陳靜，耿紅衛(wèi)，李重實(shí)，李文杰，白鵬

（遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧大連116015）

對蝦養(yǎng)殖業(yè)是遼寧省水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的重要組成部分，主要以中國對蝦、凡納濱對蝦（即南美白對蝦）養(yǎng)殖為主。近幾年，隨著海參養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)持續(xù)下滑，對蝦養(yǎng)殖呈上升趨勢。遼寧省蝦年產(chǎn)量由2014年的31572噸攀升到2018年的50000余噸；蝦類育苗數(shù)量也從2014年近140億尾上升到2018年180余億尾。影響對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量的主要因素之一是病害，為掌握對蝦病害情況，提高預(yù)警能力，為其防控提供參考。遼寧省水產(chǎn)苗種管理局自2014年起對中國對蝦和凡納濱對蝦苗種進(jìn)行兩種病毒（WSSV、TSV）的監(jiān)測，近五年監(jiān)測情況如下。

1 .材料和方法

1.1 采樣

2014年～2018年每年5月中旬～6月中旬，分別從大連市、丹東市、營口市、錦州市、盤錦市、葫蘆島市等對蝦主要養(yǎng)殖區(qū)苗種生產(chǎn)場，采集中國對蝦仔蝦和凡納濱對蝦仔蝦樣品。具體采樣方法依據(jù)《水生動物產(chǎn)地檢疫采樣技術(shù)規(guī)范》（SC/T 7103-2008）的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行[1]。

1.2 方法

1.2.1 WSSV檢測

按照天根生化科技有限公司海洋動物組織基因組DNA提取試劑盒操作步驟，提取各待測樣品中的基因組總DNA，于-20℃下保存?zhèn)溆?。按照《白斑綜合征（WSD）診斷規(guī)程 第2部分 套式PCR檢測法》（GB/T 28630.2-2012）檢測方法進(jìn)行樣品WSSV檢測[2]。

1.2.2 TSV檢測

按照天根生化科技有限公司動物組織總RNA提取試劑盒操作步驟，提取各待測樣品中的基因組總RNA，于-20℃下保存?zhèn)溆?。按照《對蝦桃拉綜合征檢疫技術(shù)規(guī)范》（SN/T 1151.1-2011）[3]檢測方法進(jìn)行樣品TSV檢測。

2 結(jié)果分析

2.1 中國對蝦仔蝦中WSSV的檢測結(jié)果

2014年～2018年對中國對蝦仔蝦樣品中WSSV的檢測結(jié)果（見表1）顯示，WSSV年度總檢出陽性率呈現(xiàn)先下降后上升的現(xiàn)象。部分對蝦樣品WSSV的PCR檢測結(jié)果如圖1所示，第1次PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳后，陽性對照樣品及陽性檢出樣品在1447bp處出現(xiàn)1條特異性條帶，在第2次PCR結(jié)果顯示在941bp處有明顯條帶，而空白對照樣品和陰性對照樣品則在1447bp或941bp處均無條帶。

表1 中國對蝦仔蝦中WSSV的檢測結(jié)果

圖1 部分中國對蝦仔蝦樣品WSSV PCR電泳譜圖

2.2 凡納濱對蝦仔蝦中WSSV檢測結(jié)果

2014年～2018年對凡納濱對蝦仔蝦中WSSV檢測結(jié)果（見表2）顯示，年度陽性率呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢。部分對蝦樣品PCR檢測結(jié)果如圖2所示。

表2 凡納濱對蝦仔蝦中WSSV的檢測結(jié)果

圖2 部分凡納濱對蝦仔蝦樣品WSSV PCR電泳譜圖

2.3 中國對蝦仔蝦中TSV的檢測結(jié)果

2014年～2018年對中國對蝦仔蝦中TSV的檢測結(jié)果（見表3）顯示，2014年和2018年有檢出，陽性率分別為2.0%和1.9%，其余年份均沒有檢出。部分對蝦樣品PCR檢測結(jié)果如圖3所示，陽性對照樣品和陽性檢出樣品的電泳譜圖在231bp處出現(xiàn)目的條帶，而空白對照樣品和陰性對照樣品均無條帶。

