張 婷 郭穎昕 劉彩鳳 李德祥

上海上藥中西制藥有限公司 （上海 201800）

鹽酸氟西汀又名百憂解，即（±）-N-甲基-3-苯基-3（4-三氟甲基苯氧基）丙胺鹽酸鹽（C17H18F3NO·HCl），其化學結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 鹽酸氟西汀的化學結(jié)構(gòu)

鹽酸氟西汀是一種具有選擇性的神經(jīng)遞質(zhì)抑制劑（SSRI），其對于神經(jīng)遞質(zhì) 5-羥色胺（5-HT）的存在十分敏感，能夠準確地抑制神經(jīng)元細胞興奮并從突觸間隙中捕捉攝取5-HT，這極有效地增加了間隙中神經(jīng)遞質(zhì)的數(shù)量，繼而延長和增加了5-羥色胺的作用，從而達到改善、糾正情感狀態(tài)，治療抑郁性精神障礙的目的。鹽酸氟西汀的臨床療效與三環(huán)類抗抑郁藥相當，但不良反應輕微，安全性高，服用方便，深受醫(yī)生和患者的青睞。

為了進一步控制上海上藥中西醫(yī)制藥有限公司產(chǎn)品鹽酸氟西汀膠囊的質(zhì)量，參考國內(nèi)外相關(guān)文獻材料，系統(tǒng)地研究分析了鹽酸氟西汀有關(guān)物質(zhì)的測定，并采用C8色譜柱、利用反相高效液相色譜建立了鹽酸氟西汀有關(guān)物質(zhì)的測定方法。實驗結(jié)果證實該方法具有良好的專屬性、耐用性、穩(wěn)定性，以及較高的靈敏度，進一步說明該法適用于鹽酸氟西汀產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)項的檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器

SOTAX溶出試驗儀，香港力揚企業(yè)有限公司；AL104電子天平、S20精密pH計，梅特勒-托利多國際貿(mào)易有限公司；Agilent 1200，1260型全自動高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司。

1.2 試劑

三乙胺、四氫呋喃，色譜純，國藥集團化學試劑有限公司；甲醇，色譜純，賽默飛世爾科技公司；磷酸，分析純，太倉滬試試劑有限公司。

1.3 標準品

實驗過程中所使用的標準品信息如表1所示。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件

用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent Zorbax Eclipse Plus C8，4.6 mm×250mm×5μm 或效能相當?shù)纳V柱）；以三乙胺緩沖溶液（取三乙胺10 mL，加水980 mL，搖勻，加磷酸適量調(diào)節(jié)pH至6.0，用水稀釋到 1000mL）-甲醇-四氫呋喃（體積比為 62∶8∶30 ）為流動相，等度洗脫；洗脫流速為1.0 mL/min；柱溫箱溫度為25℃；紫外線檢測波長為215 nm。

表1 標準品信息

1.4.2 溶液的配制

1.4.2.1 系統(tǒng)適用性溶液的制備

取鹽酸氟西汀約22 mg，置于具塞試管中，加0.5 mol/L硫酸溶液10 mL，85℃水浴3 h，放冷，此溶液中含有鹽酸氟西汀雜質(zhì)Ⅰ和雜質(zhì)Ⅱ；取上述溶液0.4 mL，置于25 mL容量瓶中，分別取鹽酸氟西汀約28 mg與雜質(zhì)Ⅳ對照品約1 mg，置于上述25 mL容量瓶中，加入流動相溶解并稀釋到刻度，即得系統(tǒng)適用性溶液。

1.4.2.2 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物適量 （約相當于氟西汀50 mg），置于25 mL量瓶中，加入適量流動相，充分振搖并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.4.2.3 對照溶液的制備

精密量取5 mL，置于50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL置于100 mL量瓶中，加入流動相，稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

1.4.2.4 靈敏度溶液的制備

精密量取對照溶液25 mL，置于100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為靈敏度溶液。

1.4.2.5 測定方法

分別取系統(tǒng)適用性溶液和靈敏度溶液各10μL注入高效液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度使主成分峰高的信噪比大于10，并考察分離度。再取對照溶液與供試品溶液10μL，分別注入高效液相色譜儀記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍，采用自身對照法計算供試品中雜質(zhì)含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 系統(tǒng)適用性試驗

取系統(tǒng)適用性溶液10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果如表3所示。在有關(guān)物質(zhì)色譜條件下，理論板數(shù)按氟西汀計為3093，雜質(zhì)Ⅰ、雜質(zhì)Ⅳ、氟西汀、雜質(zhì)Ⅱ峰間的分離度分別為26.12，1.54和22.22，說明該法色譜條件分離效果良好。

表2 鹽酸氟西汀有關(guān)物質(zhì)系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果

2.2 檢測限（LOD）和定量限（LOQ）試驗

精密稱取0.0223 g鹽酸氟西汀原料置于200 mL量瓶中，加入流動相溶解稀釋到刻度，搖勻，作為鹽酸氟西汀貯備液。稱取約5 mg雜質(zhì)Ⅳ置于25 mL量瓶中，加入流動相溶解稀釋到刻度，搖勻，作為雜質(zhì)Ⅳ貯備液。繼續(xù)用流動相稀釋成一系列質(zhì)量濃度的溶液，搖勻，精密量取10μL，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，以主成分峰的峰高與基線噪音的信噪比約為10時的質(zhì)量濃度為定量限；將定量限質(zhì)量濃度稀釋3倍后，此時儀器的信噪比約為3，為檢測限。

