研究證實，高尿酸血癥不僅可導致關(guān)節(jié)痛風發(fā)作和尿酸性腎結(jié)石，而且是獨立的心血管危險因素，可引起血管內(nèi)皮功能異常、促進動脈粥樣硬化、血管功能異常和血管鈣化等[1-3]。麝香保心丸具有強大的血管保護功能，通過改善內(nèi)皮功能、抑制炎癥反應(yīng)及血管鈣化等發(fā)揮作用，可有效防治血管功能異常和重塑性疾病[4-5]，能否改善高尿酸血癥導致的內(nèi)皮功能障礙尚不明了。因此，本實驗旨在觀察麝香保心丸對高尿酸血癥大鼠模型內(nèi)皮功能的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、主要藥品及儀器來源 8周齡雄性SD大鼠和鼠尾動脈測壓儀由汕頭大學醫(yī)學院實驗動物中心提供，2%氧嗪酸鉀飼料由北京華阜康生物技術(shù)有限公司配制；麝香保心丸由上海和黃藥業(yè)有限公司提供；Beckman Coulter AU5800生化儀由美國生產(chǎn)，由汕頭大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科檢測；血糖儀由美國雅培提供；一氧化氮(NO)試劑盒由北京華英生物研究所提供；內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)一抗、二抗及DAB顯色試劑盒由武漢博士德提供。

1.2 高尿酸血癥大鼠模型制備 取16只雄性SD大鼠為高尿酸血癥組，用2%氧嗪酸鉀飼料喂養(yǎng)6周后進行血清尿酸水平檢測，確定成功建立高尿酸血癥模型。另取雄性SD大鼠8只作為健康對照組；將高尿酸血癥大鼠隨機分成高尿酸血癥組和高尿酸血癥+麝香保心丸組，每組8只，高尿酸血癥+麝香保心丸組予麝香保心丸25 mg/(kg·d)灌胃。飼養(yǎng)4周后取材，分離血清、血漿，取主動脈制作蠟塊。

1.3 血清尿酸的測定 取血清標本送汕頭大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科，用苦味酸法檢測尿酸濃度。

1.4 血漿NO含量的測定 取血漿標本送北京華英生物研究所，用硝酸還原酶法測定血漿NO含量。

1.5 免疫組織化學法檢測主動脈組織eNOS的表達 取大鼠主動脈，石蠟切片，常規(guī)脫蠟入水，封閉非特異性抗原，滴加一抗過夜孵育，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。詳細步驟按試劑盒說明書操作。

2 結(jié) 果

2.1 6周后高尿酸血癥大鼠模型血清尿酸和血漿NO水平比較 用2%氧嗪酸鉀飼料喂養(yǎng)大鼠6周后，與健康大鼠比較，血清尿酸水平明顯升高，提示高尿酸血癥模型建立成功，同時血漿NO含量有所下降，提示高尿酸血癥大鼠內(nèi)皮功能受損。詳見表1。

表1 6周后大鼠血清尿酸和血漿NO含量比較(±s)

與健康對照組比較，1)P<0.01

2.2 10周后大鼠血清尿酸和血漿NO水平比較 采用麝香保心丸干預(yù)后，大鼠血清尿酸水平無明顯改善，但血漿NO含量明顯上升。詳見表2。

表2 10周后大鼠血清尿酸和血漿NO含量比較(±s)

與健康對照組比較，1)P<0.01；與高尿酸血癥組比較，2)P<0.01

2.3 大鼠主動脈組織eNOS的表達比較 與健康對照組比較，高尿酸血癥組大鼠主動脈組織eNOS的表達明顯下調(diào)，用麝香保心丸干預(yù)后，eNOS表達增多。詳見圖1。

圖1 大鼠胸主動脈eNOS免疫組化染色(×40)

3 討 論

高尿酸血癥是指尿酸代謝障礙所致血清尿酸水平增高或尿酸鹽沉積致痛風發(fā)作為主的臨床表現(xiàn)。隨著人們生活方式和膳食結(jié)構(gòu)的改變，該病的患病率明顯增加，而發(fā)病年齡呈明顯年輕化趨勢。進一步研究表明，尿酸是獨立的心血管危險因素，可促進動脈粥樣硬化、血管鈣化的進程，涉及可能的機制與尿酸損傷血管內(nèi)皮細胞并使NO合成減少、誘導炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激和促進血管平滑肌細胞增殖和遷移等相關(guān)[2，6-7]。血漿NO主要通過血管內(nèi)皮細胞合成分泌，左旋精氨酸經(jīng)過NO合成酶作用后生成NO，其血漿濃度可直接反映血管內(nèi)皮功能情況。本研究觀察到高尿酸血癥組大鼠血漿NO的表達較健康對照組大鼠明顯減少，提示血管內(nèi)皮功能受損。用麝香保心丸干預(yù)后，高尿酸血癥大鼠血漿NO水平明顯增加，血管eNOS的表達亦同步上調(diào)，提示血管內(nèi)皮功能改善。用麝香保心丸干預(yù)后，大鼠血清尿酸水平與單純高尿酸血癥組比較差異無統(tǒng)計學意義，提示麝香保心丸無降尿酸作用，并且其改善內(nèi)皮功能是獨立于降尿酸作用之外的。

麝香保心丸在臨床上常用于治療冠心病，對改善心絞痛、增加冠心病病人活動耐量等有顯著效果。研究發(fā)現(xiàn)麝香保心丸可改善血管內(nèi)皮功能、穩(wěn)定逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化斑塊、促進治療性血管新生、抑制炎癥反應(yīng)和血管鈣化的發(fā)生發(fā)展等[8-9]，但是否改善高尿酸血癥誘導的內(nèi)皮細胞功能損傷尚不清楚。為此，本實驗觀察了麝香保心丸對高尿酸血癥動物模型血管內(nèi)皮細胞功能的影響，結(jié)果顯示，麝香保心丸可改善高尿酸血癥大鼠誘導的血管內(nèi)皮功能，該作用不依賴降尿酸效應(yīng)，這將為血管內(nèi)皮損傷的防治提供新的思路，涉及的信號轉(zhuǎn)導通路尚需進一步研究證實。