王 瑩，劉艷俊，劉 瑩，張春暉

(河北北方學(xué)院，河北 張家口 075000)

病證結(jié)合模型主要以復(fù)合因素模擬病因，將現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的辨病特長與中醫(yī)的辨證特色相結(jié)合，在同一動物體上同時復(fù)制相互聯(lián)系的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病及中醫(yī)證候，深刻反映中醫(yī)中藥研究特點(diǎn)，積極推動中醫(yī)證候生物學(xué)本質(zhì)和中藥藥效的研究，關(guān)鍵在于將中醫(yī)的病因?qū)W說與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)病機(jī)制緊密結(jié)合。病證結(jié)合動物模型是中醫(yī)實驗動物模型發(fā)展的新方向，這類微觀與宏觀相結(jié)合的中醫(yī)動物模型，是闡明證候生物學(xué)基礎(chǔ)較為合適的研究模式，具有一定的實用價值。從中醫(yī)辨證論治角度出發(fā)，選擇符合中醫(yī)證型的動物模型，研究藥物的作用機(jī)制，方能揭示并闡述中醫(yī)藥對各類疾病的復(fù)雜作用機(jī)制[1]。

氣虛證病證結(jié)合動物模型作為科研工具在近十年的中醫(yī)基礎(chǔ)研究與臨床研究中取得很大進(jìn)展。但目前從中醫(yī)理論角度出發(fā)，尚未有關(guān)于氣虛證病證結(jié)合動物模型研究的系統(tǒng)報道。我們將近年來氣虛證病證結(jié)合動物模型研究的進(jìn)展綜述如下。

1 心氣虛證

1.1 心氣虛證動物模型

目前心氣虛證動物模型的造模方法主要有2種，一是根據(jù)中醫(yī)辨證論治結(jié)合藏象學(xué)說模擬中醫(yī)傳統(tǒng)病因制作模型，一是根據(jù)西醫(yī)病因?qū)W模擬西醫(yī)病理通過手術(shù)的方法制作模型?！鹅`樞·本藏》曰：“人之血?dú)饩裾撸苑钌苡谛悦咭?。”人體生命活動中的兩大類基本物質(zhì)氣與血互根互用、不可分割，氣為血之帥，血為氣之母，氣是血液生成和運(yùn)行的動力，血是氣的化生基礎(chǔ)和載體，有學(xué)者依據(jù)此中醫(yī)理論，在造成動物心血管慢性損傷的基礎(chǔ)上，結(jié)合多次少量放血以耗氣，復(fù)制心氣虛血瘀證動物模型[2]。姚立等[3]采用強(qiáng)迫跑步、控食等復(fù)合因素促使動物在疲勞、饑餓的干預(yù)下達(dá)到氣虛狀態(tài)，并通過灌服大劑量心得安溶液增強(qiáng)對心功能的抑制作用，將氣虛病位定位于心，成功建立Wistar大鼠的心氣虛證模型，使其在整體上客觀表現(xiàn)出心氣虛的病機(jī)變化特點(diǎn)。金戈等[4]采用2次游泳法對38只大鼠進(jìn)行造模，讓大鼠負(fù)重游泳，最大限度地耗竭大鼠體能，并在每日游泳的基礎(chǔ)上，給大鼠灌服大劑量心得安溶液使造模定位于心，誘發(fā)心氣虛證動物實驗?zāi)Ｐ汀ＶT多研究報告表明心氣虛證與左室收縮和舒張功能異常有同一性，有學(xué)者對大鼠、小鼠、犬、兔等動物采用冠狀動脈結(jié)扎法、腹主動脈縮窄法、主動脈瓣穿刺法等模擬西醫(yī)病因病理建立心氣虛證動物模型[5]。

1.2 心氣虛證病證結(jié)合動物模型

心力衰竭的發(fā)生多由心血管疾病導(dǎo)致，是冠心病、擴(kuò)張型心肌病、風(fēng)濕性心瓣膜病及高血壓病等各種心臟病發(fā)展到嚴(yán)重階段的一種復(fù)雜的臨床癥狀群，發(fā)病率高、死亡率高。制作心梗后心衰動物模型是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的熱點(diǎn)之一，近些年來，以氣虛血瘀證結(jié)合心衰復(fù)制出的病證結(jié)合模型頻繁出現(xiàn)在學(xué)科基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用中。林家茂等[6]采納西醫(yī)病理造模因素與中醫(yī)證候造模因素相疊加的研究方法，遵循“運(yùn)血者、即是氣”的中醫(yī)理論指導(dǎo)，利用阿霉素與丙基硫氧嘧啶片雙重藥物攻擊的方法，在造成大鼠慢性心力衰竭的同時形成心氣虛兼血瘀水腫證的癥狀表現(xiàn)，應(yīng)用溫補(bǔ)心脾藥物加以干預(yù)，發(fā)現(xiàn)用藥后能明顯改善動物模型的心功能和相關(guān)證候?qū)W指標(biāo)，從而反證該動物模型建立的合理性。趙明鏡等[7]發(fā)現(xiàn)采用結(jié)扎大鼠冠狀動脈前降支主干致心梗后心衰病證結(jié)合動物模型，既有心主血脈功能的失常,又有心主神明功能的失常,較完整、典型地表現(xiàn)了心氣虛證特征，與大鼠水環(huán)境站臺睡眠剝奪法致生理性功能失調(diào)所致的心氣虛證動物模型相比，心梗心衰病證結(jié)合模型局部器質(zhì)性病變導(dǎo)致的心氣虛證候表現(xiàn)更穩(wěn)定、更有規(guī)律性。

