5可知，當(dāng)溫度、水解時(shí)間和加酶量為定值時(shí)，DHA含量隨著水油比的增高呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)。最優(yōu)水油比落在0.81～1.21之間，水油比在0.81之前，DHA含量隨著水油比的增高而增加，水油比在1.21之后，DHA含量隨著水油比的增高而呈下降趨勢(shì)。這主要受兩方面影響，第一，酯水解過(guò)程可逆，水過(guò)少或過(guò)多都不利于反應(yīng)向水解方向進(jìn)行。第二，脂肪酶作用于油水兩相形成的微乳液，水過(guò)少時(shí)不能形成微乳液；水過(guò)多導(dǎo)致油水兩相形成的微乳液分層，脂肪酶作用的界面減小。由圖6可知，溫度的最優(yōu)范圍在42～48 ℃之間，且隨著溫度的升高，DHA含量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因是因?yàn)槊赣凶钸m溫度，溫度過(guò)低或過(guò)高都會(huì)使酶活性減弱，不利于反應(yīng)的進(jìn)行。

圖5 水油質(zhì)量比例和時(shí)間對(duì)富集DHA的影響響應(yīng)面圖

圖6 水油質(zhì)量比例和溫度對(duì)富集DHA的影響響應(yīng)面圖

得率回歸模型方差分析表見(jiàn)表5，甘油酯得率=118.12-0.09A-2.98B-8.02C-47.83D+0.06AC+0.30BC+0.22C2+15.63D2。得率回歸模型的P值小于0.000 1， DHA模型影響顯著，說(shuō)明不同條件下制備的富含DHA的甘油酯型魚(yú)油得率差異顯著。得率回歸模型的失擬項(xiàng)P值為0.059 6，略大于0.05，這表明了得率模型的失擬項(xiàng)不顯著，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)得到的得率模型選擇合適。表5結(jié)果顯示，各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響主次順序?yàn)镃>D>D2>B>C2>A>AC>BC，顯然對(duì)得率影響最大的是水解時(shí)間，其次是水油質(zhì)量比例，最后是脂肪酶添加量和溫度。四個(gè)自變量因素水解時(shí)間(P<0.000 1)，水油質(zhì)量比例(P<0.000 1)，脂肪酶添加量(P<0.05)，溫度(P<0.05)對(duì)甘油酯得率有顯著性的影響。其中水解時(shí)間和水油質(zhì)量比為高度顯著項(xiàng)。顯著因素交互作用的P值均大于0.05，表明各因素的交互作用對(duì)得率影響均不顯著。

表5 得率回歸模型的方差分析表

注：R2=0.942 5; AdjustedR2=0.919 4。

2.4 最優(yōu)水解條件確定與驗(yàn)證

經(jīng)過(guò)design expert軟件分析，綜合考慮選出的理論最優(yōu)水解條件為：溫度50 ℃、水解時(shí)間3 h、脂肪酶添加量為魚(yú)油質(zhì)量的1%和水油質(zhì)量比例為1∶1.7，采用公式擬合得到的預(yù)測(cè)值為DHA質(zhì)量分?jǐn)?shù)35.55%、ω-3質(zhì)量分?jǐn)?shù)42.25%、得率73.85%。經(jīng)過(guò)兩次平行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，實(shí)測(cè)值為 DHA含量36.58%，ω-3質(zhì)量分?jǐn)?shù)44.68%，得率63.78%，實(shí)測(cè)值和預(yù)測(cè)理論值接近，表明模型準(zhǔn)確。

3 結(jié)論

3.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，水油質(zhì)量比例對(duì)酶促反應(yīng)具有明顯影響，水油質(zhì)量比例為1∶2時(shí)，富集得到的DHA和ω-3含量均最高；脂肪酶添加量為魚(yú)油質(zhì)量的1%～5%時(shí)，DHA含量、ω-3含量和得率三者都保持穩(wěn)定；40 ℃時(shí)富集效果最佳；DHA和ω-3含量隨著水解時(shí)間的增加略有增加，得率隨水解時(shí)間的增加略有下降，變化幅度不大，延長(zhǎng)水解時(shí)間對(duì)增大反應(yīng)程度無(wú)太大作用。

3.2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)表明，各影響因素交互作用均不顯著，最優(yōu)水解條件為水油質(zhì)量比例1∶1.7、脂肪酶添加量為魚(yú)油質(zhì)量的1%、溫度50 ℃和水解時(shí)間3 h，在此條件下得到的預(yù)測(cè)值為：DHA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35.55%、ω-3質(zhì)量分?jǐn)?shù)為42.25%、得率73.85%。實(shí)測(cè)值：DHA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36.58%，ω-3質(zhì)量分?jǐn)?shù)為44.68%、得率63.78%，與理論預(yù)測(cè)結(jié)果接近。因此模型可以預(yù)測(cè)DHA、ω-3含量和甘油酯得率。