探討蠟塊脫鈣法在常規(guī)病理技術制片中的應用

程宇

（浙江大學醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院，浙江 杭州 310008）

0 引言

骨組織中鈣鹽成分非常豐富，且具有堅硬的特質(zhì)，所以常規(guī)病理技術制片時，往往會出現(xiàn)脫鈣不全的情況，使切片不完整，切痕明顯，染色不均，大量空洞，給醫(yī)生工作帶來不便，影響診斷結(jié)果[1]。因此，需對其采取特殊的方法，使其徹底脫去鈣質(zhì)，按照固定、脫鈣、中和、清洗等步驟將蠟塊處理好后，嚴格執(zhí)行切片措施，結(jié)合臨床迅速完成病理報告，但這種方法存在一定的缺點，可能會出現(xiàn)切片不夠完整、不合格等情況。為探討分析蠟塊脫鈣法在常規(guī)病理技術制片中的應用，將我院病理科從2018 年5 月至2019 年5 月收集的850 塊脫鈣不足、鈣化灶、砂礫體的蠟塊作為研究樣本，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院病理科從2018 年5 月至2019 年5月收集的850 塊脫鈣不足、鈣化灶、砂礫體的蠟塊，選擇隨機分配法，將蠟塊分為對照組和觀察組兩組，每組各425 塊；觀察組采取蠟塊脫鈣法，而對照組采取常規(guī)脫鈣法。選擇全自動染色機（Thermo）、全自動脫水機（Thermo）、全自動石蠟包埋機（Thermo）、輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機（Leica2235）等。

1.2 方法

兩組均配置50%甲醛乙酸脫鈣液；對照組采取常規(guī)脫鈣法，直接將蠟塊進行切片處理；觀察組采取蠟塊脫鈣法，首先把蠟塊上多余的蠟清理掉，然后將蠟塊最大的切面呈現(xiàn)出來，在這之后將蠟塊放置進脫鈣液中，使其與脫鈣液充分接觸，浸泡1 h 后將其取出，最后用清水清洗干凈[2]。將兩組蠟塊固定脫水[全自動脫水機（Thermo）]以后制成病理切片（Leica2235），利用全自動染色機（Thermo）進行染色處理，經(jīng)過全自動封片機封固后，利用光學顯微鏡對蠟塊進行觀察，需要注意的是，在封固期間需要將中性樹膠的作用充分發(fā)揮出來。

1.3 觀察指標

比較兩組蠟塊的組織結(jié)構(gòu)完整性和染色效果，對比兩組蠟塊的切片合格情況。蠟塊的組織結(jié)構(gòu)完整性表現(xiàn)為切片無切痕，外觀平整無空洞；染色效果滿意表現(xiàn)為著色清晰分明；切片合格表現(xiàn)為切片完整，厚薄均勻，染色清晰，透明性好，無褶皺、無污染，核質(zhì)較分明，玻片整潔。

1.4 統(tǒng)計學分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0 統(tǒng)計學軟件統(tǒng)計處理，計數(shù)資料用率（%）表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 比較兩組蠟塊的制片效果

觀察組蠟塊切片后的組織結(jié)構(gòu)完整的有411 塊，完整率達到96.71 %，且切片后顏色十分均勻，所有蠟塊染色均令人滿意，染色滿意率高達100.00 %；對照組蠟塊切片后的組織結(jié)構(gòu)大多有殘缺現(xiàn)象，只有107 塊較完整，完整率只有25.18 %，經(jīng)過切片后，蠟塊顏色較雜，不均勻，且蠟塊染色質(zhì)量也不高，僅有94 塊蠟塊染色效果較好，滿意率僅為22.12 %；比較兩組蠟塊組織結(jié)構(gòu)完整率χ2=107.481，P=0.000；對比蠟塊染色滿意率χ2=127.547，P=0.000。兩組蠟塊組織結(jié)構(gòu)完整與滿意情況差異較大，P＜0.05，有統(tǒng)計學意義。

2.2 對比兩組蠟塊的切片合格情況

觀察組蠟塊切片合格率（100.00 %）高于對照組（24.00 %），差異顯著，P＜0.05，有統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 對比兩組蠟塊的切片合格情況[n(%)]

3 討論

骨組織屬于結(jié)締組織，由細胞間質(zhì)、纖維與數(shù)種細胞構(gòu)成，鈣化的細胞間質(zhì)是骨組織的基礎，它也叫做骨基質(zhì)，骨基質(zhì)包括有機成分與無機成分，這兩種化學成分結(jié)合緊密，從而讓骨質(zhì)變得堅硬，導致切片困難[3]。在常規(guī)病理技術制片時，因骨組織中存在豐富的鈣鹽沉淀，使骨組織十分堅硬，難以切片，此時必須采取脫鈣處理，需要注意脫鈣徹底，否則會導致切片碎裂，破壞切片的完整性[4]。若要利用常規(guī)病理制片處理含鈣組織必須先進行固定，使細胞保持生前的狀態(tài)，然后進行脫鈣，采取對組織傷害小且適合染色的脫鈣液將鈣鹽從含鈣組織中的膠原纖維分離出來[5]。脫鈣液一般選擇一定濃度的硝酸或者鹽酸（本院脫鈣液為50 %甲醛乙酸），其脫鈣效果好，對切片質(zhì)量也有一定的提升[6]。

國內(nèi)臨床常采取脫鈣液進行脫鈣，將選好的組織塊放進脫鈣液中稀釋脫鈣，脫鈣時間長，不同的脫鈣液有不同的脫鈣時間，至少需要2 d，最長7 d才能脫鈣，對骨組織的研究帶來了巨大的影響[7]。同時會出現(xiàn)脫鈣不足、鈣化灶、砂礫體的情況，如果直接切片，會導致切片合格率低，即使切片合格，還會出現(xiàn)切片完整性不高、染色不均等情況，使診斷的準確性受到嚴重的影響[8]。因此，需要尋求一種有效可行的脫鈣方法，既需要保障切片的完整性和染色效果，又要使抗原與超微結(jié)構(gòu)能夠被完整保存[9]。而蠟塊脫鈣法對常規(guī)病理技術制片的效果非常不錯，能使組織結(jié)構(gòu)保持完整性，沒有切片痕跡，且切片染色均勻，提高了診斷的準確性。蠟塊脫鈣法可使骨組織里的鈣質(zhì)徹底清理掉，且在脫鈣期間無需更換脫鈣液，此外，0.5～1 h 就能完成脫鈣，能有效提高工作效率[10]。

本研究顯示，使用常規(guī)脫鈣法的蠟塊組織結(jié)構(gòu)完整性為25.18 %，染色滿意度為22.12 %，蠟塊切片合格率為24.00 %；使用蠟塊脫鈣法的蠟塊組織結(jié)構(gòu)完整性為96.71 %，染色滿意度為100.00 %，蠟塊切片合格率為100.00 %；結(jié)果顯示，蠟塊脫鈣法的脫鈣效果比常規(guī)脫鈣法好，差異顯著，P＜0.05，有統(tǒng)計學意義。

綜上所述，在常規(guī)病理技術制片中使用蠟塊脫鈣法可保持蠟塊組織結(jié)構(gòu)完整性，提高染色滿意率和蠟塊切片合格率，除此之外，蠟塊脫鈣法具有較高的安全性，操作時間短，值得臨床使用。