李菁 陳麗珍

[摘要] 目的 探討地中海貧血孕婦基因?qū)W診斷結(jié)果，提高分娩質(zhì)量，有效防控重型地中海貧血患兒的出生。 方法 選取2019年5月～2020年2月在我院門診進行血常規(guī)初篩檢測提示貧血的孕婦50例為研究對象，采集夫妻雙方標本，通過聚合酶鏈反應（PCR）+反向斑點雜交法檢測確認地中海貧血基因類型，對地中海貧血陽性標本進行基因診斷，判斷其是否患有地中海貧血及所屬基因類型，對夫妻為同型地中海貧血者行產(chǎn)前診斷，統(tǒng)計地中海貧血篩查結(jié)果、基因診斷結(jié)果及產(chǎn)前診斷結(jié)果。 結(jié)果 （1）50例孕婦地中海貧血篩查中陽性12例（24.00%），其中α-地中海貧血8例（16.00%），β-地中海貧血3例（6.00%），αβ混合地中海貧血1例（2.00%）。（2）α-地中海貧血確診7例（14.00%），均為缺失型，其中-SEA 3例，-α3.7 2例，-α4.2 2例;β-地中海貧血確診2例（4.00%），CD41-42、IVS-Ⅱ-654各1例;αβ混合地中海貧血（-α3.7合并-28/N）確診1例（2.00%）。（3）夫妻為同型地中海貧血3例，經(jīng)產(chǎn)前基因診斷，重癥地中海貧血1例（33.33%），自愿終止妊娠后再次基因診斷與產(chǎn)前基因診斷結(jié)果相符。 結(jié)論 通過對孕婦實施地中海貧血產(chǎn)前基因診斷，有助于及時發(fā)現(xiàn)重癥地中海貧血胎兒，提高分娩質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞] 孕婦;地中海貧血;基因?qū)W;診斷

[中圖分類號] R556 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] B ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701（2020）31-0066-03

[Abstract] Objective To investigate the genetic diagnosis results of pregnant women with thalassemia， improve the delivery quality of pregnant women， and effectively prevent and control the birth of children with severe thalassemia. Methods A total of 50 pregnant women with anemia admitted to our hospital and indicated by blood routine screening test from May 2019 to February 2020 were selected as the research objects， and samples from both husband and wife were collected. The gene types of thalassemia were confirmed by polymerase chain reaction（PCR） combined with reverse dot blot， and the positive samples of thalassemia were diagnosed to determine whether there were thalassemia and their gene types. The couple with the same type of thalassemia were diagnosed prenatal. Meanwhile， thalassemia screening results， genetic diagnosis results and prenatal diagnosis results were statistically recorded. Results （1）12 cases（24.00%） of 50 pregnant women were positive for thalassemia screening， including 8 cases（16.00%） of α-thalassemia， 3 cases（6.00%） of β-thalassemia and 1 case（2.00%） of αβ mixed thalassemia.（2） 7 cases（14.00%） of α-thalassemia were diagnosed as deletion type， including 3 cases of-SEA， 2 cases of -α3.7 and 2 cases of -α4.2. Meanwhile， 2 cases（4.00%） of β-thalassemia were diagnosed， including 1 case of CD41-42 and 1 case of IVS-Ⅱ-654 respectively. And 1 case（2.00%） of αβ mixed thalassemia（-α3.7 complicated with-28/N） was diagnosed. （3）There were 3 cases of thalassemia of the same type， and 1 case（33.33%） of severe thalassemia was diagnosed by prenatal gene diagnosis. The results of genetic diagnosis after voluntary termination of pregnancy were consistent with those of prenatal gene diagnosis. Conclusion Prenatal gene diagnosis of thalassemia for pregnant women is helpful to discover fetuses with severe thalassemia in time and improve the delivery quality.

