孫文沫 汪亞倫
作者簡(jiǎn)介:孫文沫(1989-),女,漢族,沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院,研究方向是實(shí)驗(yàn)血液學(xué),E-mail:swm0901@163.com。汪亞倫(1962-),女,漢族,沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院,研究方向是生物化學(xué)與分子生物學(xué), E-mail:wangyalun@sohu.com。
【摘 要】 目的:探討CBLB502對(duì)造血干細(xì)胞輻射防護(hù)作用。方法:40只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為照射對(duì)照組和CBLB502組,每組各20只。所有小鼠均接受X射線6.5Gy一次性照射,劑量率為67.2cGy/min。CBLB502組小鼠在照射前30分鐘注射CBLB502,照射對(duì)照組予以腹腔注射等量生理鹽水,對(duì)比兩組骨髓有核細(xì)胞數(shù)和集落數(shù)。結(jié)果:照后24h,CBLB502組和照射對(duì)照組兩組骨髓有核細(xì)胞數(shù)均減少,兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。照后24h,CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:CBLB502對(duì)造血干細(xì)胞有輻射防護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】 CBLB502;造血干細(xì)胞;輻射
【中圖分類號(hào)】R416
【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A
【文章編號(hào)】1005-0019(2019)18-254-02
Toll樣受體5(Toll-like receptor 5,TLR5)是在固有免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要效應(yīng)的模式識(shí)別受體之一,可以特異識(shí)別病原體表面的分子,抵御機(jī)體外界病原微生物的入侵,是近年來(lái)免疫學(xué)研究的重點(diǎn)對(duì)象[1]。CBLB502是TLR5激動(dòng)劑,是經(jīng)過(guò)藥理學(xué)改構(gòu)的細(xì)菌鞭毛蛋白衍生物[2]。CBLB502具有較好的安全性和耐受性。本次研究使用X射線6.5Gy照射小鼠模型,探討CBLB502對(duì)造血干細(xì)胞輻射防護(hù)作用,結(jié)果如下。
1 材料與方法
1.1 藥物、儀器、試劑
CBLB502蛋白由pMD-18T-CBLB502質(zhì)粒為模板,利用引物擴(kuò)增全長(zhǎng)序列,植入大腸桿菌,分離純化合成;甲基纖維素培養(yǎng)基由加拿大 Stem Cell Technologies公司(重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司代理)生產(chǎn),批號(hào):04434;1640培養(yǎng)基由美國(guó)Gibco 公司生產(chǎn);小鼠CD 45R/B220 抗體由美國(guó)BDB iosciences公司生產(chǎn),批號(hào):2347812;CD90.2抗體由加拿大eBioscience 公司生產(chǎn),批號(hào):E 07586-1631;液體1配比:1640培養(yǎng)基+2%胎牛血清+10U/ml肝素+100U /ml青鏈霉素;液體2配比:1640培養(yǎng)基+100U/ml青鏈霉素。
1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
C57BL/6J雄性小鼠40只(合格證號(hào):SCXK(遼)2015-0001),體質(zhì)量20-22g。小鼠飼養(yǎng)于沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院SPF級(jí)屏障動(dòng)物房,每籠5只,自由飲水進(jìn)食。
1.3 方法
將40只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為照射對(duì)照組和CBLB502組,每組各20只。所有小鼠均接受X射線6.5Gy一次性照射,劑量率為67.2cGy/min。CBLB502組在照射前30分鐘為小鼠注射CBLB502,0.2mg/kg,皮下給藥,照射對(duì)照組予以腹腔注射等量生理鹽水。在照射后24h,將小鼠處死,取20ml骨髓細(xì)胞懸液加入冰乙酸中,倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)每只小鼠的骨髓有核細(xì)胞數(shù)。將制備單細(xì)胞懸液用甲基纖維素培養(yǎng)基調(diào)整骨髓有核細(xì)胞數(shù)到5*107/L,接種到培養(yǎng)板,在37℃、5%CO 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),4d后在倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)骨髓有核細(xì)胞數(shù)和集落數(shù),集落包括紅系集落形成單位(CFU-E)、爆式紅系集落形成單位(BFU-E)、粒單 系集落形成單位(CFU-GM)。
1.4 觀察指標(biāo) 對(duì)比兩組骨髓有核細(xì)胞數(shù)和集落數(shù)。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用t檢驗(yàn),P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 兩組方法對(duì)X射線6.5Gy射線照射小鼠照后造血的保護(hù)作用對(duì)比
照射24h后,CBLB502組和照射對(duì)照組兩組骨髓有核細(xì)胞數(shù)均減少,兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。照后24h,CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。
3 討論
固有免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵抗外界侵襲的重要防線,是生物在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成的免疫系統(tǒng)。模式識(shí)別受體是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在固有免疫應(yīng)答中發(fā)揮著及其重要的作用。TLR5是模式識(shí)別受體,可以特異性識(shí)別病原微生物表面的模式分子,促進(jìn)免疫效應(yīng)細(xì)胞的分化和成熟,抵御病原微生物的侵襲[3]。TLR5可表達(dá)于樹突狀細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞、單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞表面,細(xì)菌鞭毛蛋白是其唯一的配體。CBLB502是細(xì)菌鞭毛蛋白經(jīng)過(guò)優(yōu)化后的重組蛋白,免疫原性較低。研究表明,CBLB502具有明顯的輻射防護(hù)效果[4]。
本次研究中,照射24h后,CBLB502組和照射對(duì)照組兩組骨髓有核細(xì)胞數(shù)均減少,兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。照后24h,CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示CBLB502對(duì)照射后早期的骨髓有核細(xì)胞數(shù)減少無(wú)明顯的作用,但是通過(guò)觀察到CBLB502組集落數(shù)的增加,表明CBLB502對(duì)輻射后造血干細(xì)胞具有較明顯的保護(hù)作用。CBLB502的輻射防護(hù)作用可能和細(xì)胞因子的表達(dá)調(diào)控和信號(hào)通路相關(guān),其可能的作用機(jī)制為減少了骨髓造血干祖細(xì)胞凋亡和體內(nèi)細(xì)胞因子表達(dá)增加,從而促進(jìn)骨髓造血干細(xì)胞的更新和存活,發(fā)揮輻射防護(hù)作用。
綜上所述,CBLB502對(duì)造血干細(xì)胞輻射防護(hù)作用,值得在臨床中推廣。
參考文獻(xiàn)
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