張立憲，白紅杰，郎利敏，游 一，朱文豪，王克領(lǐng)（.河南省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，河南 鄭州 450002；2.河南省畜禽繁育與營養(yǎng)調(diào)控重點實驗室，河南 鄭州 450002）

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌引起的一種常見傳染病，又稱革拉塞氏?。℅lasser's disease），以多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎性腫為特征病變，發(fā)病率15%～90%，主要危害2～28 周齡仔豬和生長豬，特別是5～8 周齡保育豬，可引發(fā)較為嚴重的身體多部位疾病[1]，已成為當前對我國豬場斷奶仔豬和保育豬危害最大的細菌性疫病之一。副豬嗜血桿菌具有條件致病性，該病一般入冬至早春季節(jié)為高發(fā)期，而養(yǎng)殖場條件差更易發(fā)病，如飼養(yǎng)密度過大、圈舍潮濕、舍內(nèi)明火采暖、封閉嚴實空氣不流通等。副豬嗜血桿菌病傳播較快，病程較長，而且與圓環(huán)病毒病、藍耳病等常常混發(fā)，發(fā)病后治療不當效果普遍較差，且愈后恢復緩慢[2]，給養(yǎng)豬企業(yè)往往造成巨大的經(jīng)濟損失。

1 發(fā)病及病變情況

2019 年1 月下旬，新鄉(xiāng)市原陽縣某豬場5～7 周齡保育豬群突然發(fā)病，發(fā)病率約20%，病豬發(fā)燒40 ℃左右，采食量下降，陣發(fā)性咳嗽，有的跗關(guān)節(jié)腫大，跛行，被毛粗亂無光澤，后期腹式呼吸明顯，日漸消瘦，個別豬還出現(xiàn)歪頭轉(zhuǎn)圈和倒地亂劃等神經(jīng)癥狀，后期部分病豬出現(xiàn)耳朵、四肢末端或腹下紅紫。剖檢病變：淋巴結(jié)均腫大明顯，切面多汁，上有少量灰白色壞死點，胸腹腔蓄積大量淡黃色米湯樣液體，胸肺粘連，心包和肺表面有多量纖維素化膿性干酪樣滲出物，有的腹腔粘連，表現(xiàn)明顯的腹膜炎癥狀，跗關(guān)節(jié)處有黏性清亮或混濁積液。

根據(jù)流行病學、剖檢癥狀和變化，可臨床診斷為副豬嗜血桿菌病。

2 實驗室診斷與藥敏試驗

2.1 實驗室診斷

2.1.1 細菌培養(yǎng) 無菌采取病豬肺臟、關(guān)節(jié)液、心血接種于營養(yǎng)肉湯、含NAD 的血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、普通瓊脂和含5%乳牛血清的TSA 培養(yǎng)基，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)24～48 h，觀察其生長形態(tài)及特征。培養(yǎng)結(jié)果見表1。

表1 細菌培養(yǎng)結(jié)果

挑取培養(yǎng)后的單菌落抹片，革蘭氏染色后在油鏡下觀察，可見單個、成對或短鏈狀的革蘭氏陰性細小桿菌（圖1）。細菌培養(yǎng)結(jié)果符合副豬嗜血桿菌特征，初步診斷為副豬嗜血桿菌病。

2.1.2 生化試驗 將純化后的菌落接種于生化鑒定管，管中同時加入5 mL 0.01%的NAD，置于37 ℃5%的CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)48 h。結(jié)果見表2。

圖1 革蘭氏染色鏡檢細菌形態(tài)

表2 生化試驗結(jié)果

上述生化試驗符合副豬嗜血桿菌的生化特征，基本確定病豬患有副豬嗜血桿菌病。

2.1.3 PCR 鑒定試驗結(jié)果 參照劉建奎等（2012）的文獻介紹對分離到的5 株菌株進行PCR 擴增，觀察產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果，顯示在821 bp 處出現(xiàn)特異性條帶（圖2），與預期片段大小相符，表明所分離到的菌株為副豬嗜血桿菌。

