李艷芳 張立偉 王相剛

摘要 ? ?本文對食用菌栽培課程實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)本制作、顯微觀察、培養(yǎng)基容器密封及裝袋接菌種過程中存在的問題進(jìn)行了闡述，并給出了相應(yīng)的解決措施，以提升實(shí)驗(yàn)教學(xué)效果。

關(guān)鍵詞 ? ?食用菌栽培;實(shí)驗(yàn)教學(xué);問題;措施

中圖分類號 ? ?G642 ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 ? ?A

文章編號 ? 1007-5739（2019）18-0238-02 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）

Abstract ? ?The problems in specimen making，microscopic observation，medium container sealing and bagging for the cultivation of edible fungi were expounded in this paper.The corresponding solutions were given to improve the experimental teaching effect.

Key words ? ?edible fungi cultivation;experimental teaching;problem;solution

隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展，產(chǎn)業(yè)對人才的需求量大增，高層次、復(fù)合型食用菌人才愈加緊缺。因此，國內(nèi)很多涉農(nóng)專業(yè)或微生物相關(guān)專業(yè)相繼開設(shè)了食用菌栽培技術(shù)等相關(guān)課程。由于食用菌栽培技術(shù)課程實(shí)踐性強(qiáng)的特點(diǎn)，課程的開設(shè)往往是理論與實(shí)驗(yàn)一體化教學(xué)[1]。各院校在教學(xué)過程中也探索了各種教學(xué)方法[2-3]和教學(xué)模式[4]，并對教學(xué)實(shí)踐中存在的問題進(jìn)行了分析[5]，但對實(shí)驗(yàn)教學(xué)中有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作的問題討論較少。筆者在教學(xué)實(shí)踐中尤其在實(shí)驗(yàn)課程教學(xué)中發(fā)現(xiàn)了一些操作問題。這些問題雖不大，卻阻礙了實(shí)驗(yàn)教學(xué)的順利進(jìn)行。本文對此類問題進(jìn)行了歸類并采取了解決措施，對實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行起到了很好的輔助作用，取得了良好效果。

1 ? ?標(biāo)本制作

1.1 ? ?存在的問題

由于食用菌是大型真菌，屬于微生物學(xué)的分支學(xué)科，食用菌課程現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)教材及參考資料中有關(guān)菌體觀察、菌種分離純化等操作均參考微生物學(xué)中成熟的方法。如在食用菌菌絲及有害雜菌的顯微觀察實(shí)驗(yàn)中，多采用微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的水浸片法、插片法及簡易制片法等。水浸片法是挑取菌落邊緣的菌絲體，小心放在載玻片上再加蓋蓋玻片，然后進(jìn)行光學(xué)顯微觀察。由于菌絲纖細(xì)脆弱的特性，在挑取過程中易破壞菌絲自然生長狀態(tài)，使菌絲變形甚至扭結(jié)斷裂，導(dǎo)致觀察效果很差。插片法在制片過程中易感染其他有害雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。簡易制片法使挑取的菌絲分散開，同樣會破壞菌絲的自然生長狀態(tài)。

1.2 ? ?解決措施

利用培養(yǎng)皿（直徑90 mm或120 mm）培養(yǎng)菌絲體，在向培養(yǎng)皿內(nèi)注入培養(yǎng)基時(shí)較正常量減少至1/3或1/2，使培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿底形成薄層即可。接種待培養(yǎng)菌種時(shí)，待菌落長至培養(yǎng)皿直徑的1/2時(shí)取出，去掉培養(yǎng)皿蓋，直接放置在顯微鏡下，不必加蓋蓋玻片，因利用低倍鏡觀察時(shí)物鏡完全觸碰不到菌絲體表面，可觀察菌絲自然生長狀態(tài)，如觀察時(shí)其他物鏡有影響則可卸掉。也可將培養(yǎng)皿上的菌絲體用刀劃成所需的塊狀，小心移至載玻片上進(jìn)行染色觀察。此種方法不適用于油鏡觀察，只適用于物鏡接觸不到菌絲體表面的顯微觀察。在食用菌生產(chǎn)中，雜菌的觀察與鑒定采用此種方法，效果很理想，都能呈現(xiàn)完整的、自然的菌體形態(tài)結(jié)構(gòu)特征。