2 脾氣虛證

2.1 脾氣虛證動物模型

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為脾為后天之本，氣血生化之源，脾虛則氣血乏源，張彩云等[8]采用勞倦傷脾加飲食失節(jié)多因素復(fù)合法建立脾氣虛證大鼠模型，造模過程中，模型大鼠出現(xiàn)毛發(fā)直立稀松、無光澤，尾巴細(xì)瘦、淡白，體質(zhì)量持續(xù)減少、體型瘦削，糞便松軟、不成形等體征變化，白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)可作為判定脾氣虛證動物模型成功建立與否的參考指標(biāo)。施旭光等[9]分別采用酒醋硝黃飼料法、酒硝黃灌胃法、大黃灌胃法和利血平法復(fù)制4種脾氣虛證動物模型，綜合比較各組大鼠生物學(xué)體征的變化及體質(zhì)量、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、血清肌酸激酶水平等指標(biāo)，認(rèn)為通過酒醋硝黃飼料法復(fù)制出的動物模型最接近中醫(yī)脾氣虛證候特征，是目前最理想、最有效的脾氣虛證動物造模方法之一。

2.2 脾氣虛證病證結(jié)合動物模型

馮果等[10]采用飲食失節(jié)、勞倦過度、苦寒瀉下的方法復(fù)制脾氣虛證大鼠模型，并在此基礎(chǔ)上給大鼠乙醇、去氧膽酸鈉、吲哚美辛等，并將氨水作為日常飲用水，成功建立大鼠脾氣虛胃炎動物模型。楊宇峰等[11]對大鼠單日喂食甘藍(lán)，雙日高糖高脂膳食持續(xù)喂養(yǎng)，游泳至耐力極限。第4周后根據(jù)體質(zhì)量單劑量腹腔注射鏈脲佐菌素，通過勞倦加飲食不節(jié)(高糖高脂膳食)、復(fù)合腹腔注射鏈脲佐菌素造模方法成功復(fù)制出脾氣虛證2型糖尿病病證結(jié)合動物模型，模型組出現(xiàn)了游泳耐力逐日下降、食少懶動、大便溏薄、精神萎靡不振、體毛光亮度減退等現(xiàn)象。吳擁軍等[12]基于中醫(yī)基礎(chǔ)理論利用大黃瀉下法加卵清蛋白致敏建立脾氣虛變應(yīng)性鼻炎動物模型，應(yīng)用溫陽益氣方進(jìn)行藥物干預(yù)，研究發(fā)現(xiàn)益氣溫陽方能有效抑制炎癥細(xì)胞在變應(yīng)性鼻炎大鼠鼻黏膜的匯集，穩(wěn)定細(xì)胞膜，減輕組織水腫，從而發(fā)揮治療作用。

3 腎氣虛證

3.1 腎氣虛證動物模型

《素問·逆調(diào)論》曰：“腎者水藏，主津液。”《素問·水熱穴論》曰：“腎者，胃之關(guān)也，關(guān)門不利，故聚水而從其類也，上下溢于皮膚，故為胕腫?！笨梢娔I主水，腎氣具有主司和調(diào)節(jié)全身水液代謝的功能。相關(guān)學(xué)者利用卡那霉素藥物注射方法制作腎氣虛證大鼠模型，實驗證明腎氣虛模型大鼠腎臟AQP2 mRNA低表達(dá),或可在分子水平上揭示腎氣虛表現(xiàn)為尿量增多的原因，為中醫(yī)學(xué)“腎主水”理論提供實驗依據(jù)[13]?？謧I，勞則氣耗，石幼琪等[14]基于中醫(yī)“恐傷腎”、“房勞傷腎”理論和運(yùn)動性疲勞的特點(diǎn)，采用遞增負(fù)荷游泳加懸吊應(yīng)激的方案，給予動物較長期強(qiáng)應(yīng)激，迫使其高強(qiáng)度運(yùn)動,使其長期處于恐懼、緊張、過勞狀態(tài)，成功建立運(yùn)動性疲勞腎氣虛動物模型[14]。

