朱小敏，朱肖杰，孟建文，李紅梅，張素文，郈秀菊

(山東省藥學(xué)科學(xué)院 山東省醫(yī)用高分子材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250101)

1 引 言

目前，國內(nèi)外已開發(fā)的新型傷口止血材料主要包括明膠蛋白、纖維蛋白膠、可溶性止血紗布以及可吸收止血粉等[1]。隨著科學(xué)與加工技術(shù)的發(fā)展，以淀粉或其衍生物為原材料制備的止血材料，因其良好的止血作用和生物安全性，被廣泛研究[2-5]，并有了一些產(chǎn)品應(yīng)用于臨床[6]，如Arista止血裝置[7-8]，瞬時(shí)復(fù)合微孔多聚糖止血粉[9]等。我們研究開發(fā)了一種羧甲基交聯(lián)淀粉止血顆粒，制備過程中采用環(huán)氧氯丙烷作為交聯(lián)劑。環(huán)氧氯丙烷又稱表氯醇，常用作材料反應(yīng)的交聯(lián)劑，其有一定的毒性[10-11]。目前，中國藥典規(guī)定環(huán)氧氯丙烷的殘留量限度為0.05%[12]。本研究建立了羧甲基交聯(lián)淀粉止血顆粒中環(huán)氧氯丙烷殘留量的氣相色譜測定方法。

2 儀器與試劑

氣相色譜儀，Agilent 6890N Network GC System；頂空進(jìn)樣器，Agilent7697A Headspace Sampler；電子分析天平，感量0.0001 g，上海精密電子公司。

羧甲基交聯(lián)淀粉止血顆粒，自制(180820,180821,180822)；二甲亞砜，色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；環(huán)氧氯丙烷，分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠。

3 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

采用Agilent125-1334：DB-624(30 m×530 μm×3.0 μm)毛細(xì)管色譜柱；進(jìn)樣口溫度200℃；檢測器溫度250℃；分流比3∶1；載氣為N2；流速3 mL/min；程序升溫：初始溫度50℃，保持2 min，以50℃/min升溫至180℃，保持5 min。頂空進(jìn)樣器條件：加熱箱平衡溫度為100℃，平衡20 min；定量閥溫度為110℃；導(dǎo)熱管溫度為120℃。該色譜條件下，環(huán)氧氯丙烷保留時(shí)間Rt=5.17，見圖1。

圖1 環(huán)氧氯丙烷的譜圖

3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

3.2.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備 精確稱取環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)品19.8 mg，置于25 mL容量瓶中，用二甲亞砜定容。精確量取上述溶液5.3 mL，置于100 mL容量瓶中，用二甲亞砜定容，制成42 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。在4℃下儲(chǔ)存，有效期為1個(gè)月。

3.2.2標(biāo)準(zhǔn)對照溶液的制備 精確量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液6 mL，置于50 mL容量瓶中，用二甲亞砜定容，得到5.04 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)對照溶液。

3.3 樣品制備

取止血粉約50 mg，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，準(zhǔn)確加入DMSO 5 mL，壓蓋密封后混合均勻，浸提溫度為(37±1)℃，浸提時(shí)間為24 h。在規(guī)定的色譜分析條件下頂空進(jìn)樣。

3.4 線性與范圍

分別取0.5、1、2、3、4 mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于25 mL的容量瓶中，用二甲亞砜定容，獲得0.84、1.68、3.36、5.04、6.72 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密量取5 mL置于20 mL頂空瓶中，壓蓋密封，在規(guī)定的色譜條件下進(jìn)行分析。每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液平行測試三份，結(jié)果以環(huán)氧氯丙烷的濃度為橫坐標(biāo)(x)，以檢測出的平均峰面積為縱坐標(biāo)(y)作線性回歸分析，得到線性回歸曲線，見圖2。線性回歸方程為y=1.001x-0.0216，R2=0.9997。環(huán)氧氯丙烷的質(zhì)量濃度為0.84～6.72 μg/mL的范圍內(nèi)時(shí)，其峰面積與濃度線性關(guān)系良好。

3.5 檢測限和定量限試驗(yàn)

取3.4節(jié)的0.84 μg/mL的環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)溶液，用二甲亞砜進(jìn)行稀釋，依次稀釋并測定，以信噪比3∶1作為環(huán)氧氯丙烷的檢測限，以信噪比10∶1作為環(huán)氧氯丙烷的定量限。測試結(jié)果為，環(huán)氧氯丙烷的檢測限濃度為0.336 μg/mL，環(huán)氧氯丙烷的定量限濃度為0.84 μg/mL。

3.6 精密度試驗(yàn)

取環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)對照溶液5 mL置于20 mL頂空瓶中，在規(guī)定色譜條件下，平行檢測6份，以峰面積計(jì)算，數(shù)據(jù)見表1，RSD為1.22%。

表1 環(huán)氧氯丙烷測定的精密度

3.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

同時(shí)取6份環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)對照溶液5 mL分別置于20 mL頂空瓶中，分別于放置0、2、4、6、8、10 h后，在規(guī)定色譜條件下分析，以峰面積計(jì)算，數(shù)據(jù)見表2，RSD為1.39%，環(huán)氧氯丙烷標(biāo)準(zhǔn)對照溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

表2 環(huán)氧氯丙烷的溶液穩(wěn)定性

3.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品9份，其中1-3份分別加入5 mL環(huán)氧氯丙烷對照溶液，4-6份分別加入5 mL80%濃度環(huán)氧氯丙烷對照溶液，7-9份分別加入5 mL120%濃度環(huán)氧氯丙烷對照溶液，按照3.3節(jié)的方法處理后，在規(guī)定的色譜條件下進(jìn)行分析，以外標(biāo)法計(jì)算待測樣品中環(huán)氧氯丙烷的濃度，相關(guān)數(shù)據(jù)見表3，環(huán)氧氯丙烷的平均回收率為101.7%，RSD為3.48%。

表3 環(huán)氧氯丙烷的回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)

3.9 樣品的測定

取自制的羧甲基交聯(lián)淀粉止血顆粒三批(20180820,20180821,20180822)，每個(gè)批次各取三份，按照3.3節(jié)的方法處理后，在規(guī)定的色譜條件下進(jìn)行分析，測定樣品中的環(huán)氧氯丙烷的殘留量，結(jié)果均未檢出，樣品中的環(huán)氧氯丙烷殘留量小于方法的檢測限0.336 μg/mL，符合藥典的要求(小于0.05%)。

4 結(jié)論

本研究建立了一種采用頂空氣相色譜法測定羧甲基交聯(lián)淀粉止血顆粒中環(huán)氧氯丙烷殘留量的方法，精密度1.22%，最小檢測限0.336 μg/mL，最小定量限0.84 μg/mL，環(huán)氧氯丙烷的質(zhì)量濃度為0.84～6.72 μg/mL時(shí)，其峰面積與濃度線性關(guān)系良好。在本研究確定的色譜條件下，可以簡單準(zhǔn)確地分析羧甲基交聯(lián)淀粉止血顆粒中環(huán)氧氯丙烷的殘留量，該方法測量準(zhǔn)確、精密度高。