樊伶俐，田娟娟，張小波，張羽，杜小波

621000 四川 綿陽(yáng)，綿陽(yáng)市中心醫(yī)院 腫瘤科(樊伶俐、張羽、杜小波)；622750 四川 綿陽(yáng)，北川羌族自治縣人民醫(yī)院 內(nèi)科(田娟娟)；622750 四川 綿陽(yáng)，北川羌族自治縣第三人民醫(yī)院 內(nèi)科(張小波)

據(jù)2018年全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，肺癌占癌癥總發(fā)病率的11.6%，死亡患者占癌癥導(dǎo)致死亡人數(shù)的18.4%，仍然是全世界和我國(guó)發(fā)病率及死亡率最高的惡性腫瘤，肺腺癌是最常見的病理類型[1]。隨著技術(shù)的進(jìn)步，新興的分子靶向治療已經(jīng)成為目前治療肺癌的有力手段[2-3]，而表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)已經(jīng)成為目前標(biāo)準(zhǔn)指南推薦的肺癌分子靶向治療中最主要的靶點(diǎn)[4-6]，攜帶某些EGFR突變的非小細(xì)胞肺癌患者從這種靶向治療中受益顯著。研究發(fā)現(xiàn)，常見的突變外顯子19缺失、L858R以及罕見的突變S768I、G719、L861Q為EGFR酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitor,TKI)的敏感型突變，而T790M和外顯子20插入突變?yōu)槟退幮屯蛔僛7-9]。因此，檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者的EGFR基因突變情況對(duì)臨床治療具有重要意義。已經(jīng)有多項(xiàng)研究指出[10-13]，EGFR突變率和突變類型在不同地域、不同種族的人群存在較大差異。羌族是我國(guó)少數(shù)民族之一，有著獨(dú)特的文化和生活習(xí)俗，既往也有研究證實(shí)了環(huán)境和遺傳可以交互作用，從而導(dǎo)致不同民族間同一疾病的發(fā)病率和嚴(yán)重程度不同[14]。本實(shí)驗(yàn)旨在研究四川綿陽(yáng)北川地區(qū)的羌族肺腺癌患者EGFR突變的特點(diǎn)，以便為羌族肺腺癌患者的個(gè)體化治療提供基因?qū)W的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

2015年1月至2019年3月期間收集綿陽(yáng)市中心醫(yī)院58例、北川縣人民醫(yī)院50例和北川縣第三人民醫(yī)院12例，共120例羌族肺腺癌患者，其中有5例為腺鱗癌。120例患者中有初治患者112例，化療后患者8例。本研究獲綿陽(yáng)市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。收集患者的臨床資料，包括性別、年齡、吸煙狀態(tài)、腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、腫瘤分化程度等。其中男性64例，女性56例，年齡32～86歲，中位年齡56歲(表1)。

1.2 研究方法

120例標(biāo)本中有癌組織108例，胸腹水9例，血液3例。108例組織標(biāo)本中有87例來(lái)源于原發(fā)灶，21例來(lái)源于轉(zhuǎn)移灶。將所有患者的病理標(biāo)本送至綿陽(yáng)市中心醫(yī)院病理科，采用QLAamp DNA FFPE提取試劑盒(QIAGEN)提取樣本DNA，采用NanoDrop 2000分光光度儀(Thermo Fisher)檢測(cè)DNA純度和濃度，以A260/A280在1.8～2.0之間視為合格。統(tǒng)一提取DNA后，用武漢友芝友公司生產(chǎn)的EGFR基因突變?cè)噭┖?，采用擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)方法，檢測(cè)EGFR的21個(gè)位點(diǎn)的突變情況，包括常見的外顯子19缺失突變，外顯子21的L858R和L861Q突變，外顯子18的G719A、G719S和G719C突變，外顯子20的插入突變、S768I和T790M突變等。將EGFR突變狀態(tài)與患者臨床病理特征進(jìn)行分析比較。

1.3 研究指標(biāo)

肺腺癌的診斷均由兩位病理科醫(yī)生確認(rèn)?；颊叩哪[瘤分期按照國(guó)際抗癌聯(lián)盟第八版肺癌TNM分期，EGFR的18、19、20、21號(hào)外顯子至少一項(xiàng)有突變?yōu)橥蛔冃?，否則為野生型。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 21.0 軟件，組間率的比較用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 EGFR突變位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果

120例羌族肺腺癌中EGFR突變共57例，野生型63例，總突變率47.5%，其中L858R和19號(hào)外顯子缺失的突變率最高，分別占52.6%(30例)和42.1%(24例)，另外有L861Q突變2例(3.5%)，20號(hào)外顯子插入突變1例(1.8%,表1)。

2.2 EGFR 突變與臨床特征的關(guān)系

女性肺腺癌患者EGFR突變率顯著大于男性(60.7%vs35.9%)；不吸煙患者EGFR突變率大于吸煙患者(56.4%vs31.0%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。以患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期與腫瘤分化程度分組后，EGFR突變率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,表1)。

