連家燕，謝文林

（中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院病理科，深圳 518107）

彈性纖維（elastic fibers, EFs）廣泛分布于全身各處，在肺泡壁、動(dòng)脈壁和皮膚尤其豐富。在HE 染色中，彈性纖維和膠原纖維都呈紅色，量少時(shí)兩者較難區(qū)別。彈性纖維染色可用于多種疾病的診斷，如：觀(guān)察動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)脈壁的改變以診斷心血管疾病，鑒別肌上皮瘤與涎腺多形性腺瘤，診斷皮膚彈力纖維病變等[1]。同時(shí)，彈性纖維也是肺泡及支氣管的構(gòu)成骨架，與肺癌的生長(zhǎng)、分化、轉(zhuǎn)移及預(yù)后均有極為密切的關(guān)系[2]。常用的彈性纖維染色方法很多，各有其優(yōu)、缺點(diǎn)。本文采用常用的Gomori醛品紅和地衣紅兩種染色方法對(duì)皮膚、肺和血管組織進(jìn)行對(duì)比染色觀(guān)察，以篩選出更有利于臨床病理診斷的彈性纖維染色方法。

材料與方法

1 材料

收集中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院2018年1月－12月來(lái)源于皮膚、肺和血管的含有彈性纖維的組織石蠟標(biāo)本90例，全部組織均用4%中性緩沖福爾馬林溶液固定（pH=7.0），常規(guī)脫水、透明、包埋及切片。每個(gè)組織均連續(xù)切取2張片，切片厚度均為4～5μm。

2 試劑配制

醛品紅溶液：0.5g堿性品紅溶于100ml 70%乙醇中，再慢慢加入1ml濃鹽酸和1ml三聚乙醛，緊塞瓶蓋，輕輕搖勻混合，室溫下放置約1～2d（冬季約4～5d）。觀(guān)察溶液轉(zhuǎn)變?yōu)樯钭仙藭r(shí)醛品紅液成熟，可過(guò)濾于小口砂塞瓶，于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

桔黃G液：2g桔黃G、5g磷鎢酸溶于100ml蒸餾水，搖勻混合，4℃冰箱保存。

酸化高錳酸鉀水溶液：A液—0.5g高錳酸鉀溶于100mL蒸餾水，混勻傾入棕色瓶，置4℃冰箱保存；B液—0.5ml硫酸溶液慢慢滴入99.5ml蒸餾水中，慢慢搖勻，切勿大力搖動(dòng)，保存于玻璃瓶，4℃冰箱保存。A、B兩液分瓶存放，臨用前分別取等量混合使用。

2%草酸溶液：2g草酸溶于100ml蒸餾水，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

地衣紅酒精液：地衣紅1g+70%酒精100ml+濃鹽酸1ml，先將地衣紅溶于70%酒精，然后慢慢滴入濃鹽酸，放置1～2d后即可使用。

3 Gomori醛品紅染色法

常規(guī)石蠟切片5μm厚，脫蠟至水，流水沖洗5min，蒸餾水沖洗1min；酸化高錳酸鉀氧化5min，蒸餾水洗1min；2%草酸漂白1min， 蒸餾水洗1min；70%酒精稍洗1min；然后于組織中滴入醛品紅液染5～10min左右， 70%酒精反復(fù)洗滌3次，每次約20s，顯微鏡下觀(guān)察切片不再脫色，背景對(duì)比清晰鮮明為止；最后用橙黃G液滴染約2min，快速水洗，脫水、透明、封片。

4 地衣紅染色法

常規(guī)石蠟切片5μm厚， 脫蠟至70%酒精；入地衣紅酒精液染2.5～3h；反復(fù)用70%酒精洗滌數(shù)次，顯微鏡下觀(guān)察至切片不再脫色，背景清晰鮮明為止；Mayer蘇木素復(fù)染，流水沖洗返藍(lán)10min，脫水、透明、封片。

圖1 皮膚彈性纖維Gomori醛品紅染色（A）和地衣紅染色（B）。比例尺，50μmFig. 1 Gomori’s aldehyde-fuchsin staining (A) and orcein staining (B) of elastic fibers in the skin. Scale bar, 50μm

圖2 肺中彈性纖維Gomori醛品紅染色（A）和地衣紅染色（B）。比例尺，50μmFig. 2 Gomori’s aldehyde-fuchsin staining (A) and orcein staining (B) of elastic fibers in the lung. Scale bar, 50μm

結(jié) 果

Gomori醛品紅染色法結(jié)果顯示，在皮膚（圖1A）、肺（圖2A）和血管（圖3A）組織中的彈性纖維均清晰可見(jiàn)，彈性纖維呈深紫色，背景色為不同程度的黃色，二者對(duì)比明顯。

地衣紅染色法結(jié)果顯示，在皮膚（圖1B）、肺（圖2B）和血管（圖3B）組織中的彈性纖維呈深棕紅色，背景色為不同程度的淡紅色，二者反差相對(duì)較小，區(qū)分度不如Gomori醛品紅染色法明顯。

