食用玫瑰花水提物對大鼠腸道微生物和基因表達(dá)的影響

周小飛 熊文艷 吳恩凱 張 歡 張婷婷 彭春秀*

（1 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院 昆明 650201

2 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)園林園藝學(xué)院 昆明 650201）

玫瑰花（Rosa rugosa）為薔薇科薔薇屬落葉直立灌木，作為中國傳統(tǒng)中藥的一種，具有促進(jìn)血液循環(huán)、疏肝解郁、減輕乳房疾病的作用[1]；對于軟化心腦血管、緩解高血壓及消除婦科炎癥有顯著療效[2]。玫瑰花成分復(fù)雜，含有黃酮類、多酚類等多種化學(xué)成分[3]，是藥食兩用的新食品資源。在保加利亞，玫瑰花被用于治療胃腸道疾病；在俄羅斯，玫瑰花更被推薦用于治療肺部疾病和上呼吸道感染[4]。不僅如此，在中國傳統(tǒng)中藥學(xué)中玫瑰花被稱為君子藥，具有性溫和、香氣甜潤、排毒養(yǎng)顏、行氣活血、開竅化瘀、疏肝醒脾、促進(jìn)膽汁分泌、幫助消化、調(diào)節(jié)機(jī)理之功效[5]?，F(xiàn)代科學(xué)研究也證明，玫瑰花抗氧化、抗衰老、降血糖，能夠平衡及強(qiáng)化胃腸道功能等，對情緒緊張、壓抑等引起的胃痛有明顯的改善功能。

人體中細(xì)菌的數(shù)量與人類細(xì)胞的數(shù)量是相同的[6]。許多研究認(rèn)為，腸道微生物對活性成分功能的發(fā)揮有重要作用[7]，并且腸道菌群對人體健康有重要影響。腸道菌群與代謝疾病、免疫類疾病、胃腸道類疾病甚至精神類疾病相關(guān)聯(lián)。結(jié)構(gòu)失調(diào)的菌群可能是誘發(fā)慢性病的重要因素。有數(shù)據(jù)顯示，因腸道菌群失調(diào)而導(dǎo)致臨床患病的概率為2%～3%。Zackular等[8]提出影響腸道菌群的因素有很多，而最主要的影響因素是飲食?，F(xiàn)代研究表明，食物對大腦健康的影響并不是因?yàn)槭澄锉囟▽?dǎo)致機(jī)體的炎癥反應(yīng)，而是始于食物對于腸道微生物平衡的破壞。飲食結(jié)構(gòu)與人體腸道菌群之間存在一定的互動(dòng)關(guān)系并影響著人體健康。

玫瑰花有許多功能，課題組提出玫瑰花的功能很可能與腸道微生物有密切關(guān)系，玫瑰花可能會(huì)改變或影響腸道微生物，在兩者的相互作用下發(fā)揮相應(yīng)的功效。本文主要通過浸提食用玫瑰花水提取物，以SD（Sprague Dawley）大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，灌胃不同劑量的提取物，利用高通量測序技術(shù)（16S rDNA V3+V4區(qū)測序）分析大鼠糞便和盲腸內(nèi)容物的微生物多樣性和豐度，明確食用玫瑰花對大鼠腸道微生物的影響程度，并結(jié)合轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果從腸道微生物的角度揭示玫瑰花對機(jī)體的功能作用。

1 材料與方法

1.1 材料

玫瑰花（云南墨紅品種），大理七彩云花生物有限公司。

1.2 主要試劑

無水乙醇、無水乙醚，天津市化學(xué)試劑三廠；甘油三酯、膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒，煙臺(tái)奧斯邦生物工程有限公司；Trizol，美國Invitrogen公司。