2 ? ?培養(yǎng)基容器密封

2.1 ? ?存在的問題

在食用菌實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會涉及培養(yǎng)皿及試管的使用，將固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，封口滅菌后接入菌種，并將培養(yǎng)皿或試管密封后放置在所需環(huán)境下培養(yǎng)。密封培養(yǎng)皿一方面保證無其他雜菌進(jìn)入培養(yǎng)皿內(nèi)引起感染，另一方面防止培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)流失，影響菌物培養(yǎng)效果。一般密封培養(yǎng)皿的方法是利用培養(yǎng)皿密封條進(jìn)行密封，在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中所用密封條數(shù)量較多，價(jià)格也較貴。另外，在食用菌實(shí)驗(yàn)課中裝培養(yǎng)基試管封口一般采用棉花塞，優(yōu)點(diǎn)是廉價(jià)、方便，缺點(diǎn)是試管內(nèi)培養(yǎng)基水分通過棉塞蒸發(fā)過快，使培養(yǎng)基干縮，致使試管菌保存時(shí)間不長，低溫環(huán)境下只有2～3個(gè)月。

2.2 ? ?解決措施

經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，利用保鮮膜作為培養(yǎng)皿密封完全能達(dá)到課程實(shí)驗(yàn)需求。具體用法：將筒形保鮮膜橫截成3～5 cm寬（可根據(jù)培養(yǎng)皿直徑調(diào)整），待培養(yǎng)皿接入菌物完畢蓋上培養(yǎng)皿蓋，一手托起培養(yǎng)皿并保持平放時(shí)狀態(tài)（防止待接菌塊因重力滑落，脫離接菌點(diǎn)），另一手用保鮮膜將培養(yǎng)皿蓋與底環(huán)繞密封，環(huán)繞時(shí)稍用力，利用保鮮膜的粘附性使其粘附在培養(yǎng)皿體上，并可根據(jù)培養(yǎng)皿直徑確定纏繞圈數(shù)。經(jīng)此密封的培養(yǎng)皿完全適宜菌類培養(yǎng)物的培養(yǎng)需求，選擇保鮮膜時(shí)注意選擇韌性和粘附性較好的產(chǎn)品，該法同樣適用于其他需要培養(yǎng)皿密封培養(yǎng)的場合。利用棉塞封口培養(yǎng)試管菌種時(shí)，也可將試管口和棉塞部分利用保鮮膜纏繞，可有效延緩因水分透過棉塞蒸發(fā)而使培養(yǎng)基干枯，延長試管菌種的保藏期至3～6個(gè)月。由于保鮮膜廉價(jià)、易購、使用方便，因而應(yīng)用廣泛。

3 ? ?標(biāo)本顯微觀察

3.1 ? ?存在的問題

在食用菌實(shí)驗(yàn)課程中需要進(jìn)行食用菌菌絲、孢子的形態(tài)和結(jié)構(gòu)顯微觀察，影響食用菌生長的雜菌以及病蟲害鑒定時(shí)也需要進(jìn)行顯微結(jié)構(gòu)觀察，觀察設(shè)備以光學(xué)顯微鏡為主。由于觀察的樣本數(shù)量較多，需要不停用眼，長時(shí)間集中觀察致使眼睛疲勞，而且普通光學(xué)顯微鏡觀察到的圖像無法進(jìn)行保存。

3.2 ? ?解決措施

經(jīng)過查閱資料，網(wǎng)購電子目鏡數(shù)碼產(chǎn)品，直接代替顯微鏡目鏡。其工作過程是在顯微鏡目鏡筒上安裝電子目鏡，調(diào)整物鏡將顯微鏡下的圖像通過USB數(shù)據(jù)線傳輸?shù)诫娔X，觀察者通過電腦顯示器進(jìn)行標(biāo)本觀察。不僅能夠減輕眼疲勞，并且可以通過該類產(chǎn)品提供的軟件對標(biāo)本進(jìn)行拍照、攝像等功能，還可以對照片進(jìn)行編輯，例如對照片中的特定目標(biāo)進(jìn)行測量、標(biāo)注等。同時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)多人同時(shí)通過計(jì)算機(jī)顯示器觀察，單位時(shí)間內(nèi)可觀察的標(biāo)本數(shù)量更多，更可對觀察到的照片及某些目標(biāo)的動(dòng)態(tài)等進(jìn)行永久保存。此類數(shù)碼產(chǎn)品使用便捷，相當(dāng)于將普通光學(xué)顯微鏡升級成為簡易數(shù)碼顯微鏡，唯一缺點(diǎn)是觀察時(shí)需連接計(jì)算機(jī)。此類數(shù)碼產(chǎn)品完全能滿足教學(xué)與精度不高的科研需求，具有小巧、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)，可拓展至任何適宜光學(xué)顯微鏡觀察的實(shí)驗(yàn)操作中。如對放大倍數(shù)要求不高且需外出時(shí)使用也可購買手機(jī)版微型顯微鏡，安裝于手機(jī)攝像頭位置，在手機(jī)上即可觀察目標(biāo)物體的微觀狀態(tài)。

