黃景皓

摘 要：本研究以云南勾兒茶果為研究對(duì)象，通過酸性無水乙醇和超聲輔助提取技術(shù)提取云南勾兒茶果中的花青素，用紫外分光光度法測(cè)定花青素的含量。同時(shí)，以Amberlite XAD大孔吸附樹脂作為純化介質(zhì)，進(jìn)行層析法精制。結(jié)果云南勾兒茶中的花青素提取率約為0.2%。

關(guān)鍵詞：云南勾兒茶;花青素;大孔樹脂;分離純化

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1671-2064（2019）20-0190-02

0 引言

云南勾兒茶，其葉茶有清涼解毒及抗衰老的保健功效。果為紫色小球，可食，味香甜，汁濃重，為群眾喜食的野果，含有天然的花色素成分?；ㄇ嗨兀╝nthocyan），又稱花色素，是自然界一類廣泛存在于植物中的水溶性天然色素，是花色苷（anthocyanins）水解而得的有顏色的苷元，目前用于食品著色、染料、醫(yī)藥、化妝品等方面。

本研究將以云南勾兒茶果為研究對(duì)象，采用超聲輔助提取技術(shù)和大孔樹脂法作為主要提取純化方法。提取純化其中的花青素成分，制作成無毒無害的純天然的、食品級(jí)的唇膏產(chǎn)品，無副作用且安全性高。

1 材料與儀器

勾兒茶，產(chǎn)地云南;實(shí)驗(yàn)試劑為無水乙醇，鹽酸，蒸餾水;儀器為高速離心機(jī)，Pharmacia Biotech Ultrospec 2000紫外分光光度計(jì)、普析UV-US SPECTROPHOTOMETER紫外分光光度計(jì)、Sartovius BSA124S電子天平、超聲儀，離心管，量筒，燒杯，容量瓶，玻璃棒，玻璃層析柱，鐵架臺(tái)，錐形瓶，移液器等。Amberlite XAD系列大孔吸附樹脂（北京慧德易科技有限責(zé)任公司）?；ㄇ嗨兀ㄌ旖蚣夥逄烊划a(chǎn)物公司提供）。

2 試驗(yàn)方法

2.1 花青素的提取和純化

準(zhǔn)確稱取20.00g云南勾兒茶粉置于萃取容器中，以pH=2.0體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶液500ml為提取液，料液比1∶25（g/mL）。將萃取體系置于超聲波中，設(shè)定超聲波功率為200～600W（超聲提取2s，間歇4s），超聲溫度為30℃，超聲20min。

超聲結(jié)束后，將提取液4000r/min離心15min，將上清液和渣液分離，將渣液用預(yù)先設(shè)定濃度的乙醇洗滌直到渣液無色，合并渣液和上清液得最終花青素提取液，采用紫外分光光度法，在500nm處測(cè)定提取液的OD值，計(jì)算出花青素得率。

將大孔樹脂用蒸餾水洗去細(xì)小和破碎樹脂，用無水乙醇浸泡24h，使其充分溶脹，除去上浮樹脂，再用去離子水洗至中性，無醇味。將處理好的大孔樹脂濕法裝柱（玻璃層析柱規(guī)格10mm×600mm），勾兒茶果汁樣液pH為2.0～3.0，濃度為8g/L，以1.0mL/min的流速通過層析柱140min至吸附達(dá)飽和，再以水洗吸附樹脂至流出液澄清透明，然后以60%的酸性（pH=3）乙醇溶液，流速在1.0mL/min時(shí)洗脫，收集洗脫液，于45℃下減壓濃縮得深紅色漿狀色素，凍干備用。

2.2 花青素含量的測(cè)定

2.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

精確稱取5mg的花青素標(biāo)準(zhǔn)品于50mL容量瓶中，用70%鹽酸乙醇溶解并定容，得到濃度為0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.2mL于50mL容量瓶中，用0.7%的鹽酸乙醇（V∶V）定容，取5ml定容后的液體，用紫外可見分光光度計(jì)在400～600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)。于400～600nm下，掃描測(cè)定樣品的吸光度，作出光譜掃描曲線，確定最大吸收波長(zhǎng)。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