表3 鹽酸氟西汀有關(guān)物質(zhì)檢測限與定量限ng/mL

由表3可以看出，在上述色譜條件下，鹽酸氟西汀的檢測限為1.003 5 ng/mL，定量限為3.4565 ng/mL，鹽酸氟西汀雜質(zhì)IV的檢測限為2.5600 ng/mL，定量限為7.4400 ng/mL。

2.3 專屬性試驗

通過利用高溫、45000 lx照射、氧化、強酸、強堿等嚴苛條件對供試樣品進行加速破壞，以研究可能存在的分解途徑及產(chǎn)物，同時考察方法的專屬性。

取本品內(nèi)容物適量，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加入適量流動相，充分振搖，加入流動相稀釋到刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液適量即得未破壞供試品溶液。在上述色譜條件下，精密量取各破壞條件下的溶液10μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果如表4所示。

表4 鹽酸氟西汀有關(guān)物質(zhì)專屬性試驗結(jié)果

由表4可知，各破壞條件下產(chǎn)生的雜質(zhì)極其微量，主峰純度幾乎不受干擾，可見該色譜條件專屬性較強。

再取空白輔料適量，采用上述樣品專屬性試驗方法，對空白輔料用45000lx照射、高溫、強酸、強堿和氧化進行一系列加速破壞，處理后的樣品取10μL續(xù)濾液注入液相色譜儀。結(jié)果表明，在該條件下，輔料不干擾樣品的檢查。

2.4 線性試驗

2.4.1 鹽酸氟西汀

取鹽酸氟西汀原料0.0538 g，置于25 mL容量瓶中，用流動相稀釋制成一系列質(zhì)量濃度的溶液，在有關(guān)物質(zhì)色譜條件下，分別精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標進行線性回歸，結(jié)果如圖2所示。根據(jù)上述試驗結(jié)果，在1.7216～6.8864μg/mL范圍內(nèi)，鹽酸氟西汀質(zhì)量濃度與峰面積呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)R2=0.9998，表明相關(guān)性很好。

圖2 鹽酸氟西汀線性回歸曲線

2.4.2. 雜質(zhì)Ⅳ

精密稱取雜質(zhì)Ⅳ約5 mg，置于20 mL量瓶中，用流動相稀釋制成一系列質(zhì)量濃度的溶液，在有關(guān)物質(zhì)色譜條件下，分別精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按上述同法進行線性回歸，結(jié)果如圖3所示，其回歸方程為y=23018x+2.8238，說明在16～48μg/mL范圍內(nèi)，鹽酸氟西汀質(zhì)量濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

圖3 雜質(zhì)Ⅳ線性回歸曲線圖

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

取本品內(nèi)容物適量(約相當于氟西汀50 mg)，按有關(guān)物質(zhì)測定法制備供試品溶液、對照溶液，在室溫條件下分別放置0,4,7,10,13,16,19及22 h，在各時間點分別精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，觀察供試品溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果如表5所示。

表5 鹽酸氟西汀有關(guān)物質(zhì)溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果

由表5可知，不同時間下主峰峰面積的相對標準偏差（RSD）為0.19%，測定結(jié)果沒有顯著變化，表明供試品溶液在室溫條件下22 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復性試驗

取本品適量，按上述方法制備供試品溶液以及對照溶液。同法操作6份，按上述方法檢查有關(guān)物質(zhì)，經(jīng)計算，平均雜質(zhì)總量為0.06%，RSD為8.15%，說明該測定方法具有優(yōu)異的重復性。

2.7 準確度試驗

分別精密稱取雜質(zhì)Ⅳ和鹽酸氟西汀工作用對照品各適量，按處方量分別加入輔料；雜質(zhì)Ⅳ和鹽酸氟西汀均設計3個不同的質(zhì)量濃度（分別為80%、100%、120%），制成每1 mL分別約含雜質(zhì)Ⅳ32，40，48μg和鹽酸氟西汀3.576，4.47，5.364μg的混合溶液。每個質(zhì)量濃度分別配制3份供試品溶液，按上述方法進行回收率測定。

測定結(jié)果為：雜質(zhì)Ⅳ的平均回收率達到100.22%，RSD為0.2%，鹽酸氟西汀的平均回收率達到100.34%，RSD為0.6%。該結(jié)果表明該方法的準確度高，也進一步證實了其精確性與可靠性。

2.8 耐用性試驗

每次只改變一個色譜條件，取同一批供試品溶液分別精密量取10μg，注入液相色譜儀，記錄色譜圖以考察本品的耐用性，結(jié)果如表6所示。

由實驗結(jié)果可知，進樣流速、流動相體積比、色譜柱品牌等均不影響主藥的測定，表明該方法的系統(tǒng)耐用性良好。

表6 鹽酸氟西汀有關(guān)物質(zhì)耐用性試驗結(jié)果

3 結(jié)語

以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑[Agilent Zorbax Eclipse Plus C8（4.6 mm×250 mm×5μm）或效能相當?shù)纳V柱]；以三乙胺緩沖溶液-甲醇-四氫呋喃（體積比為 62∶8∶30）作為流動相，建立反相高效液相色譜法對鹽酸氟西汀膠囊有關(guān)物質(zhì)進行檢測。該法靈敏度高、專屬性強、雜質(zhì)分離效果好、耐用性優(yōu)異、藥物質(zhì)量濃度與峰面積相關(guān)性顯著，處方中輔料不干擾兩種藥物含量的測定，且操作簡便、檢測迅速、準確度高，適用于鹽酸氟西汀有關(guān)物質(zhì)的檢測。

參考文獻（略）