1.3 主要儀器

電子天平（感量為0.0001 g），沈陽龍騰電子有限公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋（HH-8）：國華電器有限公司；真空冷凍干燥機(jī)（BILON-12）；鄭州比朗儀器有限公司；高速多功能粉碎機(jī)：永康市鉑歐五金制品有限公司；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司；海爾冰箱（BCD-208K/A）。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 玫瑰浸提物的提取流程[9-11]新鮮玫瑰花瓣→初步曬干→烘干→粉碎→粉末→35倍蒸餾水浸提3次→過濾→合并濾液→真空冷凍干燥→凍干物粉碎→玫瑰水提物。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組與飼喂管理

1.4.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇[12]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由昆明醫(yī)科大學(xué)提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證：SYXK（滇）K2015-0002]，選擇健康成年雄性SD大鼠，體重130～150 g，發(fā)育正常，無畸形，無外傷及皮膚污染物；體形豐滿，頭部端正，胸廓和背部良好及寬闊，臀部渾圓而勻稱，四肢正常；眼部無分泌物，鼻無黏液流出，口腔無出血，耳無外傷；營養(yǎng)良好，飲食和兩便正常，行動(dòng)迅速，反應(yīng)靈敏。

1.4.2.2 飼養(yǎng)方法及管理 在空調(diào)動(dòng)物飼養(yǎng)室中同室群籠飼養(yǎng)大鼠，自由采食和飲水。每天換一次墊料、鼠籠，清洗飲水瓶。每天定時(shí)通風(fēng)，記錄動(dòng)物室溫度和濕度，要求室溫（20±2）℃，濕度45%～60%?；A(chǔ)飼料配方：玉米350 g/kg、麥麩250 g/kg、豆粨 250 g/kg、魚粉 80 g/kg、酵母 20 g/kg、骨粉 20 g/kg、乳清粉 10 g/kg、鹽 5 g/kg、菜油 5 g/kg、礦物添加劑1 g/kg、復(fù)合維生素0.3 g/kg、蛋氨酸1.3 g/kg、賴氨酸0.7 g/kg、魚肝油0.5 g/kg，由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心制作。

1.4.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組別設(shè)計(jì)所有大鼠全部飼喂基礎(chǔ)飼料一周以適應(yīng)環(huán)境和飼喂方式。1周后根據(jù)TC基礎(chǔ)值水平，隨機(jī)分為4組，每組8只大鼠。適應(yīng)期結(jié)束后進(jìn)入為期28 d的干預(yù)期，其中對照組灌胃蒸餾水，玫瑰組按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)劑量每日經(jīng)口灌胃玫瑰水提物。具體設(shè)計(jì)見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組別設(shè)計(jì)Table1 Group design of experimental rats

1.4.2.4 灌胃劑量 龍剛[13]研究表明，食用玫瑰水提物為急性無毒，LD50＞10 g/kg bw，這與普洱茶茶褐素毒性一樣（龔加順，2007）。因此，本實(shí)驗(yàn)參照課題組先前大鼠實(shí)驗(yàn)所用普洱茶茶褐素的低劑量（0.28125 g/kg bw）、中劑量（0.5625 g/kg bw）、高劑量（1.125 g/kg bw）作為本次試驗(yàn)劑量。

1.4.3 待測血清、盲腸內(nèi)容物、糞便及肝臟組織的制備[14]

1.4.3.1 血清制備 適應(yīng)期7 d和干預(yù)期28 d結(jié)束時(shí)，12 h禁食不禁水，乙醚麻醉大鼠，眼眶采血。收集血樣室溫放置1 h后，3 000 r/min低速離心15min后，用移液槍吸取上層血清分裝于離心管中，待測。