圖2 分離菌株的PCR 鑒定

2.1.4 小鼠致病性試驗 將菌株接種于添加NAD的TSB，37 ℃培養(yǎng)48 h，無菌生理鹽水5 倍稀釋培養(yǎng)菌后，給一組小鼠皮下接種0.5 mL，對照組小鼠皮下接種0.5 mL 無菌生理鹽水。接種細菌組小鼠48 h 內(nèi)死亡，剖檢肺部有出血，肝臟明顯腫大，對照組正常。從死亡小鼠的肺和脾上分離得到和以上一致的細菌，證明該菌具有致病性。

2.2 藥敏試驗

將分離菌株接種于添加NAD 的TSA 培養(yǎng)基，涂沫均勻，選取藥敏片貼于培養(yǎng)基上，于37 ℃5%的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，測量抑菌環(huán)直徑并判定。判定結(jié)果見表3。

從表3 可以看出：分離菌株對洛美沙星、恩諾沙星、頭孢拉定、頭孢噻肟、頭孢噻呋等敏感，對氨芐西林、丁胺卡那、克林霉素、阿莫西林等中介，對慶大霉素、鏈霉素、青霉素G、金霉素、磺胺間甲氧嘧啶等耐藥。

表3 副豬嗜血桿菌分離菌株的藥敏試驗結(jié)果

3 治療措施

3.1 提高保育圈舍溫度至20 ℃以上。天氣晴好時中午11：00 至下午14：00 南向窗戶打開通風，以防空氣污濁。清掃圈舍糞便并減少沖洗圈舍次數(shù)，每周帶豬噴霧消毒2～3 次，避免死角。保持圈舍干爽。杜絕霉變玉米和飼料。將可疑豬和發(fā)病豬全部換至病豬舍隔離飼養(yǎng)。將豬分圈，減少飼養(yǎng)密度。把病重豬和污染物及時清理，將其深埋或焚燒掉。

3.2 發(fā)病豬肌注洛美沙星和頭孢噻呋，1 d 1 次，連用3～5 d，按說明書用量使用；大群拌料加藥：恩諾健1 000 g＋10%頭孢拉定500 g＋柴胡甘草顆粒1 000 g＋全價飼料1 t，連用7～10 d；同時在飲水添加優(yōu)質(zhì)多維1 000 g+葡萄糖20 kg+水1 t，連飲5～7 d。

經(jīng)過上述措施處理30 d 后，除少部分病重豬死亡外，大部分癥狀較輕病豬逐漸好轉(zhuǎn)，疫情基本得到了控制。

4 小結(jié)

造成副豬嗜血桿菌病在該場流行的原因可能有4 點：一是冬季圈舍溫度偏低，門窗封閉較為嚴實，再加上糞尿清理不及時，明顯感覺空氣污濁、氣味嗆人；二是飼養(yǎng)密度較大，因前期仔豬上保育較為集中，導致圈舍緊張，豬群擁擠打架增多；三是加藥預防沒有做好，仔豬由產(chǎn)房轉(zhuǎn)到保育舍應激較大，飲水中沒有及時添加電解質(zhì)多維和葡萄糖等；四是沒有按規(guī)定及時消毒，造成病原微生物無限繁殖。

副豬嗜血桿菌主要侵害的是關(guān)節(jié)、漿膜和腦膜等器官，相對其他組織這些器官的毛細血管分布較少；而肺部作為重要的發(fā)病器官卻與血液之間又存在血肺屏障，因而一般藥物很難到達該菌分布最多的部位，通過藥敏試驗選用的藥物不一定有效，必須結(jié)合臨床選用穿透性強，組織分布濃度高，能夠深入副豬嗜血桿菌附著部位的藥物，才能發(fā)揮應有的效果[4]。