康新莉，李登方

(西安碑林藥業(yè)股份有限公司，陜西 西安 710048)

苦楝子和川楝子分別為楝科楝屬植物苦楝MelaiazedarachL.和川楝MeliatoosendanSieb.et zucc的干燥成熟果實。兩者均全國各地種植，分布廣泛[1-2]?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》載有楝，《圖經(jīng)本草》稱為苦楝，蘇頌曰：“楝實以蜀川者為佳?！盵3-4]根據(jù)古人描述，楝實未做川楝子、苦楝子之分，藥用功效也十分相似，均具有舒肝行氣止痛、驅(qū)蟲的作用。

現(xiàn)代研究川楝子的較多，苦楝子較少，苦楝子研究主要在藥理實驗方面，如苦楝子較川楝子毒性大[5]、苦楝子的酒精浸液對若干常見的致病性真菌在體外有較明顯的抑制作用、具有抗病毒、抗生育抗腫瘤作用等[6]。20世紀90年代有苦楝子生藥鑒定的研究報道[7]，但其手工繪圖的細胞特征差異較大，不乏有苦楝子和川楝子的對比研究，但至今未見苦楝子的定性與定量分析報道。因此，針對目前市場上川楝子與苦楝子常混用或錯用的現(xiàn)象，進行苦楝子、川楝子的性狀特征、顯微特征、薄層色譜的對比以及用高效液相色譜法進行苦楝素的含量比較，擬達到區(qū)別特征明顯，易于操作，不應混用或錯用的目的。

1 材料、儀器和試劑

1.1 實驗儀器和試劑

Agilent 1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，sartoius BS110電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，KQ5200DE型超聲波清洗儀(上海昆山超聲波儀器廠)。Motic 顯微鏡(麥克奧迪實業(yè)集團有限公司，型號：DMB-1223),硅膠G板(自制)，乙腈(色譜純)，水為純化水，其他試劑均為分析級。

1.2 實驗藥材

苦楝子藥材分別采購于陜西寶雞(批號：20140923、20141105)、陜西渭南臨渭區(qū)(批號：20141004、20141107)、陜西渭南蒲城縣(批號：20141005、20141007)，川楝子藥材采購于雷波縣金沙江河谷(批號：20150106)、四川師范大學校園(批號：20141206)以及安徽毫州市(批號：140625)、四川國強飲片廠(批號：140801)，經(jīng)宋良科教授鑒定分別為楝科屬植物苦楝MelaiazedarachL.的成熟果實和楝科屬植物川楝MeliatoosendanSieb.et zucc的成熟果實?？?川)楝素對照品購于成都普思生物科技有限公司，批號：PS09111405。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 性狀比較

苦楝子和川楝子及其果核外觀大小差別較大，但外觀顏色、形狀差別較小，兩者外觀均呈類球形或橢球形，頂端有微凹的花柱殘痕,基部有凹陷的果梗痕。主要以果核的大小形狀、表面的縱棱數(shù)、子房室數(shù)予以區(qū)別。見表1。

表1 川楝子與苦楝子性狀比較

2.2 顯微鑒別

苦楝子粉末顯微鑒別：本品粉末黃棕色。果皮纖維成束，末端鈍圓，壁極厚；含晶細胞微木化，形成含方晶的晶鞘纖維。石細胞成群或單個散在，呈類圓形、不規(guī)則長條形或多角形，直徑14～54 μm，長50～200 μm。種皮細胞鮮黃色或橙黃色，直徑約至44 μm，壁極厚，有縱向微波狀紋理。草酸鈣棱晶直徑5～25 μm。草酸鈣方晶直徑20～30 μm。草酸鈣簇晶少見。見圖1。

兩者粉末顏色均為黃棕色，對于纖維束、晶鞘纖維、石細胞、種皮細胞等無明顯的區(qū)別，僅苦楝子粉末中有棱晶，川楝子未見。

2.3 薄層鑒別

取兩者粉末各3 g，加水80 mL，超聲處理1.5 h，放冷，離心，取上清液，用二氯甲烷振搖提取3次，每次30 mL，合并二氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。取苦楝素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法 (附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(16:2)為展開劑，展開，取出，晾干，365 nm下檢視。見圖2?？嚅?、川楝子的供試品均顯藍色熒光斑點，但苦楝子的紅色熒光斑點位置，川楝子則無，結(jié)果表明，該類化學成分中，苦楝子比川楝子多一種組分[8-9]。

注:1.種皮細胞;2.外果皮細胞;3.方晶;4.棱晶;5.薄壁細胞;6-7.石細胞;8.纖維素;9.晶鞘纖維圖1 顯微鑒別(200×)

注:1-4.苦楝子;5-7.川楝子圖2 薄層鑒別

2.4 苦楝素含量測定

2.4.1 色譜條件

色譜柱為C18Hypersil ODS2(250 mm ×4．6 mm，5 μm)，流動相為乙腈(A)-水(B)梯度洗脫，洗脫條件：0～30 min 28%A～30%A,30～50 min 30%A～35%A,流速為1 mL/min,檢測波長為210 nm，柱溫為35℃，進樣量10 μL[10-11]。