1.4.3.2 糞便采集 干預(yù)期28 d結(jié)束時(shí)，無菌條件下收集大鼠24 h內(nèi)的糞便，分別命名為正常對照組（CZC）、玫瑰水提物低劑量組（CDL）、玫瑰水提物中劑量組（CZL）、玫瑰水提物高劑量組（CGL），分別置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.3.3 盲腸內(nèi)容物的采集及肝臟的摘取 干預(yù)期28 d結(jié)束后，乙醚麻醉大鼠，由試驗(yàn)人員按住大鼠的頸部，于無菌的條件下，用手術(shù)刀劃開大鼠腹部，取出盲腸內(nèi)容物，置于無菌試管內(nèi)，分別命名為正常對照組（BZC）、玫瑰水提物低劑量組（BDL）、玫瑰水提物中劑量組（BZL）、玫瑰水提物高劑量組（BGL）；摘取肝臟，置于無菌試管內(nèi)，分別命名為正常對照組（AZC）、玫瑰水提物低劑量組（ADL）、玫瑰水提物中劑量組（AZL）、玫瑰水提物高劑量組（AGL）。

1.4.4 指標(biāo)測定

1.4.4.1 生長指標(biāo)的測定 每日觀察大鼠的活動(dòng)情況，記錄飲水量和采食量，每周測量體長，稱量體重。

1.4.4.2 血清生化指標(biāo)的測定 采用Au680全自動(dòng)生化儀進(jìn)行高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、總膽固醇含量的測定。

1.4.4.3 大鼠盲腸內(nèi)容物和糞便的測定[15]采用16S rDNA測序技術(shù)，對樣品V3+V4可變區(qū)的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序，拼接成Tag，并根據(jù)Tag進(jìn)行物種分類、OTU分析、多樣性分析、多樣品的比較分析等。

1.4.4.4 大鼠肝臟組織RNA的提取 采用TRIzol法并對Total RNA質(zhì)量進(jìn)行檢測。

1.4.4.5 各組樣品cDNA文庫的構(gòu)建和Illumina HiSeqTM2500測序；由廣州基迪奧公司完成。

1.4.5 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，所有數(shù)據(jù)先進(jìn)行Grubbs檢驗(yàn)，以排除過失誤差；經(jīng)G檢驗(yàn)合格的數(shù)據(jù)，采用SPSS19.0，用鄧肯氏法進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 玫瑰水提物對大鼠生長發(fā)育及脂質(zhì)含量的影響

各組大鼠體重、采食量、飲水量均無顯著性差異；各組大鼠TC、TG、LDL和HDL值均無顯著性差異，說明低、中、高劑量玫瑰水提物對大鼠的生長和各項(xiàng)指標(biāo)均不產(chǎn)生異常影響。

2.2 玫瑰水提物對大鼠腸道菌群的影響

Alpha多樣性是對單個(gè)樣品中物種多樣性的分析，包括chao1值、ACE值、香農(nóng)以及辛普森指數(shù)[16]等。香農(nóng)指數(shù)越大，辛普森指數(shù)越接近于0，就表示該樣品中的物種越豐富。表2根據(jù)辛普森指數(shù)的大小，糞便樣品中各組別物種豐富程度為CGL＞CZC＞CZL＞CDL，說明高劑量玫瑰水提取物提高了大鼠糞便微生物的多樣性。盲腸內(nèi)容物樣品中各組別物種豐富程度為BGL＞BZC＞BZL＞BDL，這也說明高劑量玫瑰水提物有助于改善大鼠盲腸微生物的多樣性。

