孫曉玲 王勍

摘 ?要：目的：探討分析HPLC-ELSD法測(cè)定化學(xué)藥物成鹽離子含量準(zhǔn)確性的影響因素。方法：選擇混合模式離子交換柱，應(yīng)用醋酸銨緩沖液-乙腈為流動(dòng)相，通過(guò)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。建立HPLC-ELSD法測(cè)定化學(xué)藥物成鹽離子含量測(cè)定模型，并且實(shí)施準(zhǔn)確度，精密度試驗(yàn)。結(jié)果：鈉離子濃度處于（1.83-76.37）μg/ml時(shí)與峰面積呈二項(xiàng)式相關(guān)，奧美拉唑中鈉離子平均含量為6.12%，與理論值無(wú)顯著差異;藥物分子洗脫狀態(tài)會(huì)影響鈉離子測(cè)定重復(fù)性和精密度結(jié)果、氯離子測(cè)定重復(fù)性。藥物分子洗脫難度大將會(huì)降低精密度。結(jié)論：應(yīng)用混合模式離子交換柱，并且采用HPLC-ELSD法測(cè)定化學(xué)藥物成鹽離子含量時(shí)具有良好的通用性和耐用性，然而藥物分子洗脫難度大將會(huì)降低精密度。

關(guān)鍵詞：HPLC-ELSD法;化學(xué)藥物;成鹽離子含量;準(zhǔn)確性;影響因素

為了有效改善藥物溶解度，生產(chǎn)工藝特性和理化穩(wěn)定性，因此多數(shù)藥物都是以成鹽形式生產(chǎn)。由于我國(guó)存在較多仿制藥生產(chǎn)企業(yè)，并且企業(yè)原料藥物的成鹽形式均不同。比如奧美拉唑藥物，我國(guó)藥物市場(chǎng)所銷售的奧美拉唑藥物原料為奧美拉唑、鎂鹽、鈉鹽和鋅鹽等，能夠應(yīng)用到不同制劑研發(fā)當(dāng)中[1]。當(dāng)前，在對(duì)奧美拉唑鎂鹽中鎂離子含量進(jìn)行測(cè)定時(shí)主要應(yīng)用滴定法，但是鮮少有學(xué)者測(cè)定鈉離子含量。此次研究主要是探討分析HPLC-ELSD法測(cè)定化學(xué)藥物成鹽離子含量準(zhǔn)確性的影響因素，現(xiàn)將此次研究報(bào)告作如下匯報(bào)：

1資料與方法

1.1一般資料

（1）儀器設(shè)備：HPLC-ELSD儀器主要用于開(kāi)發(fā)和研究方法及其驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，此次實(shí)驗(yàn)所應(yīng)用的儀器包括液相色譜系統(tǒng)。

（2）試劑與實(shí)驗(yàn)用藥：待測(cè)樣品為奧美拉唑待定標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)對(duì)照品;氯化鈉工業(yè)基準(zhǔn)品。醋酸銨、氯化鉀、硫酸鋰、無(wú)水氯化鈣、乙腈和冰醋酸。

1.2方法

（1）制備混合溶液：稱定10.64mg氯化鉀，16.55mg氯化鈉基準(zhǔn)品，11.47mg奧美拉唑鈉對(duì)照品，14.93mg醋酸銅，16.2mg硫酸鎂，11.98mg硫酸鋰，28.92mg無(wú)水氯化鈣，，9.95mg碳酸氫鈉。將以上物質(zhì)分別置入到量瓶（10ml）中，使用60%乙腈水溶液溶解稀釋至刻度，混合均勻之后確定各離子峰位溶液。分別稱取上述溶液1ml，將其置入到同一個(gè)量瓶中，使用乙腈水溶液（60%）進(jìn)行稀釋，混合均勻之后獲取混合溶液。

（2）制備氯化鈉對(duì)照品：選取適量氯化鈉基準(zhǔn)品，在進(jìn)行干燥處理之后稱取58.13mg，置入到量瓶（50ml）中，使用乙腈水溶液（50%）進(jìn)行稀釋，混合均勻之后獲取對(duì)照品儲(chǔ)備液。稱取1ml對(duì)照品儲(chǔ)備液置入5ml、25ml、100ml和200ml量瓶中，使用乙腈水溶液（50%）進(jìn)行稀釋，混合均勻之后獲取從低濃度至高濃度對(duì)照品溶液。