2.4.2 溶液的制備

精密稱取苦楝素對照品6.91 mg，加甲醇定容到10 mL的容量瓶中，搖勻，作為母液，備用。精密量取2 mL的母液，置5 mL的容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，得濃度為0.2764 mg/mL的苦楝素對照品溶液。取兩者粉(過3號篩)約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入石油醚50 mL，振搖20 min，過濾，留濾渣，重復兩次；粉末殘渣，自然風干，加入60 mL無水乙醇回流提取2 h重復2次，濾液減壓蒸干后，甲醇定容到5 mL的容量瓶中，即得供試品溶液。

2.4.3 方法學考察

專屬性試驗：精密吸取2.4.2項下 對照品及樣品溶液、空白溶液各10 μL，按上述2.4.1項下色譜條件進樣測定。色譜圖見圖3。

注：A.苦楝素對照品;B.苦楝子供試品;C.空白圖3 色譜圖

線性關系考察：精密吸取苦楝素對照品溶(質(zhì)量濃度為0.276 4 mg/mL)6、10、14、16、18、20 μL，按2.4.1項下色譜條件，進樣10 μL，積分求得峰面積，以進樣量μg為橫坐標(x)，以峰面積為縱坐標(y)，計算線性關系為y=480.23x-151.966(R2=0.998 87，n=6)，結(jié)果表明，在1.658 4～4.740 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

精密度試驗：精密吸取苦楝素對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進樣6次，測定峰面積值，結(jié)果峰面積的RSD為1.34%，表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗：精密稱定同一批號苦楝子樣品6份，每份約0.2 g，按上述方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣，測定峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為2.12%，表明方法重復性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一苦楝子和川楝子供試品溶液，分別于制備0、2、4、6、10、16、24 h各進樣10 μL，測定峰面積，峰面積的RSD為1.5%和1.74%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率試驗：精密稱定已測知含量的苦楝子樣品6份，每份約2.0 g，分別精密加入一定量的苦楝素對照品，按上述方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣，計算加樣回收率。結(jié)果平均回收率100.5%，RSD為2.38%，見表3。

表3 回收率試驗(n=6)

2.4.4 樣品含量測定

取苦楝子和川楝子藥材粉末，按上述方法制備供試品溶液，進樣，測定峰面積，計算苦楝素含量。結(jié)果見表4。結(jié)果表明，兩者都含有苦楝素，但川楝子中的苦楝素含量高于苦楝子。

表4 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 苦楝子與川楝子的收錄記載

《中華人民共和國藥典》1977版至2015版均收載川楝MeliatoosendanSieb.et zucc的干燥成熟果實，其藥名為川楝子。1992版《衛(wèi)生部藥品標準》中收載苦楝MelaiazedarachL.的干燥成熟果實，其藥名為苦楝子(但僅有性狀鑒定特征)。1977版至2010版均收載楝科植物苦楝MelaiazedarachL.和川楝MeliatoosendanSieb.et zucc的干燥樹皮及根皮，其藥名為苦楝皮。由于川楝子與苦楝子傳統(tǒng)功效與用法用量相似，兩者的樹皮及根皮均做為苦楝皮，導致川楝子與苦楝子在藥材市場和民間藥用時基本做同一藥材混用或相互錯用。

3.2 苦楝子與川楝子的鑒別結(jié)果

苦楝子與川楝子在性狀方面存在一定的差異，很容易區(qū)分辨別，顯微鑒別結(jié)果表明兩者無顯著差異。

以氯仿-甲醇(16∶2)為展開劑的薄層色譜圖中苦楝子比川楝子多一種組份,高效液相色譜測定結(jié)果表明，苦楝子中苦楝素含量低于川楝子。在色譜條件色譜柱為C18Hypersil ODS2(250 mm×4．6 mm，5 μm)，流動相為乙腈(A)-水(B)梯度洗脫，洗脫條件：0～30 min28%A～30%A，30～50 min30%A～35%A，流速為1 mL/min，檢測波長為210 nm，柱溫為35℃，進樣量10 μL，分別測定了苦楝子與川楝子中的川楝素的含量，結(jié)果苦楝子中川楝素的平均含量為0.48 mg/g，川楝子中川楝素的含量達到0.84 mg/g，表明川楝子和苦楝子中主要藥效成分的含量存在明顯區(qū)別，臨床應用應區(qū)別對待。

3.3 苦楝素的結(jié)構(gòu)特征及藥理作用

苦楝素又名川楝素，是一種四環(huán)三萜類化合物，化學結(jié)構(gòu)存在醛-酮式結(jié)構(gòu)互變異構(gòu)，所以表現(xiàn)在液相色譜圖上為雙峰，計算含量時是將兩個峰面積和帶入線型方程計算苦楝素的含量。

苦楝素是一種藥物活性很強，目前藥理研究表明，苦楝素具有驅(qū)蟲抑菌、治療肉毒素中毒、抗腫瘤等作用。毒理研究表明其對胃腸道及肝臟有毒副作用，過量的苦楝素也會導致血管壁損傷，引起急性循環(huán)衰竭等癥狀[12]。現(xiàn)代研究認為川楝子與苦楝子在毒性及藥理方面也存在差異[13]。

4 小結(jié)

綜合上述，苦楝子和川楝子在臨床使用方面應該嚴格區(qū)分，保證臨床用藥的安全有效。應按藥典規(guī)定執(zhí)行，并對苦楝皮做進一步的深入研究，達到基源與藥名一致，易于操作和更好的控制藥材質(zhì)量目的，規(guī)范中藥材的質(zhì)量。