表2 樣品在0.03距離下的Alpha豐富程度Table2 Samples at distances of 0.03 Alpha richness

通過不同組別樣品最佳分類水平上的物種分布圖1的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同飲食的大鼠盲腸微生物含量有明顯差異。從圖1e～圖1h可以看出，每組均含有普氏菌屬和擬桿菌屬，以及密螺旋體屬和顫螺旋菌屬，普氏菌屬的含量為BGL＜CZC＜CZL＜CDL；擬桿菌屬的含量為BDL＜BGL＜BZL＜BZC；顫螺旋菌屬的含量為BDL＜BZL＜BZC＜BGL；密螺旋體屬的含量為BZL＜BDL＜BZC＜BGL。說明高劑量玫瑰水提取物有助于增加大鼠盲腸密螺旋體屬和顫螺旋菌屬含量。安鋒利[17]發(fā)現(xiàn)在以蛋白質(zhì)、脂肪為主要膳食成分的人群中，擬桿菌屬為腸道菌的主導(dǎo)者；當(dāng)機(jī)體長期大量攝取糖類時(shí)，普氏菌屬則成為主導(dǎo)菌群。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，普氏菌屬在每組大鼠盲腸微生物中均為優(yōu)勢菌群。2015年，Scheperjans等[18]首次報(bào)道了帕金森病患者腸道微生物組成的變化。該研究發(fā)現(xiàn)與正常人相比，帕金森病患者腸道中普雷沃菌科減少。而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低中劑量玫瑰水提物均對大鼠普雷沃菌科有增加趨勢，因此，推測低中劑量玫瑰水提物對預(yù)防帕金森病有一定效果。

從圖1a～圖1d可以看出不同飲食（正常對照組、玫瑰水提物低劑量組、玫瑰水提物中劑量組、玫瑰水提物高劑量組）的大鼠糞便中普雷沃氏菌科和擬桿菌科含量差異明顯。普雷沃氏菌科的含量為CGL＜CZC＜CZL＜CDL；擬桿菌科的含量為CDL＜CZC＜CGL＜CZL；S24-7的含量為CZL＜CDL＜CGL＜CZC；毛螺旋菌科的含量為CGL＜CDL＜CZC＜CZL；瘤胃菌科的含量為CZC＜CGL＜CDL＜CZL。這里普雷沃式菌科與盲腸內(nèi)容物樣品中普氏菌屬一樣，屬優(yōu)勢菌，然而，高劑量玫瑰水提取物可抑制普雷沃氏菌科的含量，增加擬桿菌科的含量。Ley等[19]研究發(fā)現(xiàn)肥胖鼠盲腸內(nèi)容物或肥胖人糞便的擬桿菌門數(shù)量低于瘦鼠或瘦人，即擬桿菌增加有助于控制體重，說明高劑量玫瑰水提取物具有潛在的減肥功能，這可能與高劑量玫瑰水提取物增加了大鼠腸道微生物多樣性密切相關(guān)（見表2）。

圖1 最佳分類水平上的物種分布圖Fig.1 Species distribution on the best classification level

2.3 不同組別大鼠肝臟組織轉(zhuǎn)錄組測序

2.3.1 總RNA、測序文庫質(zhì)檢結(jié)果所建文庫經(jīng)檢測，正常對照組文庫質(zhì)量濃度為1 230 ng/μL；玫瑰水提物低劑量組文庫質(zhì)量濃度為1 296 ng/μL；中劑量組為1 299 ng/μL；高劑量組為1 188 ng/μL。Agilent 2100檢測顯示4個(gè)樣品RNA分子完整數(shù)均為8.6，表明RNA質(zhì)量完好，滿足后續(xù)的測序和分析要求。

2.3.2 基因的表達(dá)量統(tǒng)計(jì)及差異表達(dá)基因篩選本文采用FPKM（Fragments per kilobase of transcript per million mapped reads）值來計(jì)算基因表達(dá)量。通過分析4個(gè)樣本的基因表達(dá)量，共有22 460個(gè)基因存在差異表達(dá)，有152個(gè)基因上調(diào)表達(dá)，171個(gè)下調(diào)表達(dá)。各組大鼠差異基因散點(diǎn)圖如圖2所示。與正常對照組相比，玫瑰水提物低劑量組顯著差異表達(dá)的基因有101個(gè)，上調(diào)52個(gè)，下調(diào)49個(gè)；中劑量組有101個(gè)，上調(diào)56個(gè)，下調(diào)45個(gè)；高劑量組有76個(gè)，上調(diào)37個(gè)，下調(diào)39個(gè)；與低劑量組相比，玫瑰水提物中劑量組顯著差異表達(dá)的基因有76個(gè)，上調(diào)47個(gè)，下調(diào)49個(gè)；高劑量組有101個(gè)，上調(diào)63個(gè)，下調(diào)72個(gè)；與中劑量組相比，玫瑰水提物高劑量組顯著差異表達(dá)的基因有80個(gè)，上調(diào)42個(gè)，下調(diào)38個(gè)。根據(jù)基因的顯著差異表達(dá)，推測大鼠在飲用玫瑰水提物一個(gè)月后，由于生物的適應(yīng)性和應(yīng)激響應(yīng)而出現(xiàn)了新的轉(zhuǎn)錄本。

