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      EGCG對電離輻射所致豚鼠聽功能和耳蝸毛細胞損傷的影響

      2019-12-02 12:56:46徐亞雄羅香林豐俊李楚凌
      中國實用醫(yī)藥 2019年29期
      關鍵詞:電離輻射毛細胞豚鼠

      徐亞雄 羅香林 豐俊 李楚凌

      【摘要】 目的 探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對電離輻射所致豚鼠聽功能和耳蝸毛細胞損傷的保護作用。方法 24只豚鼠, 按照隨機數(shù)字表法分為對照組、EGCG+輻射組及輻射組, 每組8只。EGCG+輻射組及輻射組于造模前3 d開始腹腔注射EGCG(25 mg/1000 g)及等量的生理鹽水,?2次/d;對照組不做任何處理。在照射前第4天及照射后第8天檢測所有豚鼠的聽覺腦干誘發(fā)電位(ABR)閾值, 照射8 d后于顯微鏡下計數(shù)毛細胞數(shù)量。比較三組的ABR閾值檢測結果、耳蝸鋪片及細胞計數(shù)。結果 干預后8 d, EGCG+輻射組ABR閾值(38.1±3.3)dB低于輻射組的(49.4±8.6)dB, 差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);干預后8 d, EGCG+輻射組和輻射組的ABR閾值與干預前4 d的(19.3±5.5)、(21.0±3.7)dB對比明顯升高, 差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。輻射組實驗動物的耳蝸毛細胞數(shù)量降低, 形態(tài)改變, 排列雜亂不齊, 造模成功;EGCG+輻射組顯微鏡鏡檢表明耳蝸毛細胞數(shù)與對照組相比有所降低, 排列較為雜亂, 但與輻射組相比形態(tài)結構較好。對照組耳蝸毛細胞計數(shù)為(1102.23±80.55)個, EGCG+輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)為(758.56±143.27)個, 輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)為(527.00±165.23)個, EGCG+輻射組、輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)均低于對照組, 輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)低于EGCG+輻射組, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論 對豚鼠預防性注射EGCG能夠有效降低電離輻射對聽功能和耳蝸毛細胞損傷作用, 對電離輻射所致的聽力損傷具有一定的防護作用。

      【關鍵詞】 表沒食子兒茶素沒食子酸酯;電離輻射;豚鼠;聽功能;耳蝸毛細胞

      DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.29.111

      目前, 臨床針對惡性腫瘤的治療, 已經(jīng)逐漸將電離輻射作為常用治療手段, 但是在治療的過程中, 該治療手段容易對患者造成一定負性影響, 如導致其細胞、非靶組織出現(xiàn)嚴重受損的情況。其中對于頭頸部腫瘤患者來說, 在進行放射治療中最為常見的一種并發(fā)癥便是感音性耳聾(SNHL)。且目前已有相關研究表明輻射對耳蝸毛細胞具有損傷作用, 能夠改變毛細胞的形態(tài)[1]。綠茶提取物——EGCG的化學結構中存在較多的酚羥基, 具有較強的抗氧化能力[2];EGCG能夠通過抑制炎性因子及纖維化調節(jié)因子等轉錄分泌, 緩解肝臟中CCl4所導致的氧化應急反應[3]。因此, 抗氧化劑EGCG對電離輻射所致的耳蝸損傷的作用具有較高的研究價值。

      1 材料與方法

      1. 1 材料 選取24只雄性健康成年豚鼠作為研究對象, 體重300~350 g, 耳廓反射檢查正常, 由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供;按照隨機數(shù)字表法分為對照組、EGCG+輻射組及輻射組, 每組8只。

      1. 2 實驗方法

      1. 2. 1 耳蝸損傷模型的建立 EGCG+輻射組及輻射組采用10%水合氯醛麻醉后, 固定于鼠板上, 采用自制的“U”形夾頭鉛板遮蔽豚鼠非處理部分, 60Co遠距離治療機對實驗動物進行一次性的60Co照射70 Gy, 照射深度為2.0 cm, 照射范圍以耳蝸為中心的2 cm×2 cm范圍內;對照組豚鼠不做處理。輻射組檢測ABR閾值高于對照組則表明耳蝸損傷模型造模成功。

      1. 2. 2 給藥方法 EGCG+輻射組及輻射組于造模前3 d開始腹腔注射EGCG(25 mg/1000 g)及等量的生理鹽水, 2次/d;對照組不做任何處理。

      1. 2. 3 ABR檢測 在照射前第4天及照射后第8天檢測所有豚鼠的ABR, 采用10%水合氯醛麻醉。以實驗動物顱頂正中皮下作為正極, 給聲側耳廓后作為負極。對實驗動物進行以2000 Hz為主的短聲進行刺激, 刺激間隔時間為90 ms, 帶通濾波50~3000 Hz, 共刺激200次, 掃描時程為20 ms。聲波開始強度以95 dB開始, 并以5 dB為梯度逐漸降低, 觀察P3波以確定實驗動物兩耳的ABR閾值。

      1. 2. 4 耳蝸鋪片觀察毛細胞組織結構及計數(shù) 照射8 d后刺死動物同時取右側聽泡打開, 于蝸尖處開孔, 以暴露卵圓窗和圓窗。蝸尖采用0.5%的硝酸銀溶液沖洗2~3次, 隨后采用10%的多聚甲醛灌入后日光下曝光2~3 h, 取基底膜于100倍光鏡下觀察毛細胞組織結構及計數(shù), 由底回段到頂回段逐級計數(shù), 計數(shù)各回段每排毛細胞在單位長度內的個數(shù), 各回段計數(shù)總和即為毛細胞總數(shù)。