表3 中國對蝦仔蝦中TSV的檢測結(jié)果

圖3 部分中國對蝦仔蝦樣品TSV PCR電泳譜圖

2.4 凡納濱對蝦仔蝦中TSV檢測結(jié)果

2014年～2018年對凡納濱對蝦仔蝦中TSV的檢測結(jié)果（見表4）顯示，五年間TSV均有檢出，陽性率分別為13.6%、9.5%、6.7%、14.8%、11.1%。部分對蝦樣品PCR檢測后，電泳譜圖，如圖4所示。

表4 凡納濱對蝦仔蝦中TSV的檢測結(jié)果

圖4 部分凡納濱對蝦仔蝦樣品TSV PCR電泳譜圖

3 討論

從2014年～2018年五年間對中國對蝦仔蝦和凡納濱對蝦仔蝦中WSSV和TSV的監(jiān)測結(jié)果看，我國對蝦仔蝦WSSV的陽性率明顯高于凡納濱對蝦；而凡納濱對蝦仔蝦TSV的陽性率明顯高于中國對蝦。這說明WSSV較易感染中國對蝦，而TSV較易感染凡納濱對蝦。

眾所周知，WSSV的感染力極強(qiáng)，是對蝦類危害較大的一種病毒。WSSV傳播速度較快，對蝦感染后死亡率可高達(dá)100%，在1993年爆發(fā)以來，其對全球?qū)ξr養(yǎng)殖業(yè)危害嚴(yán)重，經(jīng)濟(jì)損失巨大（Cavalli LS et al,2008；薛暉等，2010）[4,5]。在對WSSV陽性檢出的苗種場家跟蹤調(diào)查中也發(fā)現(xiàn)，中國對蝦仔蝦感染后，死亡速度較快，幾乎全部死亡；而且還發(fā)現(xiàn)前一年WSSV陽性檢出的苗種場家，下一年陽性檢出的幾率也較高。五年間凡納濱對蝦仔蝦中WSSV陽性率較低，危害較輕。馮亞萍等的研究結(jié)果顯示，中國對蝦野生群體對WSSV的敏感性高于凡納濱對蝦[6]；而且不同溫度下凡納濱對蝦耐受WSSV能力也要高于中國對蝦[7]。Tsai et al研究也顯示凡納濱對蝦對WSSV有一定的抵抗力，死亡率與養(yǎng)殖環(huán)境和管理水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，存活個(gè)體終生帶毒[8]。

TSV主要侵害凡納濱對蝦，1992年首次發(fā)現(xiàn)于厄瓜多爾桃拉河（Taura）地區(qū)，因此而得名。五年間對中國對蝦仔蝦和凡納濱對蝦仔蝦TSV監(jiān)測結(jié)果顯示，凡納濱對蝦仔蝦TSV陽性率為6.7%～14.8%；而中國對蝦仔蝦TSV只在2014年和2018年各有1例陽性檢出。因此，說明TSV對凡納濱對蝦危害較大，這與馮東岳等的研究結(jié)論一致[9]。

中國對蝦是一種暖水性大型蝦類，經(jīng)濟(jì)價(jià)值極高，是黃渤海主要捕撈對象和支柱產(chǎn)業(yè)，也是我國重要的土著海水養(yǎng)殖種類之一。為了保護(hù)這一資源，遼寧省從1984年開始實(shí)施大規(guī)模增殖放流工作。凡納濱對蝦俗稱南美白對蝦，于20世紀(jì)80年代從夏威夷引入我國。因其適應(yīng)能力強(qiáng)、殼薄肉肥、味道鮮美，養(yǎng)殖地域和養(yǎng)殖規(guī)模不斷增大，屬于世界上養(yǎng)殖最多、產(chǎn)量最大的三大蝦類之一。近幾年，我國關(guān)于對蝦病害的報(bào)道屢見不鮮，不再是單一的病原，而呈現(xiàn)多樣化[10]。作為一名水產(chǎn)苗種管理工作者，對蝦養(yǎng)殖病害防控工作面臨巨大的挑戰(zhàn)。為有效地控制遼寧省對蝦病害的發(fā)生。一是要加大養(yǎng)殖對蝦流行疾病的監(jiān)測力度，對已知病原進(jìn)行普查，而及時(shí)有效地指導(dǎo)防控工作；二是要盡早全面開展水產(chǎn)苗種產(chǎn)地檢疫工作，防止水產(chǎn)苗種帶病流通，確保對蝦養(yǎng)殖健康可持續(xù)發(fā)展。