圖2 差異基因散點(diǎn)圖Fig.2 Differential gene scatter plot

2.3.3 顯著富集通路分析 顯著富集通路分析能準(zhǔn)確的將基因定位在某個(gè)代謝途徑中的某一個(gè)節(jié)點(diǎn)上，并確定差異表達(dá)基因參與的最主要生化代謝途徑和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。肝臟差異表達(dá)基因篩選與分析如表3所示。

由表3可知，通路中可注釋的所有基因有7 136個(gè)，與對照組相比，低劑量組通路能夠注釋的顯著差異基因有24個(gè)；中劑量組有30個(gè)；高劑量組有22個(gè)。與對照組相比，低劑量組顯著富集的通路為抗原加工和提呈（ko04612）；中劑量組顯著富集的通路有4條，分別是抗原加工和提呈（ko04612）、TNF信號(hào)通路（ko04668）、NOD樣受體信號(hào)通路（ko04621）、破骨細(xì)胞分化（ko04380）；高劑量組顯著富集的通路有6條，分別為抗原加工和提呈（ko04612）、MAPK信號(hào)通路（ko04010）、細(xì)胞黏附分子（ko04514）、吞噬體（ko04145）、T細(xì)胞受體信號(hào)通路（ko04660）和TNF信號(hào)受體通路（ko04668）。與低劑量組相比，中劑量組通路可注釋的顯著差異基因有28個(gè)，顯著富集的通路主要有抗原加工和提呈（ko04612）、TNF信號(hào)通路（ko04668）、破骨細(xì)胞分化（ko04380）、NOD樣受體信號(hào)通路（ko04621）和吞噬體（ko04145）。以上顯著富集通路主要集中在免疫系統(tǒng)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)運(yùn)輸相關(guān)的通路中。

表3 顯著富集通路Table3 Pathway of significant enrichment

表3的結(jié)果說明玫瑰水提物對大鼠抗原加工和提呈通路有顯著影響。抗原加工和提呈是指抗原提呈細(xì)胞（Antigen presenting cells，APC）攝取抗原并加工成肽分子，以主要組織相容性復(fù)合體（Major histocompatibility complex，MHC）-肽分子復(fù)合體表達(dá)于細(xì)胞表面，由T細(xì)胞上T細(xì)胞受體特異性識(shí)別抗原肽-MHC復(fù)合物后啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞系統(tǒng)，進(jìn)而誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞活化、增生、分化，從而產(chǎn)生一系列免疫學(xué)效應(yīng)?？乖岢蔬^程在免疫應(yīng)答過程中起中樞作用[20]。APC在機(jī)體的抗腫瘤免疫功能中起著非常重要的作用。APC攝取和加工抗原，以MHC_I類分子或MHC_Ⅱ類分子將抗原信息分別提呈給CD8+T細(xì)胞或CD4+T細(xì)胞，激發(fā)特異性免疫反應(yīng)。

2.3.4 顯著差異基因分析 根據(jù)基因注釋，對主要差異基因進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表4所示。

表4中各組log2比值的絕對值大于1的為兩組的顯著差異表達(dá)基因。其中，差異基因的log2 Ratio的絕對值大于9的有RT1-DMa，Hspa1b，LOC100910771和Pak2。

