鐘寶珠，呂朝軍，覃偉權(quán)，李朝緒，閻偉

（中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所，海南文昌 571339）

紅棕象甲（Rhynchophorus ferrugineus Oliver）是棕櫚植物上的危險(xiǎn)性檢疫害蟲[1～2]，該蟲以幼蟲鉆蛀危害植物莖干，早期不易表現(xiàn)危害癥狀，因此當(dāng)發(fā)現(xiàn)其危害時(shí)樹干已嚴(yán)重受害[3～4]。目前中國(guó)對(duì)于該蟲防治主要以聚集信息素誘集成蟲為主，在化學(xué)防治方面主要針對(duì)幼蟲采用莖干注射殺蟲劑，在生物防治方面的研究還相對(duì)較少。

淡紫色擬青霉 (Paecilomyces lilacinus(Thorn.)Samson)屬于內(nèi)寄生性真菌，是一些植物寄生線蟲的重要天敵，能夠寄生于卵、幼蟲和雌蟲，可顯著減輕作物線蟲危害[5～6]。目前有研究表明，淡紫色擬青霉對(duì)害蟲也具有一定的毒力效果[7～10]，該文以紅棕象甲成蟲為供試對(duì)象，研究了淡紫色擬青霉對(duì)該蟲成蟲的毒力效果，以期為紅棕象甲生物防治技術(shù)的制定和淡紫色擬青霉的利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

供試紅棕象甲為野外誘集，并在中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所植物保護(hù)研究室飼養(yǎng)不少于10代，取體型大小一致的新羽化健康成蟲供試。飼以甘蔗，并以20%蜂蜜水作為補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。

1.2 研究方法

1.2.1 淡紫色擬青霉侵染紅棕象甲成蟲的形態(tài)學(xué)觀察

將淡紫色擬青霉孢子液用無菌水稀釋至1.0×108個(gè)孢子/mL，用微量噴霧器噴施于蟲體，后將試蟲放置養(yǎng)蟲盒（18cm×10cm×8cm）內(nèi)繼續(xù)飼喂，5d后觀察處理后的試蟲并拍照。

1.2.2 淡紫色擬青霉對(duì)紅棕象甲成蟲的毒力

致死效果的濃度效應(yīng)：將淡紫色擬青霉孢子液用無菌水稀釋至系列濃度（1.0×108、1.0×107、1.0×106、1.0×105、1.0×104個(gè)孢子 /mL），以噴霧法將孢子液噴霧至蟲體，之后將試蟲轉(zhuǎn)移至飼養(yǎng)盒中。96h后統(tǒng)計(jì)各處理死亡蟲數(shù)，并計(jì)算校正死亡率。每個(gè)濃度處理紅棕象甲成蟲20頭，重復(fù)3次，以無菌水處理為對(duì)照。以試蟲無法爬行，且用昆蟲針觸動(dòng)蟲體無自主反應(yīng)為試蟲死亡標(biāo)準(zhǔn)。

致死效果的時(shí)間效應(yīng)：采用噴霧法以1.0×108個(gè)孢子/mL濃度的淡紫色擬青霉孢子液處理紅棕象甲成蟲，處理后48h、72h、96h、120h和144h分別統(tǒng)計(jì)死亡蟲數(shù)。各處理蟲數(shù)及死亡標(biāo)準(zhǔn)同上。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理方法

采用黃劍的方法[11]，使用Excel統(tǒng)計(jì)軟件分析毒力回歸方程及LC50/LT50、LC50/LT50的95%置信區(qū)間等。

2 結(jié)果與分析

2.1 感染淡紫色擬青霉后紅棕象甲成蟲的形態(tài)學(xué)特征

紅棕象甲受淡紫色擬青霉侵染后，蟲體形態(tài)學(xué)表現(xiàn)如圖1所示。結(jié)果表明，淡紫色擬青霉侵染蟲體后，會(huì)從蟲體表面萌發(fā)出孢子，且以蟲體各體節(jié)結(jié)合處的孢子量相對(duì)較多，主要表現(xiàn)在紅棕象甲喙和頭部連接處、前胸背板和中胸背板連接處、腹部各節(jié)連接縫隙、足基部等位置大量萌發(fā)出淡紫色擬青霉孢子，而在鞘翅、腹節(jié)及背板表面無侵染癥狀。此結(jié)果說明淡紫色擬青霉在侵染紅棕象甲成蟲時(shí)，主要通過體節(jié)連接處的縫隙和薄弱部位侵入蟲體，造成蟲體死亡，但無法對(duì)蟲體鞘翅和堅(jiān)硬的體殼造成傷害。

