余夢瑤 顧敏 趙鴻

染色體疾病是由于染色體數(shù)目或者結(jié)構(gòu)異常引起的疾病。對高危人群進(jìn)行染色體核型分析是一個重要的遺傳學(xué)檢查手段，對臨床診斷及指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育有重要意義?，F(xiàn)對近10年來院就診的1 776例南京居民患者進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞染色體核型分析，旨在分析和評估其與南京地區(qū)常住人口染色體病分布情況關(guān)系。

1 對象和方法

1.1 對象

收集2006年1月至2016年1月間由醫(yī)生開具染色體檢查項(xiàng)目，來院進(jìn)行常規(guī)染色體檢查的南京地區(qū)居民共計1 776人的肝素鋰抗凝外周血。其中，男性1 124人，占 63.3%（1 124/1 176），女性 652人，占36.7%（652/1 176），受檢者年齡分布在12～45歲之間。

1.2 方法

1.2.1 外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及染色體制備

無菌條件下抽取肝素鋰抗凝外周血2 mL，上下顛倒混勻。吸取1 mL加入淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基（達(dá)暉生物），培養(yǎng)72 h。收獲前2.5 h加入10 μg/mL的秋水仙素150 μL/每瓶。2 500轉(zhuǎn)離心10 min棄上清，加入0.075 mol/L KCL溶液9 mL，重懸沉淀。37℃水浴15 min。加入新鮮配置固定劑（甲醇∶乙酸=3∶1）1 mL混勻。2 500 r離心10 min棄上清，加入固定劑10 mL室溫靜置10 min，2 500轉(zhuǎn)離心10 min。重復(fù)固定一次。棄上清液，加入適量固定劑調(diào)成適宜濃度的細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液滴在預(yù)冷的潔凈濕片上，放烤箱80℃烘烤4 h，自然冷卻。

1.2.2 G顯帶

玻片置入0.05%胰酶消化60 s。流水沖凈，Giemsa（Sigma）染色顯帶。按照人類細(xì)胞遺傳學(xué)命名國際體系（ISCN 2013）統(tǒng)計染色體核型。

2 結(jié)果

2.1 280例異常核型分布情況

1 776例樣本中共檢出染色體核型異常280例，占15.76%（280/1 776）。其中常染色體數(shù)目異常26例，占異常染色體核型的1.46%（26/1 776）；常染色體結(jié)構(gòu)異常33例，占異常染色體核型的1.86%（33/1 776）；性染色體數(shù)目異常140例，占異常染色體核型的7.88%（140/1 776）；性染色體結(jié)構(gòu)異常29例，占異常染色體核型的1.63%（29/1 776）；性別扭轉(zhuǎn)39例，占異常染色體核型的2.20%（39/1 776）；嵌合體13例，占異常染色體核型的0.73%（13/1 776）。如表1所示，染色體數(shù)目異常者中，最為常見的核型為47，XXY，占染色體數(shù)目異?？倲?shù)的56.02%（93/166）；其他比較常見核型分別為45，XO，占 22.89%（38/166）；47，XY+21，占12.05%（20/166）；染色體結(jié)構(gòu)異常者的主要核型分別為：46，X，i（Xq），占結(jié)構(gòu)異常總數(shù)的12.90%（8/62）；45，XY，rob（13；14），占 8.06%（5/62）；46，X，i（Xp），占 9.68%（6/62）。性別扭轉(zhuǎn)或性分化異常（男：46，XX；女：46，XY）共計39例，占異常核型總數(shù)13.93%（39/280）。嵌合體中，常見異常核型為45，XO/46i（Xq），占異?？倲?shù)的2.14%（6/280）。其他比較罕見的染色體異常核型詳見表1，約占染色體異?？倲?shù)的23.21%（65/280）。

表1 280例異常染色體核型及其分布［n（%）］Table 1 Distribution of 280 abnormal chromosome karyotype［n（%）］

2.2 核型異?；颊叩闹饕R床表現(xiàn)

男性受檢者中，臨床診斷為第二性征發(fā)育不良者共計460例，導(dǎo)致其異常的主要核型為47，XXY（11.74%）、46，XX（1.30%）和 45，XY，rob（13；14）（0.65%）；弱/無精癥患者312例，檢出的異常核型主要 為 47，XXY（6.73%）和 45，XY，rob（13；14）（1.28%）；智力低下患者19例，主要核型為47，XY+21（73.68%）；兩性畸形者 15例，核型為 46，XX（40.00%）。女性受檢者中，臨床診斷為原發(fā)閉經(jīng)者共計156例，異常核型主要為45，XO（12.18%）、46，XY（5.13%）和46，X，i（Xq）（3.85%）；第二性征發(fā)育不良者128例，其染色體核型大部分正常；矮小、遲緩發(fā)育者131例，主要異常核型為45，XO（7.63%）；兩性畸形者14例，異常核型為46，XY（71.43%）。

表2 常見染色體核型異常者臨床表現(xiàn)與核型分類及異常檢出率［n（%）］Table 2 Clinical manifestations，karyotype classification and abnormal detection rate of common chromosomal karyotype abnormalities［n（%）］