圖3 抗原加工與提呈通路圖Fig.3 Pathway of antigen processing and presentation

表4 主要顯著差異表達(dá)基因Table4 Significant different expressed gene

Hspa1b基因表達(dá)產(chǎn)生HSP（Heat shock protein）蛋白[21]，屬熱休克蛋白基因家族，是在從細(xì)菌到哺乳動(dòng)物中廣泛存在的一類熱應(yīng)急蛋白，是一種保護(hù)性蛋白，其產(chǎn)物參與炎癥和應(yīng)激反應(yīng)，并作為分子伴侶在內(nèi)源性抗原的加工提呈中發(fā)揮作用，用于細(xì)胞救急，高溫引起HSP，之后被切割的抗原進(jìn)入細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞受到很大環(huán)境壓力時(shí)，它的第一反應(yīng)就是合成更多的熱休克蛋白。玫瑰水提物低劑量組相比正常對照組，Hspa1a（+1.6）表達(dá)顯著上調(diào)，Hspa1b（-2.1）和LOC103692716（-1.2）表達(dá)顯著下調(diào)。玫瑰水提物中劑量組與正常對照組相比，Hspa1b（-2.0）和LOC103692716（-2.3）基因表達(dá)均顯著下調(diào)。而玫瑰水提物高劑量組與正常對照組比，Hspa1b（-10.4）顯著下調(diào)，LOC103692716（-0.6）基因表達(dá)下調(diào)。

RT1-Dma也稱為MHC II，屬于ko4612通路。MHC分子在免疫應(yīng)答過程中參與抗原識(shí)別。在MHCⅡ通路途徑中RT1-DMa（-11.9）基因表達(dá)顯著下調(diào)。因此，CD4可識(shí)別或結(jié)合細(xì)胞表面的MHCⅡ類分子減少，則CD4T細(xì)胞上的T細(xì)胞受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)減少。

表4結(jié)果顯示，灌胃中劑量玫瑰水提物的大鼠與灌胃蒸餾水大鼠相比較，特異性殺傷靶細(xì)胞的能力增強(qiáng)，免疫能力提高。在整個(gè)MHCⅠ和MHCⅡ通路中，MHCⅠ中 RT1-A1（+2.1）、RT1-CE16（+1.6）、RT1-CE10（+1.4）基因表達(dá)均顯著上調(diào)。因此，CD8可識(shí)別或結(jié)合細(xì)胞表面的MHCⅠ類分子增多，則CD8T細(xì)胞活化增強(qiáng)，亦使分化出的細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）增多，CTL具有細(xì)胞毒作用，最終特異性殺傷靶細(xì)胞（細(xì)胞內(nèi)寄生病原體感染的細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞）的能力也增強(qiáng)。

MAP3K7（TAK1）屬于通路 ko44027。絲裂原活化蛋白激酶[22]（Mitogen-activated protein kinases，MAPKs）是細(xì)胞內(nèi)的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。研究表明，MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)胞內(nèi)具有生物進(jìn)化的高度保守性，在低等原核細(xì)胞和高等哺乳類細(xì)胞內(nèi)，目前均已發(fā)現(xiàn)存在著多條并行的MAPKs信號(hào)通路，不同的細(xì)胞外刺激可使用不同的MAPKs信號(hào)通路，通過其相互調(diào)控而介導(dǎo)不同的細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng)（如細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)化及凋亡等）[23-24]。相對于正常對照組，玫瑰水提物低劑量組的MAPK基因表達(dá)上調(diào)（+0.5），而中劑量組（-1.1）和高劑量組（-1.3）MAPK基因表達(dá)均顯著下調(diào)。