[Key words] Pregnant woman; Thalassemia; Genetics; Diagnosis

地中海貧血為臨床上常見的一種遺傳性血液病，廣東、廣西及其他沿海地區(qū)為該病的高發(fā)地區(qū)，輕型與靜止型一般不會表現(xiàn)出臨床癥狀，地中海貧血可表現(xiàn)為輕到中度貧血，重型地中海貧血新生兒往往難以存活，中間型地中海貧血新生兒通常在6個月后會出現(xiàn)貧血，且大多數(shù)需要依靠輸血來維持生命[1-2]。因此對育齡人群，特別是孕婦，應當進行地中海貧血產(chǎn)前篩查及基因診斷，對高風險的妊娠應當進行產(chǎn)前診斷，盡可能減少重型地中海貧血新生兒的出生[3]。本研究對2019年5月～2020年2月我院門診年齡18～39歲江西省景德鎮(zhèn)市孕齡為3個月的貧血孕婦50例進行地中海貧血基因診斷，為地中海貧血的臨床咨詢及防控提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月～2020年2月我院門診血常規(guī)初篩檢測提示貧血的孕婦50例作為研究對象，所有患者均根據(jù)血常規(guī)及血紅蛋白（Hemoglobin，Hb）電泳結(jié)果，判斷地中海貧血篩查陽性或陰性，如果血紅蛋白區(qū)帶異常或HbF升高及HbA2>3.5%，則可判斷為陽性;紅細胞平均血紅蛋白量（Mean corpuscular hemoglobin，MCH）<27 pg及平均紅細胞體積（Mean corpuscular volume，MCV）<82 fl可診斷為地中海貧血篩查陽性[4]。納入標準：（1）年齡18～39歲;（2）江西省景德鎮(zhèn)市人;（3）孕齡≥3個月[5]。排除標準：（1）合并重要器官功能障礙者;（2）存在精神行為異常者[5]。本研究獲得我院醫(yī)學倫理委員會批準，且所有孕婦均簽署知情同意書。

1.2方法

抽取EDTA抗凝外周靜脈血，基因診斷采用潮州凱提供的地中海貧血基因診斷試劑盒，其中α-地中海貧血采用跨越斷點PCR（Gap-PCR）法，β-地中海貧血采用PCR-RDB法，在導流雜交儀上將擴增產(chǎn)物與標記不同突變型或缺失型地中海貧血探針的尼龍膜進行導流雜交，檢測地中海貧血基因類型，具體操作步驟嚴格按照說明書進行。檢測3種常見缺失型α地中海貧血（-SEA、-α3.7和-α4.2）、3種突變型α地中海貧血（CS、WS和QS）及11種突變型β地中海貧血（CD41-42、CD43、IVS-Ⅱ-654、CD17、CD14-15、-28、-29、CD71-72、βE、IVSⅠ-1、CD27-28）。

夫妻雙方均攜帶同一類型地中海貧血基因，且至少其中一方為中間型或輕型地中海貧血為產(chǎn)前診斷地中海貧血的條件，同時在妊娠16～24周抽取羊水，妊娠24～32周抽取胎兒臍帶血對胎兒地中海貧血基因進行檢測，若為中間型地中海貧血，則立即告知孕婦及其家屬，并建議盡量避免胎兒出生;若為重型地中海貧血，則建議及時終止妊娠。

1.3 觀察指標

觀察50例貧血孕婦的地中海貧血篩查情況、地中海貧血基因確診情況及產(chǎn)前基因診斷情況。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)應用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1地中海貧血篩查結(jié)果

50例孕婦地中海貧血篩查陽性12例（24.00%），其中α-地中海貧血8例（16.00%），β-地中海貧血3例（6.00%），αβ混合地中海貧血1例（2.00%）。見表1。

2.2地中海貧血基因確診結(jié)果

α-地中海貧血確診7例（14.00%），均為缺失型，其中-SEA 3例，-α3.7 2例，-α4.2 2例;β-地中海貧血確診2例（4.00%），CD41-42、IVS-Ⅱ-654各1例;αβ混合地中海貧血（-α3.7合并-28/N）確診1例（2.00%）。見表2。