      1. 3 觀察指標 比較三組的ABR閾值檢測結果、耳蝸鋪片及細胞計數(shù)。

      1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 采用LSD-t檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

      2 結果

      2. 1 三組ABR閾值檢測結果對比 干預后8 d, EGCG+輻射組ABR閾值(38.1±3.3)dB低于輻射組的(49.4±8.6)dB, 差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);干預后8 d, EGCG+輻射組與輻射組的ABR閾值與干預前4 d的(19.3±5.5)、(21.0±3.7)dB對比明顯升高, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

      2. 2 三組耳蝸鋪片及細胞計數(shù)對比 耳蝸鋪片顯微鏡計數(shù)檢查表明, 輻射組實驗動物的耳蝸毛細胞數(shù)量降低, 形態(tài)改變, 排列雜亂不齊, 造模成功;EGCG+輻射組顯微鏡鏡檢表明耳蝸毛細胞數(shù)與對照組相比有所降低, 排列較為雜亂, 但與輻射組相比形態(tài)結構較好。對照組耳蝸毛細胞計數(shù)為(1102.23±80.55)個, EGCG+輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)為(758.56±143.27)個, 輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)為(527.00±165.23)個, EGCG+輻射組、輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)均低于對照組, 輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)低于EGCG+輻射組, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

      3 討論

      放射治療是現(xiàn)階段鼻咽癌、腮腺癌等頭頸部惡性腫瘤使用較多的常規(guī)治療方式, 主要放射治療區(qū)域包括耳在內的顳骨區(qū)。在針對患者進行臨床治療時, 患者存在不同程度的聽力降低情況, 通過進行動物實驗發(fā)現(xiàn)常規(guī)治療劑量的放射線, 便會對內耳耳蝸造成一定程度損傷, 導致患者聽力下降[4], 另外相關研究進一步證明, 內耳損傷的程度與放射劑量相關, 現(xiàn)階段多認為放射劑量達到60 Gy時即可導致內耳出現(xiàn)損傷, 為頭頸部惡性腫瘤最常見的并發(fā)癥之一, 現(xiàn)階段臨床中多以50 Gy為內耳損傷的劑量臨界值[5]。EGCG為茶多酚中抗氧化作用最高的成分之一, 該物質的化學結構中富含酚羥基, 其抗氧化能力為超氧化物歧化酶的6倍、維生素E的20倍, 具有較強的抗炎、清除機體自由基以及對神經(jīng)系統(tǒng)的保護等多種作用[6]。

      本研究采用EGCG對電離輻射大鼠進行干預, 結果表明:干預后8 d, EGCG+輻射組ABR閾值(38.1±3.3)dB低于輻射組的(49.4±8.6)dB, 差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);干預后8 d, EGCG+輻射組和輻射組的ABR閾值與干預前4 d的(19.3±5.5)、(21.0±3.7)dB對比明顯升高, 差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。輻射組實驗動物的耳蝸毛細胞數(shù)量降低, 形態(tài)改變, 排列雜亂不齊, 造模成功;EGCG+輻射組顯微鏡鏡檢表明耳蝸毛細胞數(shù)與對照組相比有所降低, 排列較為雜亂, 但與輻射組相比形態(tài)結構較好。對照組耳蝸毛細胞計數(shù)為(1102.23±80.55)個, EGCG+輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)為(758.56±143.27)個, 輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)為(527.00±165.23)個, EGCG+輻射組、輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)均低于對照組, 輻射組耳蝸毛細胞計數(shù)低于EGCG+輻射組, 差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

      綜上所述, 對豚鼠預防性注射EGCG能夠有效降低電離輻射對聽功能和耳蝸毛細胞損傷作用, 對電離輻射所致的聽力損傷具有一定的防護作用。

      參考文獻

      [1] 楊襯, 張威, 劉小龍, 等. 單次不同放射線劑量和時間對Balb/c小鼠耳蝸顯微和超微結構的影響. 臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志, 2014, 28(13):979-982.

      [2] 劉婷婷, 孟馨. 表沒食子兒茶素沒食子酸酯抗氧化作用機制的研究進展. 現(xiàn)代藥物與臨床, 2016, 31(6):919-923.

      [3] 羅可望, 龍穎妍, 黃衛(wèi)人. 表沒食子兒茶素沒食子酸酯抗腫瘤作用的研究進展. 醫(yī)學綜述, 2017, 23(10):1929-1934.

      [4] 趙向東, 梁勇, 任陳, 等. 不同劑量放射線對小鼠畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射和外毛細胞Prestin蛋白表達的影響. 聽力學及言語疾病雜志, 2013, 21(3):267-271.

      [5] 文果, 覃玉桃. 鼻咽癌治療相關聽力損傷研究進展. 中華耳科學雜志, 2018, 16(5):640-645.

      [6] 嚴正強, 陳鐵定, 陳力, 等. 茶多酚對人前列腺癌PC-3M細胞侵襲力的影響. 浙江醫(yī)學, 2017, 39(12):946-951.

      [收稿日期:2019-02-14]

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