表1 肺腺癌EGFR突變狀態(tài)與臨床病理特征的關(guān)系(n)

Table 1. Association between EGFR Mutations and Clinicopathological Characteristics in Lung Adenocarcinoma(n)

VariableOver-allEGFRmutations Wild typeχ2PGender Male6423417.35230.007 Female563422Age(yrs) <607834441.36640.242 ≥60422319Smoking history Smokers4213297.09500.008 Non-smokers784434Tumor size(cm) ≤35227250.71990.396 >3683038Lymph node me-tastasis Yes5731262.06440.151 No632637Differentiation Well176112.39780.302 Moderately573126 Poorly462026TNM stage I-II3216160.10940.741 III-IV884147

EGFR:Epidermal growth factor receptor.

3 討 論

我國(guó)是一個(gè)多民族國(guó)家，其中羌族人口大約有32萬(wàn)，綿陽(yáng)北川是全國(guó)唯一的羌族少數(shù)民族自治縣，茂縣、理縣、汶川等其他地區(qū)也散在分布有羌族。本研究選取綿陽(yáng)北川地區(qū)的羌族肺腺癌患者為研究對(duì)象，分析其EGFR基因的突變率及與臨床特征的相關(guān)性。目前國(guó)內(nèi)研究EGFR突變情況的對(duì)象多是漢族，其次是維吾爾族，尚無(wú)針對(duì)羌族的研究。我國(guó)幅員遼闊，肺癌 EGFR 突變率在不同地區(qū)、不同人種間有一定的差異性[10-13]。因此，有必要根據(jù)地方特色研究EGFR基因突變發(fā)生率，為今后對(duì)EGFR抑制劑的選擇提供臨床依據(jù)。既往有研究顯示，亞洲肺癌患者的EGFR突變率高于歐美地區(qū)[15]，而我國(guó)的漢族肺癌患者的EGFR突變率則高于維吾爾族[11-12]。亞洲人群的EGFR 突變率約為48%～63.3%[16-17],歐美地區(qū)的EGFR 突變率約為10%[18]。王秀麗等[12]的研究顯示維吾爾族的EGFR突變率為15.8%，明顯低于漢族患者(突變率為45.7%)，而與西方國(guó)家相接近。本研究發(fā)現(xiàn)，綿陽(yáng)北川地區(qū)羌族肺腺癌 EGFR 突變率為47.5%，明顯高于維吾爾族的EGFR突變率，而與亞洲人群和中國(guó)漢族人群的EGFR突變率大體一致，該差異反映了不同民族間的腫瘤遺傳學(xué)差異。

目前，國(guó)內(nèi)外有研究發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)的EGFR 突變位點(diǎn)存在一定的差異，但總體上以 19、21 號(hào)外顯子突變?yōu)橹鱗15]。國(guó)內(nèi)大多研究[12,19-20]報(bào)道肺癌EGFR突變以19號(hào)外顯子突變率較高。本次研究的人群為四川綿陽(yáng)地區(qū)的羌族，發(fā)現(xiàn)肺腺癌EGFR 基因突變雖然仍以19、21 號(hào)外顯子突變?yōu)橹?，但不同的?21 號(hào)外顯子突變率較 19 號(hào)外顯子突變率稍高(分別為 52.6%，42.1%)，這與楊啟英等[21]報(bào)道青海地區(qū)和魏丹鳳等[22]報(bào)道四川成都地區(qū)的肺癌EGFR突變情況一致。有研究發(fā)現(xiàn)，在EGFR 基因中，19 號(hào)外顯子缺失突變的腫瘤較 21 號(hào)外顯子突變的腫瘤對(duì)TKIs的反應(yīng)更為敏感[23-25]。該差異提示種族可能決定腫瘤遺傳學(xué)背景的差異，進(jìn)而影響腫瘤患者的預(yù)后及對(duì)治療的反應(yīng)。

在本研究中，通過分析肺腺癌 EGFR 突變狀況及其與臨床特征的關(guān)系，我們發(fā)現(xiàn)綿陽(yáng)北川地區(qū)羌族肺腺癌 EGFR 突變以女性、不吸煙患者為主，而與患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、腫瘤分期等無(wú)明顯直接關(guān)系，這與既往研究[26-30]總體上報(bào)道的肺腺癌EGFR 突變狀況相一致。綜上所述，本研究證實(shí)四川綿陽(yáng)羌族肺腺癌的EGFR突變率較高，以19、21 號(hào)外顯子突變?yōu)橹?，EGFR突變率與性別、吸煙狀況有關(guān)，而與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、分期均無(wú)明顯相關(guān)性。本研究是第一項(xiàng)針對(duì)少數(shù)民族羌族肺腺癌患者EGFR基因突變特點(diǎn)的研究，初步顯示羌族人群EGFR基因狀態(tài)與漢族人群大體一致，此結(jié)論需控制變量后，擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究論證。

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