2.3產(chǎn)前基因診斷結(jié)果

夫妻為同型地中海貧血3例，經(jīng)產(chǎn)前基因診斷，重癥地中海貧血1例（33.33%），對家屬進行充分遺傳咨詢后，自愿終止妊娠，且再次基因診斷與產(chǎn)前基因診斷結(jié)果相符。

3討論

地中海貧血又被稱為海洋性貧血，是一種因珠蛋白肽鏈合成障礙所引起的遺傳性溶血性貧血。世界衛(wèi)生組織（World health organization，WHO）調(diào)查研究結(jié)果顯示，全球范圍內(nèi)攜帶血紅蛋白病致病基因者大約占4.5%，每年至少有20萬的重型地中海貧血新生兒出生[6]。目前地中海貧血的治療費用昂貴，成為患者及其家庭的巨大經(jīng)濟負擔。地中海貧血為危害人類健康的6種常見遺傳病之一，對人類健康造成嚴重影響[7]，如在妊娠期合并地中海貧血，則會導致胎兒生長受限，出現(xiàn)早產(chǎn)，甚至導致胎死宮內(nèi)等，同時還可能導致內(nèi)分泌功能異常、心臟病變、血栓栓塞等并發(fā)癥的發(fā)生。根據(jù)地中海貧血基因合成障礙肽鏈的不同，可以將其分為α-地中海貧血與β-地中海貧血[8]。α-地中海貧血的主要病因是α-珠蛋白基因缺失，β-地中海貧血的主要病因為β-珠蛋白基因突變[9]。通過及時進行產(chǎn)前篩查、產(chǎn)前診斷，并進行有效治療妊娠合并地中海貧血，對于母胎妊娠結(jié)局的改善意義重大，還可有效指導臨床產(chǎn)前診斷及干預，避免重型地中海貧血新生兒的出生。

本研究中，先對所有入選孕婦進行地中海貧血篩查，再對篩查陽性的孕婦進行基因?qū)W診斷。結(jié)果顯示，50例孕婦地中海貧血篩查陽性12例（24.00%），其中α-地中海貧血8例（16.00%），β-地中海貧血3例（6.00%），αβ混合地中海貧血1例（2.00%）。并通過基因?qū)W診斷，α-地中海貧血確診7例（14.00%），均為缺失型，其中-SEA 3例、-α3.7 2例、-α4.2 2例;β-地中海貧血確診2例（4.00%），CD41-42、IVS-Ⅱ-654各1例;αβ混合地中海貧血（-α3.7合并-28/N）確診1例（2.00%）。本研究中α-地中海貧血均為缺失型，推測江西地區(qū)α-地中海貧血以缺失型為主?，F(xiàn)階段全球發(fā)現(xiàn)β-地中海貧血大約有200多種突變，其中我國90%以CD41-42、CD17、IVS-Ⅱ-654-28、βE、CD71-72、CD43、-29這7種突變型為主。本研究中2例β-地中海貧血分別為CD41-42、IVS-Ⅱ-654。本研究中地中海貧血的篩查陽性率及確診率均較高，且基因類型也與其他研究有一定差異性[10-12]，可能是由于地中海貧血的地區(qū)差異性，也可能與本研究的樣本量較少有關(guān)。