4 ? ?裝袋接菌種

4.1 ? ?存在的問題

在食用菌栽培實(shí)驗(yàn)中，由于受教學(xué)場地、原材料等條件限制，經(jīng)常會用到比實(shí)際生產(chǎn)中直徑小且短的各種規(guī)格小菌袋，在進(jìn)行裝袋操作時(shí)無法利用裝袋機(jī)進(jìn)行機(jī)器裝袋（或受場地限制無法購買裝袋機(jī)），只能進(jìn)行手工裝袋。許多食用菌相關(guān)的科研實(shí)驗(yàn)為了精準(zhǔn)稱量也會進(jìn)行手工裝袋操作。由于菌袋直徑小，導(dǎo)致手工填裝培養(yǎng)料操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力，很不方便。

在超凈工作臺轉(zhuǎn)接試管菌種是實(shí)驗(yàn)中最常見的操作，接種過程中菌種試管口需傾斜放置使試管口朝向酒精燈火焰方向，以保持母種試管口呈無菌狀態(tài)，避免試管菌感染。實(shí)驗(yàn)室鐵架臺配加試管夾可滿足需求，但每次操作需擰動(dòng)螺絲且鐵架臺占據(jù)空間大，移動(dòng)和轉(zhuǎn)換過程中有諸多不便。

4.2 ? ?解決措施

用改裝的礦泉水瓶可解決以上問題。具體做法：將空礦泉水瓶（塑料材質(zhì)，500 mL，帶蓋）瓶底剪除，使瓶身呈漏斗型，再將漏斗剪成一側(cè)比另一側(cè)低的形狀。加蓋瓶蓋后便成為一個(gè)簡單方便又經(jīng)濟(jì)實(shí)用的裝料小工具，比購買的勺鏟等工具更適合裝料入菌袋。

利用空礦泉水瓶還可實(shí)現(xiàn)對試管菌種的固定操作。具體方法：用塑料袋裝細(xì)沙扎緊并裝入空的礦泉水瓶內(nèi)（裝沙容量為瓶容積的1/2），以便使瓶身站立時(shí)更穩(wěn)定，在瓶身上方對向兩側(cè)用常用規(guī)格的空試管燙孔，燙孔時(shí)將試管底部在酒精燈火焰上加熱，用灼熱的試管底將礦泉水瓶身上部對側(cè)方向上燙出孔洞（燙孔前選好試管傾斜的角度），以適宜試管傾斜穿過瓶身，即可實(shí)現(xiàn)對試管的固定，并可隨意進(jìn)行試管朝向轉(zhuǎn)動(dòng)、穿入方向上移動(dòng)等操作。使用時(shí)將母種試管穿入孔洞中，使試管口朝向酒精燈火焰方向即可。一般實(shí)驗(yàn)中使用的試管規(guī)格是固定的，能長期使用，也可在瓶身不同高度上穿孔使一個(gè)瓶體滿足不同規(guī)格試管的使用需求。

5 ? ?結(jié)語

根據(jù)教學(xué)實(shí)踐，總結(jié)出幾種簡單實(shí)用方法，在食用菌栽培課程的應(yīng)用中，有些方法中材料的選用或就地取材或物美價(jià)廉，滿足了實(shí)驗(yàn)的需要，反饋結(jié)果好。在實(shí)驗(yàn)中既減輕了學(xué)生的負(fù)擔(dān)，又加快了實(shí)驗(yàn)進(jìn)度，使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。在實(shí)際應(yīng)用中學(xué)生們也體會到一些看似不起眼的方法，往往能達(dá)到事半功倍的效果，直接激發(fā)學(xué)生勤思考，用簡單易行的方法達(dá)到理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)。今后在實(shí)踐教學(xué)中還將繼續(xù)深入探索，為實(shí)驗(yàn)和科研做好基礎(chǔ)工作。

6 ? ?參考文獻(xiàn)

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