PAK1屬于通路ko4409。p21活化激酶（p21-activated kinases，PAKs）屬于進(jìn)化上保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族[25]。它們在信號(hào)通路中主要以結(jié)節(jié)（nodal）激酶的角色連接上下游靶蛋白，是重要的肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重構(gòu)和細(xì)胞遷移的調(diào)節(jié)分子[26]。相對于正常對照組，玫瑰水提物高劑量組的PAK1（+9.8）基因表達(dá)顯著上調(diào)。表明高劑量玫瑰水提物可能促進(jìn)正常大鼠肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重構(gòu)和細(xì)胞遷移。

生長阻滯和DNA損傷誘導(dǎo)基因（Growth arrest and DNA damage 45G，GADD45G） 也稱作CR6、DDIT2和GRP17，是GADD45家族的重要成員，該基因家族是對細(xì)胞增殖進(jìn)行負(fù)性調(diào)控的應(yīng)激反應(yīng)基因家族。GADD45G可參與DNA損傷修復(fù)[27]，在細(xì)胞凋亡、細(xì)胞生存以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮重要作用，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的關(guān)系亦十分密切。近年來大量的研究證實(shí)，GADD45G在淋巴瘤、肺癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、骨髓癌、甲狀腺癌以及垂體腺瘤等廣泛的癌癥中表達(dá)下調(diào)。表4顯示，隨著玫瑰水提取物濃度的增加，與正常對照組相比，GADD45G表達(dá)逐漸增強(qiáng)，中劑量（+1.9）和高劑量組（+2.2）GADD45G表達(dá)均顯著上調(diào)。顯示出玫瑰水提取物對可能具有潛在的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞衰老的作用。

白偉芳[28]研究表明玫瑰花多糖具有一定的抗腫瘤活性，它能提高機(jī)體免疫力和抗氧化能力從而達(dá)到抑瘤的作用。因此，玫瑰水提物的作用是否與所含多糖有關(guān)，需要進(jìn)一步研究。同時(shí)，飲用玫瑰水提物后，大鼠肝臟中的一些免疫相關(guān)基因如HSPA1_8，MHC1，MHC2，MAP3K7，TAK1和PAK1等轉(zhuǎn)錄活動(dòng)發(fā)生顯著變化；環(huán)境信息處理中的信號(hào)通路如CAMs、TNF信號(hào)通路和MAPK信號(hào)通路被激活；一些分子過程的通路如吞噬體也被激活。這對于揭示玫瑰花的抗菌、抗病毒、抗氧化、抗衰老等作用提供新思路。這些作用的發(fā)生得益于玫瑰水提取物具有改善腸道微生物的多樣性，特別是高劑量玫瑰水提取物。今后需進(jìn)一步研究玫瑰水提取物在機(jī)體內(nèi)的代謝組學(xué)，深入揭示提取物-腸道微生物-機(jī)體健康關(guān)系。

3 結(jié)論

低、中、高劑量玫瑰水提物均對正常大鼠血脂指標(biāo)和生長發(fā)育指標(biāo)無顯著影響。低劑量玫瑰水提取物有助于提高糞便和盲腸中普雷沃氏菌科含量，降低擬桿菌科含量。而高劑量玫瑰水提取物可有效改善大鼠糞便和盲腸微生物的多樣性。同時(shí)，降低糞便和盲腸中普雷沃氏菌科含量，提高擬桿菌科含量。表明玫瑰水提取物劑量不同對腸道微生物的影響差異極大。肝臟轉(zhuǎn)錄組學(xué)結(jié)果顯示，不同劑量的玫瑰水提取物均顯著影響抗原加工和提呈（ko04612）通路，劑量越高受影響通路越多。這與高劑量玫瑰水提取物對腸道微生物有較大影響有關(guān)。推測玫瑰水提取物可通過干預(yù)腸道微生物多樣性，進(jìn)而影響機(jī)體健康。肝臟轉(zhuǎn)錄組學(xué)結(jié)果也提示玫瑰水提取物可能具有潛在的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞衰老，提高機(jī)體免疫功能的作用。