3 討論

遺傳咨詢患者中經(jīng)常出現(xiàn)的染色體異常包括染色體數(shù)目異常、染色體結(jié)構(gòu)異常及嵌合體等［1-2］。染色體異常又是導(dǎo)致染色體病的重要因素［3］。染色體病可造成患者的畸形和殘疾，或者出現(xiàn)多器官、多系統(tǒng)功能異常等［4］，危害患者身心健康，也會給社會家庭帶來壓力與經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前臨床上尚未有有效的染色體病治療方法，進(jìn)行染色體核型分析結(jié)合臨床表現(xiàn)可以明確病因，為臨床診斷、遺傳咨詢及優(yōu)生優(yōu)育等提供重要依據(jù)及指導(dǎo)意義。

本次研究中對南京地區(qū)1 776例患者進(jìn)行了細(xì)胞遺傳學(xué)分析，共檢測出染色體異常280例，異常率為15.76%，顯著高于一般人群染色體異常頻率5%［5］，這可能與本研究剔除了多態(tài)性核型相關(guān)；此外，此次研究核型異常率也高于周靜等［6］2012年對南京地區(qū)核型異常率（6.37%），可能與兩者研究抽樣人群、樣本量及檢測技術(shù)的進(jìn)步相關(guān)；但本研究異常率與柯買春［7］2019年對九江地區(qū)的研究異常率（11.9%）接近，表明染色體核型異常為遺傳咨詢患者中常見病因。

本文中染色體異常以性染色體數(shù)目異常為主，占比50%，其次為性別扭轉(zhuǎn)、常染色體結(jié)構(gòu)異常、性染色體結(jié)構(gòu)異常和常染色體數(shù)目異常，嵌合體比例最低。性染色體數(shù)目異常又以47，XXY為主，占性染色數(shù)目異常的66.43%（93/140），與邱惠國等研究結(jié)果相符［5］；47，XXY 稱為克氏綜合征，本研究的460例第二性征不良和312例弱/無精癥男性受檢者中，檢出75例，表明該核型異常發(fā)生頻率高，應(yīng)通過染色體檢查，為患者的診斷和治療提供指導(dǎo)性依據(jù)。而女性染色體數(shù)目異常則以45，XO為主，即特納氏綜合征（Turner syndrome，Turner's綜合征），占比為27.14%（38/140）。Turner's綜合征臨床表現(xiàn)為身材矮小、第二性征發(fā)育不良、閉經(jīng)等，本研究在156例原發(fā)性閉經(jīng)患者中檢出19例（12.18%），在128例第二性征發(fā)育不良患者中檢出1例（0.78%）；在131例矮小、發(fā)育遲緩患者中檢出10例（7.63%），與王新紅［8］等人的研究結(jié)果一致。性別扭轉(zhuǎn)是指社會性別為女性，而染色體核型46，XY；以及社會性別為男性，而染色體核型為46，XX。本研究中共檢出性別扭轉(zhuǎn)39例（2.20%），性別扭轉(zhuǎn)可能導(dǎo)致性別應(yīng)有性征不明顯，比如：XY女性出現(xiàn)原發(fā)閉經(jīng)、陰毛稀少及腹股溝包塊等；男性出現(xiàn)乳房發(fā)育、陰囊小及喉結(jié)不明顯等［9］。本次研究中，檢出常染色體結(jié)構(gòu)異常33例（1.86%），其中羅伯遜易位核型12例，又以13、14號染色體易位為主，占比高達(dá)75%（9/12），與陳春等［10］研究結(jié)果相符。羅伯遜易位表型一般正常，但其易位原理決定了其不能產(chǎn)生配子或?qū)е绿毫鳟a(chǎn)或死胎［7］。本研究臨床診斷為第二性征發(fā)育不良患者中檢出羅伯遜易位3例，弱/無精癥4例。因此，十分有必要對于這類患者進(jìn)行染色體核型分析指導(dǎo)生育，以達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的。本次研究中嵌合體檢出占比為0.73%，比例較低，可能由于核型分析檢測技術(shù)分辨率有限，且嵌合體可因其嵌合比例的不同從而導(dǎo)致臨床表型的嚴(yán)重程度不同，因此，或許可以聯(lián)合其他比較先進(jìn)的分子診斷技術(shù)進(jìn)行檢測，為臨床提供更全面準(zhǔn)確的診斷依據(jù)及咨詢指導(dǎo)。

染色體核型分析是一種重要的遺傳學(xué)檢查手段，具有不可替代的臨床價值。然而，傳統(tǒng)的染色體核型分析技術(shù)易受環(huán)境因素影響，且其分辨率不高，對于小于10 Mb片段的缺失或重復(fù)難以檢出，這些缺陷均在一定程度上限制了其臨床應(yīng)用［11］。近年來，隨著分子檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，染色體微陣列分析技術(shù)、比較基因組分析、光譜核型分析等基因檢測技術(shù)的普及使得能夠?qū)蜻M(jìn)行精細(xì)定位，從而明確染色體復(fù)雜結(jié)構(gòu)異常的具體發(fā)病機(jī)制，提高了染色體病的確診率，為指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育、預(yù)防、診斷及治療染色體病提供更為全面準(zhǔn)確的依據(jù)。

接下來的研究將結(jié)合傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳染色體核型分析技術(shù)與FISH、CMA等多種分子遺傳學(xué)技術(shù)，提高對因染色體疾病導(dǎo)致不孕不育的確診率。筆者將進(jìn)行跟蹤隨訪，并檢測部分弱精患者外周血DNA中相關(guān)基因甲基化水平。相信新的研究不僅能為不育男性找出可能病因，也助于其選擇更加合適的輔助生育治療方式，因此對高危人群進(jìn)行染色體檢查是非常有必要的。