本研究中地中海貧血篩查診斷效果明顯，且篩查時只需行血紅蛋白電泳及血細胞分析，檢測方便，操作技術(shù)要求不高，可操作性強[13]。當前血紅蛋白電泳、血細胞分析篩查地中海貧血的費用較低，而直接進行地中海貧血基因檢測的費用則較高[14]。故先進行地中海貧血的篩查可有效減少費用，減少醫(yī)療支出。通過判斷孕婦的地中海貧血類型，發(fā)現(xiàn)高危孕婦，然后再對其丈夫進行基因診斷，及時發(fā)現(xiàn)同型地中海貧血夫妻，再獲取羊水、臍帶血進行產(chǎn)前基因診斷，可及時發(fā)現(xiàn)重癥地中海貧血胎兒，從而及時終止妊娠，提高分娩質(zhì)量[15]。本研究通過產(chǎn)前基因診斷，發(fā)現(xiàn)1例重癥地中海貧血胎兒，對家屬進行充分遺傳咨詢后，自愿終止妊娠，再次基因診斷與產(chǎn)前基因診斷結(jié)果相符，進一步說明基因?qū)W診斷在地中海貧血孕婦中的良好應用價值。

[參考文獻]

[1] Choudhry VP.Quality of life in thalassemia major[J].Indian J Pediatr，2018，85（11）：957-958.

[2] He S，Qin Q，Yi S，et al.Prevalence and genetic analysis of α-and β-thalassemia in Baise region，A multi-ethnic region in Southern China[J].Gene，2017，619：71-75.

[3] 江炎章.廣東省云浮地區(qū)女性和兒童地中海貧血基因分型情況分析[J].現(xiàn)代醫(yī)院，2018，18（2）：234-236，239.

[4] 蒲若偉，蔡明慰，陳涌泉，等.不孕不育患者地中海貧血基因分布特征及HbA、HbA2、MCV、MCH參數(shù)分析[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報，2017，23（19）：2978-2980，2984.

[5] Pornprasert S，Thichak S，Kongthai K，et al.Comparison of HbA2，E，F(xiàn) and red cell parameters in homozygous HbE with and without alpha0-thalassemia trait[J].Lab Med，2018，49（2）：118-122.

[6] Hafezi-Nejad N.Characterizing a cohort of alpha-thalassemia couples collected during screening for hemoglobinopathies：14 years of an iranian experience[J].Hemoglobin：International Journal for Hemoglobin Research，2014，38（6）：153-157.

[7] 盧日珠，麥雄燕，陳愛華，等.三亞地區(qū)孕婦地中海貧血產(chǎn)前篩查與診斷認知的調(diào)查分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2019，27（1）：51-53.

[8] 梁莉，黃桂芳，趙建暉，等.百色壯族人群地中海貧血基因突變類型及產(chǎn)前診斷結(jié)果臨床研究[J].中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2016，10（16）：2516-2519.

[9] 周暉登，唐文庭.28 818例孕婦地中海貧血篩查與診斷分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2019，27（4）：456-457.

[10] Milachich T，Timeva T，Ekmekci C，et al.Birth of a healthy infant after preimplantation genetic diagnosis by sequential blas tomere and trophectoderm biopsy for β-thalassemia and HLA genotyping[J].European Journal of Obstetrics，Gynecology and Reproductive Biology：An International Journal，2013，169（2）：261-267.

[11] 蔡文倩，胡晞江，戴翔，等.中國武漢地區(qū)孕婦地中海貧血基因檢測及產(chǎn)前診斷[J].中國實驗血液學雜志，2019，27（6）：1919-1924.

[12] Vos T，Barber RM，Bell B，et al.Global，regional，and national life expectancy，all-cause mortality，and cause-specific mortality for 249 causes of death，1980-2015：A systematic analysis for the global burden of disease study 2015[J].Lancet，2015，388（10 053）：1459-1544.

[13] 熊乾，胡晞江，戴翔，等.中國武漢地區(qū)新生兒β-地中海貧血基因型分析[J].中國實驗血液學雜志，2019，27（1）：170-174.

[14] Luo HC，Luo QS，Huang FG，et al.Impact of genotype on endocrinal complications of children with alpha-thalassemia in China[J].Sci Rep，2017，7（1）：2948.

[15] 彭楊.地中海貧血基因診斷指導優(yōu)生優(yōu)育的價值研究[J].中國醫(yī)藥科學，2018，8（23）：218-220.

（收稿日期：2020-05-29）