圖3 血管中彈性纖維Gomori醛品紅染色（A）和地衣紅染色（B）。比例尺，50μmFig. 3 Gomori’s aldehyde-fuchsin staining (A) and orcein staining (B) of elastic fibers in the blood vessels. Scale bar, 50μm

討 論

彈性纖維是由集合成束的彈性微纖維和均質(zhì)狀的彈性蛋白組成的，彈性蛋白賦予彈性纖維彈性。在新鮮標(biāo)本中，彈性纖維呈黃色發(fā)亮的細(xì)線(xiàn)條狀；在HE染色下，組織細(xì)胞核呈藍(lán)色，胞質(zhì)、紅細(xì)胞和膠原纖維等呈不同程度的粉紅色，彈性纖維也被染成粉紅色，導(dǎo)致在顯微鏡下很難區(qū)分到底哪些是彈性纖維，哪些是膠原纖維，不利于臨床診斷。同時(shí)彈性纖維在肺腺癌、慢性支氣管炎、動(dòng)脈粥樣硬化等病理狀態(tài)下發(fā)生改變，由于增生、斷裂而排列紊亂，更加導(dǎo)致對(duì)彈性纖維的辨認(rèn)難度增加[3]。

彈性纖維的特殊染色方法有多種，Gomori醛品紅染色和地衣紅染色這兩種方法都能顯示彈性纖維，但它們也各有優(yōu)缺點(diǎn)。地衣紅染色時(shí)，不僅染色時(shí)間長(zhǎng)，一般需要3h，而且70%酒精分化后，對(duì)比效果相對(duì)較差，在顯微鏡下觀(guān)察分化效果時(shí)，背景中的紅細(xì)胞、細(xì)胞核、平滑肌和膠原纖維也染上了色，背景脫色效果較差，彈性纖維與背景的區(qū)分度相對(duì)較差，容易影響結(jié)果判斷，尤其是含出血、膠原纖維多的組織不易觀(guān)察彈性纖維。醛品紅染色時(shí)，染色時(shí)間短，一般需要10min，著色鮮艷、清晰，對(duì)比效果相對(duì)較好，染色結(jié)果比較穩(wěn)定，特別在顯示肺組織肺膜彈性纖維時(shí)非常清晰，對(duì)比度相對(duì)較好。Travis等［4］報(bào)道癌組織破壞臟層胸膜彈性層才能視為侵犯臟層胸膜，建議HE切片難以評(píng)價(jià)時(shí)，應(yīng)加做彈性纖維染色進(jìn)一步明確診斷。因此清晰地顯示臟層胸膜對(duì)于臨床診斷至關(guān)重要。

醛品紅染色具有較好的染色效果，但也需要注意一些細(xì)節(jié)問(wèn)題。首先，醛品紅染色的關(guān)鍵是醛品紅液的配制，配制好的醛品紅液需要靜置4～5d，待變?yōu)樯钭仙礊槌墒旆娇墒褂?，此液可保?-6月，如染液時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則染色時(shí)間要加長(zhǎng)，但選染能力下降，會(huì)出現(xiàn)共染現(xiàn)象。其次，彈性纖維經(jīng)強(qiáng)氧化劑酸性高錳酸鉀氧化后，對(duì)于醛品紅的親和性大為增加，染色鮮艷，對(duì)比清晰，效果明顯。根據(jù)筆者多年來(lái)的經(jīng)驗(yàn)，在皮膚彈性纖維染色中，彈性纖維的形態(tài)是單條狀，鏡下不容易觀(guān)察，彈性纖維經(jīng)過(guò)氧化后著色鮮艷、清晰，對(duì)比度較好，但在臟層胸膜、動(dòng)脈彈性纖維染色中，彈性纖維的形態(tài)是膜樣結(jié)構(gòu)，鏡下容易觀(guān)察，經(jīng)過(guò)氧化后的彈性纖維和背景分別染為深紫色和淺紫色，對(duì)比不夠鮮明。因此，經(jīng)過(guò)反復(fù)優(yōu)化，對(duì)于不同的組織我們采用不同的前處理方法，皮膚組織需經(jīng)酸性高錳酸鉀氧化、草酸漂白，而動(dòng)脈、臟層胸膜組織可不經(jīng)酸性高錳酸鉀氧化、草酸漂白，可取得更佳的染色效果。另外，切片浸入70%酒精分化時(shí)，必須在顯微鏡下控制分化效果，時(shí)間不宜太久，否則彈性纖維著色較淡。

綜上所述，兩種特殊染色方法均可用于檢測(cè)組織的彈性纖維，但Gomori醛品紅染色法具有顏色鮮艷，對(duì)比明顯，結(jié)構(gòu)清晰，更容易觀(guān)察等優(yōu)點(diǎn)，是優(yōu)選的彈性纖維染色方法；同時(shí)，此方法可以縮短彈性纖維染色時(shí)間，提高彈性纖維染色效率，節(jié)省彈性纖維染色成本，值得在臨床病理中推廣，能夠?yàn)榕R床病理工作提供一種觀(guān)察彈性纖維的好方法。