圖1 淡紫色擬青霉侵染紅棕象甲成蟲的形態(tài)學(xué)特征Fig.1 Morphological characters of R.ferrugineus adults after treated with P.lilacinus

2.2 淡紫色擬青霉對(duì)紅棕象甲成蟲的毒力

不同濃度淡紫色擬青霉處理紅棕象甲96h后校正死亡率如圖2。結(jié)果表明隨著處理濃度的增加，紅棕象甲死亡率呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，即表現(xiàn)出正相關(guān)；同時(shí)以1.0×108個(gè)孢子/mL的淡紫色擬青霉處理紅棕象甲后，試蟲的死亡率也隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，從處理后的48h至144h，紅棕象甲的死亡率從13%升高至約50%。

圖2 淡紫色擬青霉對(duì)紅棕象甲成蟲毒力的濃度相關(guān)性Fig.2 Concentration relationship of P.lilacinus toxicity to R.ferrugineus adults

圖3 淡紫色擬青霉對(duì)紅棕象甲成蟲毒力的時(shí)間相關(guān)性Fig.3 Time relationship of P.lilacinus toxicity to R.ferrugineus adults

2.3 淡紫色擬青霉對(duì)紅棕象甲的毒力

淡紫色擬青霉對(duì)紅棕象甲的毒力分析結(jié)果如表1。結(jié)果表明，經(jīng)不同濃度處理后，淡紫色擬青霉對(duì)紅棕象甲的致死中濃度（LC50）為6.15×108孢子/mL，理論上在此濃度下可造成紅棕象甲成蟲50%種群的死亡；而經(jīng)1.0×108個(gè)孢子/mL濃度的淡紫色擬青霉孢子液處理后，紅棕象甲的致死中時(shí)間（LT50）為140h。

表1 淡紫色擬青霉對(duì)紅棕象甲成蟲的毒力水平Tab.1 Toxicity level of P.lilacinus to R.ferrugineus adults

3 討論

昆蟲病原菌微生物對(duì)紅棕象甲的作用研究國(guó)內(nèi)外已有一些報(bào)道，且多集中在室內(nèi)研究方面，致病微生物包括昆蟲病原線蟲、白僵菌、綠僵菌、昆蟲病原細(xì)菌、昆蟲病毒等不同種類。如Abbas等研究[12]表明，昆蟲病原線蟲Heterorhabditissp.和Steinernemasp.最高可導(dǎo)致紅棕象甲成蟲87%的個(gè)體死亡。Dembilio等[13]將斯式線蟲制成S.carpocapsae殼聚糖制劑防治紅棕象甲，其防效相當(dāng)于內(nèi)吸殺蟲劑吡蟲啉的效果。Ghazavi[14]從紅棕象甲死亡的蟲體上分離出綠僵菌和白僵菌，發(fā)現(xiàn)此兩種病原菌均可成功侵染紅棕象甲的蛹和成蟲。Dangar[15]從感染的紅棕象甲蟲體內(nèi)分離出病原體假單胞桿菌Pseudomonas aeruginosa，致病力測(cè)定結(jié)果表明，在接種量達(dá)到每蟲8×106個(gè)酵母時(shí)能導(dǎo)致試蟲大量死亡。Alfazairy[16]從死亡的紅棕象甲蟲體上分離出蘇云金桿菌亞種kurstaki（Btk）和多角體病毒，經(jīng)制作成懸浮液劑型后，在室內(nèi)測(cè)定試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)紅棕象甲幼蟲的致死率分別達(dá)70%和61%。

該研究結(jié)果表明，昆蟲病原真菌中的淡紫色擬青霉在紅棕象甲成蟲的防控方面具有一定的潛力，其對(duì)紅棕象甲的致死效果與處理時(shí)間和濃度均呈現(xiàn)正相關(guān)趨勢(shì)，LC50和1.0×108個(gè)孢子/mL濃度下的LT50分別為6.15×108孢子/mL和140h，該結(jié)果為紅棕象甲的生物防治資源的收集和利用提供了參考。該研究?jī)H限于室內(nèi)研究，而淡紫色擬青霉對(duì)紅棕象甲的作用機(jī)理、田間應(yīng)用效果、相關(guān)劑型的制作和應(yīng)用技術(shù)等均有待進(jìn)一步研究。