（3）制備供試品溶液：稱取11.4mg樣本細(xì)粉，置入量瓶（25ml）中，選擇乙腈水溶液（50%）進(jìn)行稀釋，混合均勻之后過(guò)濾，選取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2結(jié)果與討論

2.1測(cè)定奧美拉唑鈉中鈉離子含量

（1）專屬性：1）分離奧美拉唑和混合離子溶液：選取20μL混合溶液，記錄色譜圖至鈉離子峰保留時(shí)間的6倍，并且按照次序以此進(jìn)行洗脫：奧美拉唑，鋰離子、鈉離子、鉀離子、鎂離子、氯離子、鈣離子。如圖1所示。其他如鋅離子、硫酸根離子、碳酸氫根離子在此色譜條件下不進(jìn)行洗脫處理，需要應(yīng)用其他色譜柱進(jìn)行洗脫處理。盡管奧美拉唑峰與鄰近鋰離子峰分離度達(dá)到1.1，卻不會(huì)對(duì)鈉離子峰定量造成影響。2）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液：分別稱取20μL氯化鈉對(duì)照品溶液和供試品溶液，如圖2所示，氯離子峰與鈉離子峰的分離度為17.42.在該色譜柱條件下，鈉離子峰與奧美拉唑峰徹底分離，不影響鈉離子測(cè)定。

（3）測(cè)定限和定量限：稱取0.5ml對(duì)照品溶液置入量瓶（100ml）中，選擇乙腈水溶液（50%）進(jìn)行稀釋，混合均勻之后過(guò)濾，選取濾液20μL，檢測(cè)限和定量限分別為0.54μg/ml、1.86μg/ml。

（4）穩(wěn)定性：選取11.4g奧美拉唑鈉細(xì)粉，按照1.3所示方法制備供試品溶液，并且在室溫條件下靜置，分別在0、8h、16h、24h進(jìn)樣20μL，記錄鈉離子峰面積為5%，在24h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

（5）準(zhǔn)確度：通過(guò)加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定準(zhǔn)確度，選取11.4mg樣品細(xì)粉，置入量瓶（25ml）中，選擇乙腈水溶液（50%）進(jìn)行稀釋，之后加入401.2μg/ml氯化鈉對(duì)照品溶液0.5ml、1ml和2.5ml，將其置入鈉離子中，使用乙腈水溶液（50%）進(jìn)行稀釋，充分混合均勻，不同濃度制備三分溶液，并且按照1.4中所示方法和色譜條件進(jìn)行測(cè)定，對(duì)加樣回收率進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果顯示，低濃度平均加樣回收率為103.4%，中濃度平均加樣回收率為100.6%，高濃度平均加樣回收率為101.5%;峰面積分別為1.2%、3.6%、2.1%。

2.2HPLC-ELSD法測(cè)定化學(xué)藥物成鹽離子含量準(zhǔn)確性的影響因素探討

（1）藥物分子洗脫狀態(tài)：一般來(lái)說(shuō)，都是通過(guò)加樣回收率表述方法準(zhǔn)確度。奧美拉唑中的奧美拉唑成分和鈉成鹽為1：1存在，鈉離子理論含量為6.13%，檢測(cè)實(shí)際含量為6.12%，峰面積為3.9%。無(wú)顯著差異，因此藥物分子洗脫狀態(tài)不會(huì)影響準(zhǔn)確度。

（2）儀器狀態(tài)：檢測(cè)儀器檢測(cè)可會(huì)發(fā)現(xiàn)顆粒物質(zhì)時(shí)，顆粒大小，形態(tài)以及產(chǎn)生過(guò)程等都會(huì)影響響應(yīng)值。因此在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)需要串聯(lián)ELSD和HPLC大，并且計(jì)算色譜圖中主成分峰值與鈉離子峰面積。按照測(cè)定顯示，奧美拉唑峰面積為0.75%，鈉離子峰面積為2.7%，存在顯著差異，因此儀器狀態(tài)會(huì)影響準(zhǔn)確度。

3、結(jié)論

在此研究中建立了HPLC-ELSD法測(cè)定奧美拉唑鈉中的鈉離子含量，并且進(jìn)行詳細(xì)論證。通過(guò)對(duì)化學(xué)藥物成鹽離子含量準(zhǔn)確性的影響因素分析，結(jié)果顯示，檢測(cè)儀器狀態(tài)會(huì)極大影響檢測(cè)準(zhǔn)確性。

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