3.2 腎氣虛證病證結(jié)合動物模型

中醫(yī)理論認(rèn)為腎為先天之本，五臟陰陽之本，各臟精、氣、陰、陽不足的病變最終都會累及腎之精、氣、陰、陽。目前研究中腎氣虛病證結(jié)合動物模型較少。我們參照驚恐應(yīng)激大鼠模型、應(yīng)激致“腎虛”動物模型和運(yùn)動性疲勞低血睪酮模型，采用驚恐應(yīng)激、懸吊應(yīng)激和游泳疲勞的方案，結(jié)合哮喘造模方法，建立腎氣虛哮喘病證結(jié)合模型，通過觀察動物主要的直觀癥狀和特征表現(xiàn)，并以中藥復(fù)方干預(yù)，檢測相關(guān)微觀指標(biāo)，初步證實構(gòu)建的腎氣虛證哮喘病證結(jié)合動物模型具有可行性及可操作性[15]。宋紅等[16]在前期研究基礎(chǔ)上采用卵蛋白聯(lián)合游泳力竭法、恐傷腎雙因素復(fù)合法成功復(fù)制支氣管哮喘腎氣虛證模型，運(yùn)用氫譜核磁共振檢測手段，篩選并鑒定出各組大鼠血清中的差異代謝物，認(rèn)為補(bǔ)肺腎治本，兼以化痰行氣活血、補(bǔ)瀉兼施、緩調(diào)陰陽的藥物治療支氣管哮喘腎氣虛證的可能機(jī)制為促進(jìn)機(jī)體脂類代謝，進(jìn)而改善機(jī)體能量代謝缺乏狀態(tài)，對臨床辨證治療用藥選方具有指導(dǎo)意義。

4 肺氣虛證

4.1 肺氣虛證動物模型

目前制作肺氣虛證動物模型的方法[17-18]主要包括：脂多糖加煙熏法、香煙熏法、鋸末煙熏法、二氧化硫煙熏加木瓜蛋白酶刺激法、博來霉素氣管內(nèi)注入法、呼吸道生物被膜銅綠假單胞菌滴鼻加冷水游泳法、煙熏加冰水法。煙熏材料有香煙、鋸末、刨花、煙葉、硫磺粉、艾條等。

4.2 肺氣虛證病證結(jié)合動物模型

王朝蘭等[19]采用煙熏及氣管滴入脂多糖(LPS)雙因素復(fù)合制作慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺氣虛證模型大鼠，通過觀察證候表現(xiàn)、檢測支氣管和肺組織形態(tài)病理學(xué)變化來判斷模型成功與否，最終發(fā)現(xiàn)該模型從形態(tài)到功能基本符合人類慢性阻塞性肺疾病肺氣虛證特點(diǎn)[19]。通過LPS氣管滴注復(fù)制COPD大鼠模型，模擬COPD臨床氣道炎細(xì)胞浸潤導(dǎo)致出現(xiàn)的黏液高分泌病理表現(xiàn)，并結(jié)合煙熏通過被動吸煙法制備COPD大鼠模型，復(fù)制COPD氣道重建、瘢痕形成、肺氣腫等結(jié)構(gòu)改變和中醫(yī)肺氣虛證特征。李振卿等[20]將大鼠置于特制的1 m×1 m×1 m的煙室中，用刨花、鋸末、煙葉各50 g，點(diǎn)燃熏煙，每日2次，每次30 min，持續(xù)30 d，采用改良煙熏法復(fù)制慢性支氣管炎肺氣虛證SD大鼠模型，再以益肺方藥加以干預(yù)，發(fā)現(xiàn)益肺方藥可通過降低機(jī)體TNF-α、IL-1β水平對慢支肺氣虛證產(chǎn)生治療作用。

中醫(yī)病證動物模型的建立是中醫(yī)藥科學(xué)實驗研究得以順利開展的前提，病證結(jié)合動物模型的成功建立對揭示中醫(yī)“證”的本質(zhì)、研究中藥復(fù)方的治療作用機(jī)制有巨大的推動作用，為中醫(yī)基礎(chǔ)理論的深入探索和與醫(yī)學(xué)知識的推陳出新提供必要條件。在今后的研究中，應(yīng)以氣虛病因及中醫(yī)辨證為基礎(chǔ)，以文獻(xiàn)研究為手段,選取既往關(guān)于氣虛證動物模型建立的文獻(xiàn)進(jìn)行分析、歸納、總結(jié),篩選相對完善的造模方式、材料及特異性評價指標(biāo)；并以藥物干預(yù)動物實驗的方法作為驗證方式，對所篩選的造模方法及檢測指標(biāo)進(jìn)行對比、分析、驗證，保證實驗的可重復(fù)性及可操作性，從而建立或復(fù)制出更為標(biāo)準(zhǔn)、完善、可行的氣虛證病證結(jié)合動物模型。