取5mg花青素樣品，溶于容量瓶中，用70%鹽酸乙醇溶解并定容，濃度為100ug/mL;分別取0.2mL，0.2mL，0.2mL， 0.2mL，0.2mL，0.4mL，0.5mL，1.0mL上述溶液分別加入5.0mL，4.0mL，3.0mL，2.0mL，1.0mL，1.0mL，1.0mL，1.0mL的70%鹽酸乙醇溶解并定容，所得溶液濃度分別為3.8μg/ml， 4.8μg/ml，6.25μg/ml，9.1μg/ml，16.7μg/ml，28.6μg/ml，33.3μg/ml，50.0μg/ml。于最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定以上樣品的吸光度，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 光譜掃描曲線

精確稱取5mg的花青素標(biāo)準(zhǔn)品于50mL容量瓶中，用70%酸性乙醇溶解并定容，得到濃度為0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.2mL于50mL容量瓶中，用0.7%的鹽酸乙醇（V∶V）定容，取5ml定容后的液體，以70%酸性乙醇為空白對(duì)照，用普析UV-US SPECTROPHOTOMETER紫外分光光度計(jì)，400-600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外圖譜掃描，與測(cè)定的勾兒茶花青素溶液比較，542nm有相似的最大吸收，因此選擇542nm為測(cè)定波長(zhǎng)。紫外可見分光光度計(jì)在400～600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)光譜掃描圖如圖1和圖2所示。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

經(jīng)測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)樣品液的8次濃度結(jié)果分別為3.8μg/ml，4.8μg/ml，6.25μg/ml，9.1μg/ml，16.7μg/ml，28.6μg/ml，33.3μg/ml，50.0μg/ml。吸光度的數(shù)值分別為0.05，0.06，0.076，0.104，0.173，0.307，0.358，0.534。

經(jīng)測(cè)定，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度在3.8～ 50μg/ml范圍內(nèi)時(shí)，以標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0105x+0.0079，R2=0.9994，方程線性關(guān)系良好可以應(yīng)用，結(jié)果如表1和圖3所示。

3.3 花青素的精制

大孔樹脂的吸附作用取決于吸附劑與吸附物質(zhì)之間的范德華力和氫鍵，本研究中選用Amberlite XAD大孔吸附樹脂作為純化介質(zhì)。結(jié)果表明，Amberlite XAD大孔吸附樹脂，樹脂對(duì)云南勾兒茶花青素有良好的純化效果。

4 結(jié)語

勾兒茶屬（Berchemla Neck）植物全世界約有31種，主要分布于亞洲東部至東南部的溫帶和熱帶地區(qū)。我國(guó)有18種，6變種，主要集中于西南、華南、中南及華東地區(qū)。本屬的一些種類的根、莖或葉可供藥用，有祛風(fēng)利濕、活血止痛、止咳祛痰之功效，主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺結(jié)核、急慢性氣管炎、黃疽、痢疾、跌打損傷、癰腫瘡毒等癥。迄今為止從該屬植物中獲得的天然產(chǎn)物的類型有黃酮類，苷類、木脂素類、醌類、萜類等，但關(guān)于其中的天然色素的研究和開發(fā)比較少。本研究該屬植物中已分離得到的天然色素物，是該屬中的特色的成分，有深入開發(fā)的價(jià)值。

花青素含量測(cè)定的方法有很多，有紫外分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法、庫(kù)侖滴定法也有應(yīng)用。本文采用紫外分光光度法，以花青素為對(duì)照品，在540nm處測(cè)花青素含量。

本法簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果可靠準(zhǔn)確，為今后云南勾兒茶花青素的質(zhì)量評(píng)估提種化學(xué)分析方法。

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